南瓜胚囊再生植株倍性鉴定方法的比较

以南瓜胚囊再生植株为材料,采用形态学鉴定法、根尖染色体计数法和气孔保卫细胞叶绿体计数法3种方法对46株南瓜胚囊再生植株的倍性进行鉴定。结果表明:在46株再生植株中,有12株再生植株生长势弱、叶片较薄、叶脉不明显、分枝少、根系不发达,与其他倍性植株在形态上有明显差异;进一步进行染色体计数后,发现仅有7株再生植株的染色体数n=x=22,7株单倍体植株的保卫细胞叶绿体数的平均值为4.28个,正常二倍体组培苗的平均叶绿体数目为8.37个。说明形态学鉴定法只能作为倍性鉴定的一种辅助方法,而染色体计数法虽直接、准确,但效率低,气孔保卫细胞叶绿体计数法高效、简便。     

非洲菊大孢子再生植株倍性的快速鉴定方法

以非洲菊大孢子再生植株群体为材料进行倍性鉴定,并以染色体计数法的鉴定结果为依据,研究利用DNA流式细胞仪测定法、气孔保卫细胞叶绿体计数法和形态学特征鉴定非洲菊大孢子再生植株倍性的可靠性。结果表明,非洲菊大孢子再生植株是倍性水平不同的混合群体,倍性分布为单倍体、二倍体和混倍体,但不同基因型各倍性植株所占比例不同;根尖染色体计数法直观、准确,但因非洲菊染色体小且数目较多而导致计数困难;DNA流式细胞仪鉴定法的准确率达95%以上,可用于再生植株群体倍性的快速鉴定;气孔保卫细胞叶绿体计数法的准确性还有待进一步探讨;植株形态鉴定法受培养条件及评定标准的影响较大,准确率偏低。     

茄子花药培养再生植株倍性鉴定

采用细胞中染色体计数、叶绿体计数和叶片下表皮气孔大小观测等方法,以植株来源的原始二倍体为对照,对茄子花药培养获得的7个植株进行倍性鉴定。结果表明:7个再生植株中,5株为单倍体,1株为二倍体,1株为四倍体。根尖细胞染色体计数法是鉴定单倍体的最佳方法;多倍体可以采用减数分裂过程进行倍性鉴定;表皮气孔大小、保卫细胞中叶绿体数目、成株期叶形指数均可以作为倍性鉴定的间接方法;3种间接鉴定方法结合植株结实和结籽性,可以准确鉴定植株倍性。     

西葫芦胚囊植株生殖特性

考察了经未受精胚珠离体诱导获得的西葫芦再生胚囊植株及其3个自交世代的生殖特性。单倍体胚囊植株高度不育,无法获得自交后代。绝大多数双单倍体（DH）胚囊植株及其3个自交世代的花器特征、开花进程等与二倍体供体一致。DH植株当代的花粉萌发率为15.52%~42.67%,花粉量偏少,自交单果结籽数明显少于二倍体供体。DH植株3个自交世代的花粉萌发率为17.62%~42.70%,均低于二倍体供体,各自交株系的花粉生活力在3个自交世代间保持稳定,但花粉量仍偏少。交叉授粉验证结果显示,DH植株当代及其3个自交世代的雌性生殖能力接近二倍体供体,雄性生殖能力明显低于二倍体供体,但未呈现持续下降趋势。DH植株3个自交世代的种子发芽率均在92%以上,自交种子具可稔性。     

辣椒花药培养再生植株的倍性鉴定

为指导辣椒单倍体育种技术在实践中的应用,对辣椒8024花药培养再生植株的染色体倍性进行鉴定,以DNA流式细胞仪测定法的鉴定结果为依据,研究利用染色体压片计数法和花药培养再生植株形态及坐果情况鉴定辣椒花药培养再生植株倍性的可靠性。结果表明,花药培养再生植株是倍性水平不同的混倍群体,但各倍性植株所占的比例不同,DNA流式细胞仪测定法和染色体计数法的吻合度达93%,与坐果鉴定结果一致。鉴定结果可直接决定其结籽情况。     

羽衣甘蓝小孢子再生植株的倍性鉴定及加倍

为了提高羽衣甘蓝小孢子植株中二倍体比例,以波浪叶红心、皱叶红心、红欧、白欧为供试材料,利用流式细胞仪对其小孢子再生植株的倍性进行分析,采用秋水仙素溶液对单倍体植株和游离小孢子进行诱导加倍。结果表明:含75 mg/L秋水仙素的培养基处理单倍体试管苗,波浪叶红心与皱叶红心的双单倍体比例分别为20.0%、5.0%,效果较差;1 000 mg/L秋水仙素溶液浸根处理的波浪叶红心与皱叶红心的双单倍体比例分别为53.3%和25.0%,效果较好;50 mg/L秋水仙素溶液处理小孢子36 h,4份材料的加倍效果均最好,其中红欧双单倍体比例高达55.6%。     

烟草花粉植株染色体倍性苗期快速鉴定

为了提高烟草单倍体育种中花粉苗的利用效率,采用气孔保卫细胞叶绿体计数法对花粉植株染色体倍数性鉴定进行了研究.结果表明:单倍体、二倍体、多倍体的叶绿体数平均值分别为11.559,20.458,35.056个,差异极显著;通过对叶片进行失水处理,解决了幼嫩叶片不易制片的问题,结合第3,5,8,13,17叶的叶绿体数分布,将鉴定时期提到了移栽前的第5叶,得出了每株只计数1个气孔叶绿体数的一种快速、准确的计数方法--叶绿体数倍性分界法.该方法准确率高达98.5%.     

