黑果枸杞多倍体诱导及鉴定

为了建立黑果枸杞多倍体诱导方法及快速、准确和高效的多倍体鉴定技术,以黑果枸杞二倍体种子经浸泡后的吸胀种子与萌动种子为材料,用不同浓度的秋水仙素进行不同时间的诱导处理,通过流式细胞仪测定细胞核DNA含量的方法对诱导后的植株进行倍性鉴定,并与传统的染色体计数、气孔密度和大小测定、叶绿素相对含量测定等不同方法进行比较。结果表明,0.1%的秋水仙素(内含2%的DMSO)可有效地诱导黑果枸杞萌动种子的染色体加倍,其中24 h处理的效果最好,诱导率为33.3%。经流式细胞仪细胞核DNA含量测定以及压片染色体计数等方法鉴定,获得的多倍体有四倍体、八倍体。在形态上,多倍体植株具有叶色深绿,叶脆,易折断,叶片加厚、卷曲,叶下表皮气孔增大,密度减少等特征。本研究建立的黑果枸杞多倍体诱导方法以及利用流式细胞仪进行细胞核DNA含量测定分析植株倍性技术可方便快速的培育出黑果枸杞多倍体植株,为黑果枸杞新品种选育提供参考。     

紫锥菊多倍体诱导与鉴定

本实验以紫锥菊愈伤组织上刚分化出的不定芽为材料,用不同浓度秋水仙素溶液对其进行诱导,确定最佳处理浓度和处理时间,并对诱导的多倍体与二倍体进行形态、显微、染色体及过氧化氢酶（CAT）活性的比较鉴定。结果表明：0．025％秋水仙素浓度处理24h的诱导效果最好,诱导率达42．85％;多倍体植株叶片肥厚、根粗壮,气孔面积极显著地大于二倍体植株,染色体数从24～28条不等,CAT平均酶活性是二倍体的2．1倍。     

杉木多倍体变异苗诱导及倍性鉴定

为了探究秋水仙素处理对杉木萌动种子的诱变效应,以3种杉木种子为材料,用0.9%的秋水仙素溶液浸泡处理后播种,60d后统计变异苗得率并用流式细胞仪检测变异苗不同部位的细胞倍性。结果表明,经秋水仙素溶液浸泡处理后,3种来源的杉木种子变异苗得率差异显著,全同胞种子Z3#得率最高,为23.45%;3种来源的杉木种子经秋水仙素处理后所得的变异苗均表现为胚根短缩,下胚轴下部明显膨大。流式细胞仪检测表明,胚根部分57.2%的细胞为混倍体细胞,下胚轴下部42.04%的细胞为四倍体细胞,下胚轴中部四倍体细胞所占比例为9.15%,下胚轴上部和子叶部分的细胞均为二倍体细胞;秋水仙素溶液浸泡种子可诱导获得表型特征及细胞倍性发生明显变异的变异苗。本研究结果为进一步开展杉木同源多倍体新种质的创制奠定了基础。     

秋水仙素诱导地锦多倍体研究

用不同浓度秋水仙素处理不同萌发时期地锦体细胞胚胎及丛生芽苗诱导多倍体,对多倍体植株进行染色体数目及稳定性检测。结果表明:(1)秋水仙素对地锦体胚及丛生芽的生长有不同程度抑制作用,对根系生长的抑制尤为明显。以0.05%秋水仙素处理48h以上对地锦体胚萌发有显著抑制作用,0.1%浓度处理96h产生完全抑制。(2)0.05%秋水仙素处理1cm体胚48h可诱导3.3%地锦体胚产生多倍体嵌合植株,多倍细胞比率40%。以0.1%秋水仙素处理地锦丛生芽24h,多倍体诱导率可达13.3%,多倍细胞比率62.5%~75%。说明秋水仙素处理丛生芽效果要好于处理体胚。(3)本实验诱导的多倍体植株全为混倍体,多倍细胞占40%~75%,但在无性增殖中有逐代下降趋势。(4)多倍体植株中出现4裂和5裂叶片的变异体。     

秋水仙素诱导甘菊多倍体研究

以甘菊种子为试验材料,研究了不同秋水仙素浓度和处理时间对甘菊多倍体诱导的影响。结果表明:500mg/L的秋水仙素水溶液浸渍种子12h,变异率为23%,达到了极显著差异。根尖染色体压片检查表明,四倍体染色体数为2n=4x=36,并且获得了同源四倍体甘菊1株(2n=4x=36)。四倍体植株表现出叶片下表皮气孔保卫细胞变大,叶绿体数变多,叶片变小,花径变大,舌状花数目减少,管状花数目增多。     

