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[目的]筛选对花椒籽油具有偏好性的脂肪酶产生菌。[方法]采用甘油法和气相色谱相结合的方法,从实验室分离到的11株具有甲醇耐受性脂肪酶菌株中筛选对花椒籽油具有转酯活性的菌株,并进行了最佳产酶条件的优化。[结果]11株菌株中以D-1-4菌脂肪酶催化花椒籽油的转酯率最高,达到43.05%;其最佳产酶条件为:以2.5%蔗糖为碳源、2.0%黄豆粉+1.0%玉米粉为复合氮源、1.0%橄榄油为诱导物,在初始pH 6.0、30℃培养48h时脂肪酶活力达到79.30U/ml。[结论]为脂肪酶产生菌及其脂肪酶的应用提供了依据。 相似文献
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高产脂肪酶菌株的筛选鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
通过变色圈法和透明圈法从泥土中筛选出脂肪酶产生菌,并根据菌株的菌落形态、革兰氏染色和16SrDNA序列分析确定筛选得到菌株的种属。采用罗丹明B(Rhodamine B)平板初筛出51株脂肪酶产生菌,以荧光圈直径或透明圈直径与菌落直径的比值(HC)为指标,选取HC1.60的9株脂肪酶产生菌,采用橄榄油乳化液平板进行复筛,对HC进行测量比较筛选出1株高产脂肪酶的菌株L-17,其HC为2.27。利用透明圈法对菌株L-17的粗酶液的酶活力进行测定,HC为3.07,表明菌株L-17具有较高的酶活力。菌株L-17经初步鉴定为洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia),为一株高产脂肪酶的菌株,具有潜在的研究和开发价值。 相似文献
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产脂肪酶微生物的筛选鉴定及脂肪酶lipA基因克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
以橄榄油为唯一碳源对富含油污土壤中产脂肪酶微生物进行富集培养,以溴甲酚紫为指示剂进行初筛,结合橄榄油乳化液滴定法测定酶活力,得到酶活力较高的产脂肪酶菌株Y19,其粗酶活力为16.88 U/mL,经16S rDNA初步鉴定为枯草芽孢杆菌。通过特定引物PCR扩增菌株Y19脂肪酶lipA基因,构建pET32a-lipA重组表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。以表达菌的细胞裂解物进行生物柴油转酯试验,GC/MS结果显示,重组脂肪酶lipA粗酶液催化的转酯产物中脂肪酸甲酯成分与生物柴油十分相近。 相似文献
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产脂肪酶菌株的筛选及其脂肪酶的双水相分离 总被引:1,自引:0,他引:1
从土壤中筛选到了两株产脂肪酶的菌株真菌A和真菌B。测定二者酶活,并对真菌B所产脂肪酶的双水相萃取体系进行了优化。结果表明,真菌A酶活为26.5U/mL,真菌B酶活为15.0U/mL,而真菌A比酶活为6618.62U/g,真菌B比酶活为7332.20U/g,选取真菌B为研究对象。最佳PEG分子量为2000,最佳PEG浓度为200g/L,最佳硫酸铵浓度为250g/L。 相似文献
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耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]筛选耐甲醇脂肪酶产生菌,并对其酶学性质进行研究。[方法]采用培养基中添加不同浓度甲醇(0、5%、10%、15%、20%)的方法筛选甲醇耐受性脂肪酶产生菌,形态学和ITS序列分析确定菌株的种属关系,硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose FF纯化脂肪酶,并对纯化的酶进行耐甲醇试验和酶学性质研究。[结果]筛选到183株脂肪酶产生菌,菌株SXL-107对浓度20%甲醇具有较好耐受性,脂肪酶活力达104 U/ml;ITS同源性分析确定该菌为Galactomyces geotrichum;经过纯化的SXL-107脂肪酶在浓度10%甲醇溶液中作用48 h后,剩余酶活为96.15%;该酶最适温度为40℃,pH为7.0,50℃温浴60 min仍有80%的酶活力,在pH 4.0~9.0间稳定,微量的Mg2+、K+和Zn2+对该酶有激活作用,Mn2+和CO2+有抑制作用,分子量约为66 kDa。[结论]筛选到一株耐甲醇能力较强的脂肪酶产生菌,为该酶在生物柴油中的应用奠定基础。 相似文献
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【目的】筛选高产脂肪酶菌株并鉴定其种属,研究脂肪酶的酶学性质.【方法】以橄榄油为唯一碳源对富含油污土壤中产脂肪酶微生物进行富集培养,用中性红平板进行初筛,结合改进铜皂分光光度计法测定酶活力;对筛选的高产脂肪酶菌株进行形态学观察和相关生理生化实验,再结合16S rDNA序列分析确定其种属;确定该菌株所产脂肪酶的最适作用温度和pH值,并研究金属离子、有机溶剂以及表面活性剂对酶活的影响.【结果】筛选得到一株高产脂肪酶菌株LZ-5,其所产脂肪酶的酶活力为4.78 U/mL;菌种鉴定为表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis).该酶最适作用温度为40℃,最适pH值为9.0;Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶活力有促进作用,Fe~(2+)、Zn~(2+)、EDTA、SDS、甲醇和乙醇对酶活力有抑制作用,对Na~+、K~+、丙三醇的耐受力较高.【结论】成功分离一株表皮葡萄球菌高产脂肪酶菌株. 相似文献