柑橘愈伤组织植株再生及其倍性鉴定

愈伤组织保存是柑橘种质资源保存的一条值得探索的途径,具有节省人力、物力、财力以及避免自然灾害和病虫害等优点。研究表明[1],待测的35种基因型的愈伤组织中,只有9种具有体胚发生能力。对于具有体胚发生能力的愈伤组织,它们能否长成正常的植株,这对于利用愈伤组织进行细胞融合或遗传转化等生物技术研究具有非常重要的指导意义。本试验以具有体胚发生能力的8种愈伤组织为试材,分析其体细胞胚胎发生能力与再生植株生长状态的关系,通过改变培养基配方来诱导胚性愈伤组织畸形胚状体分化,为细胞融合和遗传转化提供参考。通过鉴定再生植株的倍…     

甘蓝游离小孢子培养及再生植株倍性鉴定研究

对108个甘蓝品种进行游离小孢子培养,计算出胚率,分析表型与出胚难易的关系。经流式细胞仪对其再生植株进行倍性鉴定,计算自然加倍率。以流式细胞仪的结果为基准对再生植株叶片气孔保卫细胞周围叶绿体数目,保卫细胞长、宽以及周长规律进行研究。结果表明:具有圆球、早熟、春甘蓝3个特性的甘蓝品种易出胚,而扁球、中熟、晚熟以及越冬甘蓝不易出胚;再生植株的自然加倍率会因基因型的不同而有较大差异;不同倍性的再生植株叶片保卫细胞周围叶绿体平均个数所得规律为:单倍体6~9个,二倍体9~12个,四倍体12~23个,且随着倍性的增加,叶绿体个数分布范围更加广泛。保卫细胞长度变化范围为:单倍体18~23μm,二倍体25~35μm,四倍体35~45μm。保卫细胞周长变化范围为:单倍体60~75μm,二倍体75~95μm,四倍体100~115μm。保卫细胞宽度随气孔大小变化而差异较大,规律不明显。在保卫细胞长度和周长均能说明倍性的情况下,显然通过测量保卫细胞的长度来判定倍性的方法更为简便。     

烟草花粉植株染色体倍性的早期快速鉴定

显了提高烟草单倍体育种效率,对用叶绿体计数法鉴定植株染色体倍性进行了研究。其结果是：以展开第５叶为材料,用植株气孔保卫细胞叶绿体数倍性分界法能早期、快速判定经秋水仙碱处理的烟草花粉植株是单倍体、二倍体或多倍体,其判定结果与开花结实情况有非常高的吻合率,且判定每株仅需１￣２ｍｉｎ。     

菊芋快速繁殖与植株再生研究

以菊芋幼茎、块茎为试验材料,比较不同激素浓度配比对外植体培养的影响研究.结果表明:幼茎是试验的 最佳外植体,愈伤组织诱导快,且有腋芽发生;不定芽分化适宜培养基是MS BA2.0mg/L NAA0.01mg/L, 不定芽分化率100%;在增殖培养基中不定芽增殖系数达3.25,切分后的茎段分化腋芽或不定芽的增殖系数平均为 9.6;不定芽在MS NAA0.01mg/L培养基上生根率为93%,试管苗经炼苗后移栽成活率达到91.5%.     

流式细胞术鉴定苹果花药培养再生植株倍性的方法

苹果花药培养再生获得的纯合基因型植株倍性各异。为了进一步在育种和遗传分析中应用这些株系,需要准确鉴定其倍性,而流式细胞术测定植物细胞DNA含量是一种简单、快速、精确的倍性鉴定方法。试验用4种不同的解离液对苹果花药培养再生植株的叶片样品进行解离,并进行了DNA含量检测。结果表明,WPB解离液解离样品后上机检测,主峰高且明显。利用WPB解离液对苹果花药培养再生植株叶片进行解离,解离后不经过离心,直接染色,是用流式细胞术鉴定苹果花药培养再生植株倍性的最佳方法。     

辣椒根尖预处理及植株倍性鉴定

采用0.1%秋水仙素、0.002 mol/L 8-羟基喹啉和冰水3种试剂对辣椒辛香8号花药培养再生植株根尖进行预处理,研究不同预处理对根尖细胞中期分裂相的影响效果,并对辣椒花药培养再生植株进行倍性鉴定,以期获得辣椒染色体计数的最佳预处理。结果表明:3种预处理中,利用0.1%秋水仙素对辣椒根尖预处理3 h,细胞的中期分裂指数最高,达56.6‰,而且染色体分散度好,染色体分裂相多,比较适合染色体计数;经染色体计数鉴定得出5株花药培养再生植株中有4株双倍体和1株单倍体,可用于下一步育种实践中。     

不结球白菜游离小孢子培养及再生植株的倍性鉴定

对影响不结球白菜小孢子培养和植株再生的几个因素及再生植株的倍性进行分析.结果表明:基因型是影响小孢子胚诱导率的最重要因子,正反交材料的胚诱导率无显著差异;供体植株开花后6～10 d培养可获得高的胚诱导率;琼脂在8～12 g·L-1范围内,随着质量浓度的提高可显著提高小孢子胚再生率.结合流式细胞仪和植株形态鉴定,不结球白菜小孢子再生植株自然加倍率总体水平较高,有的高达90%,但不同基因型间有明显差异.     