秋水仙素诱导石斛多倍体的初步研究

本实验以秋水仙素为诱导剂,对石斛杂交种Dendrobium utopia ‘Messenger’×Den. whiterabbit ‘Sakurahime’的二倍体试管苗进行了多倍体诱导、细胞学观察及染色体鉴定等研究。结果表明,当秋水仙素浓度为0.4 ~0.6mg/L时石斛的诱导率较高,最高时可达62.2%。变异植株的叶片变短变厚,假鳞茎明显增粗。在显微镜下观察到变异株的气孔长度和宽度约增加21.44%和28.30%,保卫细胞的长度和宽度约增加30.88%和24.98%。     

秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体研究

为探究秋水仙素处理对蝴蝶兰染色体加倍的效果,本研究以蝴蝶兰杂交组合H-03(2n=2x=38)的原球茎为材料,采用共培法诱导多倍体,秋水仙素浓度分别为0.05%、0.1%、0.2%,处理时间分别为5、10、15 d。结果表明,0.05%浓度的秋水仙素处理15 d效果最佳,变异率为50.00%,变异株存活率为30.00%;对处理后的植株进行流式细胞仪鉴定和染色体压片分析,发现变异株存在大量嵌合体;与对照相比,变异株形态特征表现为植株矮化、叶色加深、叶片表面粗糙、叶片变大、叶片偏短或偏圆等,部分植株表现出植株畸形或叶片扭曲;气孔观测结果表明,变异株气孔偏圆,单位面积气孔数减少,气孔增大,长、宽较对照分别增长76.45%、38.99%。本研究结果为蝴蝶兰体细胞无性系变异新品种的培育提供了参考。     

基于悬浮细胞培养的半夏多倍体诱导研究：Ⅱ.单细胞水平COLO诱导及多倍体植株再生

在建立了高效的半夏悬浮细胞培养和植株再生体系的基础上,本研究以悬浮细胞作为靶标材料,以秋水仙素（COLO）为多倍体诱导剂,对COLO诱导多倍体的适宜浓度等关键因素进行研究,并在获得多倍性细胞后,经诱导分化和再生形成纯合的多倍体植株。结果显示,0.05～0.10mg/ml的COLO处理24h,可获得较好的多倍体细胞诱导效...     

高温处理诱导染色体加倍获得白杨杂种多倍体

在掌握毛新杨×新疆杨合子有丝分裂规律基础上,对高温处理诱导毛新杨×新疆杨合子染色体加倍的技术条件进行研究。结果表明,在温室水培条件下,毛新杨×新疆杨合子第一次有丝分裂主要在授粉后7d;施加高温处理可有效诱导毛新杨×新疆杨合子染色体加倍,最高四倍体诱导率为7.4%,处理温度以39℃为宜;由于胚珠发育过程具有极强的不同步性,在诱导合子染色体加倍的同时还获得了部分三倍体植株。子代气孔特征观察显示:四倍体和三倍体植株都表现出多倍体特征,随着倍性水平增加,气孔增大,单位面积气孔数减少,与二倍体有显著差异。     

秋水仙素对黑麦有丝分裂及多倍体诱导的影响

本文研究了秋水仙素在不同浓度(0.01%、0.05%、0.10%、0.15%、0.20%)和不同处理时间(12、24、36、48、60和72h)对黑麦根尖细胞染色体、中期分裂指数、细胞加倍指数的影响。结果表明,秋水仙素处理使黑麦根尖细胞内染色体数目发生了变化,观察到的细胞内染色体数有14、28及56条不等;0.15%的秋水仙素处理24h,细胞的中期分裂指数最大,达到0.202%,同浓度秋水仙素处理36h,细胞加倍指数最高,达到0.096%。     