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从土壤中分离纯化出高产脂肪酶的菌株,通过在360nm紫外光下比较罗丹明B(Rhodamine B)筛选培养基中荧光圈的大小后得到7株菌株。利用对硝基苯酚-分光光度法测定目的菌株的酶活大小对菌株进行复筛,最终得到一株酶活较高的菌株Youzh-1,经细菌形态观察,16S rRNA序列分析,确定其为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens strain ORTB3)。对此菌株进行发酵条件的优化,首先对发酵条件进行单因素的优化,在单因素实验的基础上对Youzh-1设计Box-Behnken实验进一步优化培养基最终得到最优发酵条件为葡萄糖18.825g/L、牛肉膏25.98g/L、,氯化钠10g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、橄榄油乳化液12ml/ml,在温度41℃、pH6的条件下进行发酵实验验证,经过测定发现其脂肪酶粗酶酶活为79.87U/ml,相比初始酶活37.67U/ml提高了112%。这为脂肪酶的工业化生产提供了理论依据。 相似文献
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分离筛选脂肪酶高产菌株,为生物降解富含油脂的工业及生活污水提供菌种资源.从校园食堂附近土壤中分离微生物,结合中性红油脂平板筛选法与三丁酸甘油酯平板透明圈法筛选脂肪酶高产菌株.根据菌株形态特征、生理生化特性以及分子生物学特征鉴定高产菌株,进而利用酸碱滴定法定量测定脂肪酶酶活,探究该菌株产生脂肪酶的最适酶促反应温度、pH值等酶学性质.研究结果表明,筛选获得的脂肪酶产生菌SLB-1为革兰氏阳性芽孢杆菌;硝酸盐还原呈阳性,能够水解淀粉和液化明胶;基于16SrDNA的系统发育分析结果表明SLB-1菌株与登录号为NR116240甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)处于同一最小分支,故将SLB-1菌株鉴定为甲基营养型芽孢杆菌,命名为B.methylotrophicus SLB-1,该菌株产脂肪酶的最适培养时间是24h,酶促反应的最适温度为30℃,最适pH值为7.0.本研究分离鉴定了脂肪酶产生菌Bacillus methylotrophicus SLB-1,且由该菌所产生的脂肪酶为中性常温酶. 相似文献
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通过固体平板法,从温泉水样中筛选出1株耐热脂肪酶产生菌X-33。对该菌株进行了产酶条件的初步探索,得出其摇瓶发酵条件为:2%可溶性淀粉,3%酵母膏,MgSO4·7ddH2O 0.1%,K2HPO40.1%,三丁酸甘油酯乳化液0.1%,起始pH值7.5,通气量50 mL/250 mL摇瓶,250 r/min,发酵温度37℃,发酵周期24 h。该酶在60℃条件下温浴30 min,可保留部分活性。为鉴定该菌株,克隆并测序了其16S rDNA基因序列,NCBI上比对分析表明,该菌株与sphingomonas yabuuchiae(鞘氨醇单胞菌)有最紧密的亲缘关系。 相似文献
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一株碱性脂肪酶产生菌的分离鉴定及其产酶条件 总被引:2,自引:1,他引:1
从富含油脂的土壤中分离到90余株产脂肪酶的菌株。其中一株酶活较高的菌株N24液体发酵酶活达到19.5u·mL^-1。经细胞形态学分析、Biolog生理生化分析和16SrDNA序列比较表明该菌为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。对该菌株的液体发酵实验表明其最佳发酵培养基为:蛋白胨2.0%,可溶性淀粉3.0%,橄榄油1.0%,(NH4)2SO4 0.1%,MgSO4·7H2O 0.075%,K2HPO40.1%。该菌产生的脂肪酶最适反应温度为55踞,最适pH为9.0,属于碱性脂肪酶。该酶具有良好的热稳定性,在60℃处理60min酶活性基本保持不变。 相似文献
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以本公司菌种保藏室的产脂肪酶黑曲霉菌株AG007作为出发菌株,通过常温常压等离子体(ARTP)诱变筛选得到突变株A45-72,其产脂肪酶的活力较AG007提高了86%。再对A45-72进行亚硝基胍(NTG)复合诱变,得到突变菌株GH-73,其摇瓶发酵酶活达到2 350 U/m L,较出发菌株AG007提高了1.2倍,将GH-73传到第10代,其产酶较稳定。摇瓶中添加2.5%橄榄油作为诱导剂时,产酶能力达到2 875 U/m L。通过酶学特性研究发现,其最适作用温度为30℃,且在0℃左右保留30%的活性,是一种低温脂肪酶。 相似文献
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通过对41株产酸芽孢杆菌Bacillus培养物的HPLC分析及抑菌活性和芽孢形成检测,筛选出3株能产生乳酸、有抑菌活性、易形成芽孢的乳酸芽孢杆菌.通过形态染色特性观察、Biolog系统鉴定及16S rDNA碱基序列分析,初步鉴定3株菌为芽孢杆菌SCBacillus sp.SC、芽孢杆菌TRB.sp.TR和蜡状芽孢杆菌SL1 B.cereusstrain SL1.动物饲养试验显示,乳酸芽孢杆菌益生素能提高三黄鸡血清钙、磷、总蛋白、球蛋白、溶菌酶、IgG、IgA含量及脾脏、胸腺和法氏囊指数;饲料中添加5 g/kg的乳酸芽孢杆菌益生素,可使56日龄三黄鸡的平均日增质量提高13.61%,料质量比降低18.37%. 相似文献
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以蜂蜜、蜂巢和蜂场土壤作为菌种来源,筛选赤藓糖醇产生菌株。结果表明:不同样源分离结果差异很大,蜂巢最好,蜂蜜次之,土壤最差;筛选到单产赤藓糖醇菌株8株,其中菌株T-3-2赤藓糖醇的产量达到56.4mg/mL,产量性能稳定;初步鉴定菌株T-3-2为耐高渗酵母菌。 相似文献