小麦根尖染色体制片及植株倍性鉴定

[目的]探讨小麦根尖染色体制片的最佳技术参数,并对小麦远杂组培苗进行倍性鉴定。[方法]以品种郑麦9023为材料,通过种子催芽、种子根根尖压片试验对小麦根尖的染色体制片方法进行探讨,找出最适合的技术参数,用于小麦远杂组培苗的根尖染色体压片试验,并对其倍性进行鉴定。[结果]利用冰水混合物处理根尖可代替浓度0.1%秋水仙素的作用;根尖的酸解时间宜控制在9.5～10.0min;夏季染色时间宜在5 min以内,冬季染色时间宜在10～15 min。经染色体压片计数得到该小麦组培苗的染色体数为21条,鉴定其为小麦单倍体苗,可进行下一步育种。[结论]该研究对指导单倍体育种具有重要作用。     

不同熟性大白菜小孢子植株倍性变异及倍性鉴定方法

对不同熟性的大白菜小孢子植株群体的倍性变异进行观察,研究利用DNA流式细胞仪测定、形态学特征鉴定大白菜小孢子植株群体的倍性变异.结果表明,小孢子植株是倍性水平不同的混合群体;不同熟性的大白菜小孢子植株群体的倍性分布不同,中晚熟大白菜小孢子植株双单倍体比例最高,春大白菜最低;单倍体植株在组培无性繁殖中部分会自然加倍;DNA流式细胞仪和形态学方法均可以鉴定群体的倍性水平.     

百合的离体培养及再生植株的快速繁殖

以川百合鳞片为外植体进行离体培养，获得了再生植株，并建起快速繁殖无性系。诱导芽的最适培养基为MS 1．0mg／L 6-BA 0．1mg／L NAA．平均每个外植体增殖个数为4．1；分化继代最适培养基为MS l.0mg／L 6-BA 0．5mg／L NAA，每代每株平均增殖3～4个芽；生根最适培养基为1／2MS 0．5mg／L IAA，10d后每株可长出4～6条根。     

翅果油树茎尖快速繁殖与植株再生研究

以胡颓子科胡颓子属的翅果油树茎尖为试材,对茎尖快速繁殖与植株再生的影响因素进行了研究。结果表明:外植体表面灭菌后使用100 mg.L-1的抗生素溶液处理30 min,未污染率达92%,效果最好;初代培养和增殖培养的最适培养基为MS+BA0.5+NAA0.01;但在增殖培养中,适宜芽苗伸长的培养基为MS+BA0.5+IBA0.4;适宜的生根培养基为1/2MS+IBA1.5;将试管苗移栽在腐叶土∶蛭石=2∶1的基质中,成活率达66%。     

萝卜小孢子植株倍性鉴定研究

以萝卜游离小孢子再生植株为试验材料,采用形态学观察、根尖染色体鉴定、流式细胞测定等方法进行了倍性检测.结果表明,由游离小孢子培养获得的植株中同时含有单倍体、双单倍体和多倍体.来源不同的小孢子培养获得的植株倍性比例不同,不同倍性植株具有不同的形态特征.根尖染色体鉴定是植株倍性鉴定最为准确的方法.流式细胞测定可快速进行倍性测定,且准确率较高.     

山杨再生植株的繁殖

于1985年通过山杨(Populus davidiano)形成层、顶芽、腋芽的组织培养,成功的获得了再生植株,为当前生产大量繁殖山杨无性系优质苗提供了新的手段。 通过愈伤组织途径诱导再生植株,是以形成层为材料。诱导愈伤组织的培养基为ACM+BA_1+NAA_2或2.4—D_2mg/l+蔗糖2％,愈伤组织诱导率为73.6％,结构致密;诱导器官分化培养基为ACM或1/2MS+BA_(0.5)mg/l+NAA_(0.05-0.01)mg/l+蔗糖2％,最佳分化率为83.3％。 通过芽培养诱导再生植株,是以顶芽腋芽为材料,利用7个组合培养基试验比较,诱导芽分化最佳培养基为ACM+BA_(0.3-0.5)mg/l+NAA_(0.02-0.05)mg/l+蔗糖2％;适宜取材期为萌动期,其次是休眠期。 诱导初期休眠芽的分化,在适宜激素培养基中,另加20mg/l的精氨酸,芽的分化率有较明显的提高。 诱导生根培养基为1/2MS或ACM+IBA_(0.3-0.5)mg/r+糖蔗2％,生根率达77.8％。