大白菜与结球甘蓝种间异源多倍体的鉴定

利用异源多倍体作为桥梁材料是克服远缘杂交障碍,创制新种质和进行品种改良的一种重要途径.本研究对已获得的大白菜(Brassica campestrisL.ssp.pekinensis (Lour.) Olsson)与结球甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)种间异源四倍体和异源三倍体,利用形态学、解剖学、分子标记及细胞学等方法进行比较鉴定.研究表明,多倍体在植株形态、花器官和气孔大小等方面均表现出巨大性和超亲优势,其中四倍体比三倍体表现普遍更明显.多倍体的气孔密度显著的低于双亲.多倍体花粉生活力比双亲降低,四倍体花粉活力为81.56％,三倍体的花粉活力仅有18.78％.多倍体自交结实性明显低于双亲,四倍体自交结实率仅为0.28％;四倍体作为母本与大白菜杂交结籽率比其反交要高,是反交的2.11倍,以三倍体为母本或父本时与大白菜杂交,结实均非常低,且三倍体自交未获得种子.相关序列扩增多态性(SRAP)标记结果表明,多倍体中包含了双亲的遗传信息,但分f标记并不能区分四倍体与三倍体.细胞学观察显示,四倍体的染色体数目为2n=4x=38,三倍体的染色体数目为2n=3x=29.大白菜-结球甘蓝异源多倍体的鉴定为进一步大白菜品种改良和新种质的创制提供了基础资料.     

EMS诱导粒用高粱的突变体筛选和鉴定

为确定粒用高粱EMS处理的最佳浓度和时间,并创制粒用高粱新种质,本研究以粒用高粱亲本系2055B和10125为试验材料,采用不同时间和不同浓度甲基磺酸乙酯（EMS）处理,调查EMS诱变对高粱出苗、叶色、叶形、穗型、育性及生育期等农艺性状的影响。结果表明,两粒用高粱亲本系的出苗率、幼苗成活率、结实率均随着EMS诱变时间和浓度的增加而降低,突变率则随着EMS诱变时间和浓度的增加而升高。同一水平EMS处理对两亲本的抑制作用不同,恢复系10125的出苗率、成苗率、结实率受抑制作用均小于保持系2055B。综合考虑出苗率、结实率和突变率等数据,2055B的最佳诱变处理时间和浓度为14 h和0.25%,10125的最佳诱变处理时间和浓度是14 h和0.3%。通过对诱变后M2代进行表型观察、鉴定和筛选,获得了早熟、矮秆、分蘖等性状的突变材料,初步构建了粒用高梁EMS突变体库,为开展高粱育种和功能基因定位提供了新种质和基础材料。     

迎阳报春四倍体诱导及鉴定

在离体培养条件下,研究了秋水仙素溶液处理对迎阳报春愈伤组织分化和多倍体诱导的效应。结果表明,秋水仙素处理明显抑制愈伤组织的分化,使死亡率增加;在试验浓度和时间范围内,以30mg·L-1秋水仙素溶液处理愈伤组织10d,四倍体诱导率最高,为23.08%;四倍体植株与二倍体植株相比,其气孔变大,且叶片变厚、变大,叶色浓绿、株型紧凑;二倍体植株染色体2n=2x=24,四倍体植株染色体2n=4x=48。     

温光因子诱导小苍兰成花的探讨

对小苍兰成花诱导促成,可提早在春节前后开花,提高经济效益。本试验对小苍兰球茎通过不同温度的冷藏处理,定植后又作了不同日、夜长度的光周期处理。其结果:13℃冷藏处理的效果最好,始花期较对照提前了50天;光周期处理的效果不明显。     

EMS诱导小麦品种烟农15突变体的鉴定和EST-SSR分析

用EMS对小麦品种烟农15进行诱变处理,以构建突变体库、创造小麦新种质,为小麦功能基因研究和小麦遗传改良提供基础材料。经过M2代筛选和M3代鉴定,得到11个农艺性状发生明显变异的突变系,其中籽粒大小和株高2个性状的变异幅度最大。11个突变系均有复合性状突变出现,将其分为3类突变表型:8个大粒、高秆突变系;2个半矮秆突变系;1个高秆、多蘖突变系。用715个EST-SSR引物对受体烟农15和4个M3突变系进行了分析,共有14个引物对在受体和突变系间能扩增出差异条带。其中12个引物对扩增结果的差异表现为条带的有无;2个引物对表现为扩增出长度不同的差异条带。     

二甲戊灵与秋水仙素离体诱导虎眼万年青多倍体发生的比较研究

以白花虎眼万年青(Ornithogalum thyrsoides)组培的丛生芽(2n=2x=12)为试验材料,采用溶液浸泡法,研究秋水仙素和二甲戊灵的不同浓度和处理时间对白花虎眼万年青多倍体的诱导效果,观察根尖细胞染色体数,叶片下表皮保卫细胞及叶片组织结构特征。结果表明:800μmol·L-1二甲戊灵浸泡24h,变异率达46.67%,0.05%秋水仙素处理48h,达42.22%,两种诱变剂诱导变异的差异虽不显著,但前者处理后材料存活率高于后者(前86.67%,后80.0%)。对变异的材料通过细胞学鉴定,发现两种诱变剂均能诱导出四倍体白花虎眼万年青。从处理时间短,材料死亡率低,对人畜伤害小,成本低,变异率较高以及两种诱变剂处理得到的多倍体气孔、叶片结构特征的相似性等综合条件考虑,可将二甲戊灵作为秋水仙素的替代品诱导多倍体。此外,对比二倍体与四倍体植株形态特征、叶片下表皮气孔数目及大小,可将气孔大小作为初步快速检测多倍体的有效方法。本试验用2种诱变剂诱导白花虎万年青多倍体,并从形态、气孔、叶片组织结构比较诱导前后差异,旨在为白花虎眼万青年多倍体新品种研究提供数据支持。     

高pH值和铁素对毛白杜鹃和迎红杜鹃根系Fe~(3+)还原酶活性的影响

以耐碱性不同的两种杜鹃花(毛白杜鹃和迎红杜鹃)的组培苗为材料,对其根系Fe3+还原酶活性与铁素和pH值间的关系进行研究,结果表明:培养最初阶段高pH值(NaHCO3提供)与铁素共同诱导根系Fe3+还原酶活性增加;Fe3+对根系Fe3+还原酶活性的诱导作用具有类似于代谢途径中的底物诱导效应;在10d的缺铁处理中,迎红杜鹃根系Fe3+还原酶活性增加,而毛白杜鹃没有增加,说明缺铁对酶活性的诱导存在种间差异;杜鹃花根系Fe3+还原酶活性与植物耐碱性存在正相关。     

宁明花山崖壁画岩桩木材的鉴定

花山岩桩经碳—14年代测定,距今2680±80年。其木材具导管及轴向树胶道;散孔材,单管孔分布;管孔弦向直径115～164微米。轴向薄壁组织环管束状、翼状、聚翼状及傍管带状。树胶道通常单个分布。该岩桩木材鉴定为毛坡垒(Hoppea mollissima C.Y.Wu)。     

野生杜鹃林土壤糖类和理化性质变化规律

为探明贵州百里杜鹃国家森林公园内杜鹃林凋落物层和土壤表层中的糖类物质和理化性质含量变化规律,揭示不同土壤层次物质的分布特点及差异。本研究采用常规方法测定土壤理化指标,通过衍生化处理气相色谱质谱联用(GC-MS)分析土壤中5种糖类物质及含量。结果表明:在所鉴定的5种糖类物质中,质谱匹配度平均为92.6%,其中有4种化合物的匹配度超过90%,平均相对标准偏差为9.6%。糖类物质垂直分布表现为凋落物层土壤表层腐殖质层,其中d-葡萄糖和蔗糖是土壤糖类组成的主要组分。土壤有机碳、全氮、全磷、全钾含量及p H值随土壤深度增加而逐渐递减,杜鹃林土壤糖类物质与土壤理化因子具有明显的相关性。     

长穗偃麦草逆境诱导cDNA文库的构建和初步鉴定

长穗偃麦草是小麦的野生近缘植物之一,具有抗多种生物胁迫和非生物胁迫的优良基因。为了从中发掘耐盐基因,分别用100、200、300、400 mmol·L~(-1)的Na Cl和20%、30%、50%(w/v)的PEG-6000处理长穗偃麦草幼苗,采用改良的SMART方法合成逆境诱导条件下的全长c DNA。采用Gateway技术中的BP反应构建长穗偃麦草全长入门c DNA混合文库,滴度为4.0×106cfu·m L~(-1),库容量为2.0×107cfu,插入片段平均长度为0.75 kb,重组率达98.9%。将该入门文库重组到植物转基因双元载体p MDC83中,获得目标文库,其原始滴度为6.0×106cfu·m L~(-1),库容量为3.0×107cfu,插入片段平均长度为0.45 kb,重组率达100%。通过农杆菌侵染萌发花粉再授粉的方法,获得转基因玉米T0种子,转化率达3%;用农杆菌侵染法将农杆菌与烟草BY-2细胞共培育,成功将目标文库转入到烟草BY-2细胞中,在培养基中加入潮霉素和不同浓度的Na Cl溶液,筛选获得耐盐细胞系69个。研究结果为大规模快速筛选鉴定植株水平和细胞水平上的抗盐基因奠定了基础。