浙江部分茶树良种的RAPD分子鉴定

用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对目前浙江省推广的浙农121，迎霜，福鼎大白茶，浙农139等10个优良品种进行分析，共扩增到97条RAPD谱带636个位点，平均每个引物扩增RAPD谱带和位点约8．1条53个位咪，平均每个品种为9．7条63．6个，其中呈现出多态性的谱带72条，多态性占总带数的74．2％，供试品种经扩增产生5条－12条不等的谱带，说明引物的不同，RAPD标记谱带也随着产生差异，引物S16能在各品种扩增后产生特异性的分子标记，可以用来鉴定这些茶树品种，10个品种间遗传距离变化范围在0．3358－0．5774之间，平均为0．4732，其中浙农139和浙农113之间亲缘关系密切，类平均法聚类结果表明，这10个茶树品种可分成A、B、C三个类群。     

3种分子标记分析油菜品种间的多态性效率比较

应用RAPD、SSR和AFLP三种分子标记,对甘蓝型油菜恢复系垦C1和保持系1141B、32B的多态性进行了分析.在648条RAPD引物、196对SSR引物、414对AFLP引物中,两组合材料具有多态性的引物分别为172条和167条,131对和133对,147对和141对,而重复性好、多态性比率高的引物分别有78条,50对,120对组合;结果表明,平均每个(对)引物可以扩增出多态性片段数目为RAPD 2.1个,SSR 2.6个,AFLP引物12.7个.AFLP多态性检测效率高.AFLP、SSR是研究油菜遗传多样性比较有效的分子标记.     

云南紫稻细胞质无花粉型三系及杂种F1的AFLP指纹图谱的构建与分析

利用AFLP分子标记对云南紫稻细胞质无花粉水稻三系及杂种F1进行了指纹图谱的构建与比较分析。从14对引物中筛选出8对具有明显多态性的引物。天香018（天香A×珞恢018)材料组（不育系、保持系、恢复系及杂种F1）共扩增出179条带,其中有52条多态性谱带,占总带数的29.05％,平均每对引物可以扩增出6.50条多态性谱带;天香806(天香A×珞恢806)材料组(不育系、保持系、恢复系及杂种F1）共扩增出177条带,其中有50条差异带,占总带数的28.25％,平均每对引物可以扩增出6.25条多态性谱带。特别明显的是在引物对E ATG/M CAC的扩增中,在AFLP指纹图谱中出现两条特征带（a带和b带）,为保持系所特有,能够明显区别于不育系、恢复系和F1。在另外一些引物对中也观察到不育系与保持系之间的差异带。     

南昆山毛叶茶和云南大叶种的RAPD分子标记研究

采用RAPD分子标记技术对南昆山毛叶茶和云南大叶种进行DNA分子标记研究。从300个随机引物中筛选出36个有效引物共产生4382条DNA片段,平均每个单株扩增出109.55条带,片段大小分布在0.15 kb～3.70 kb之间。在扩增出的315条不同分子量的DNA谱带中,21条是单态的,294条是多态的,多态性高达93.33%,其中云南大叶种多态性谱带达286条,多态性为90.79%,南昆山毛叶茶多态性谱带有265条,多态性为84.13%。通过类平均聚类(UPGMA)法,绘制出南昆山毛叶茶与云南大叶种DNA之间的遗传关系树状图。     

福建余甘子遗传资源的RAPD分析

以福建省34份余甘子遗传资源为材料,采用20个具特异扩增的多态性引物对福建省34份余甘子基因型进行扩增,20个引物,在34份供试材料中总共扩增出259个位点,且均是多态的,多态性程度达100%,平均每个引物扩增12.95个位点。同时,获得了19个引物对23份材料扩增的RAPD特征标记47个,17个引物在36对材料上共扩增出36个共享特征RAPD标记;采用ED(欧氏距离)法进行RAPD标记的聚类分析则可将福建34份余甘子遗传资源明显划分为惠安余甘和莆田余甘两大类。各供试材料之间的遗传距离范围为0.00～1.00,其中栽培品种与野生资源之间遗传距离在0.43～1.00之间;莆田余甘资源与惠安余甘资源之间遗传距离为0.27～0.99。     

利用RAPD进行茶组植物遗传多样性和分子系统学分析

对张宏达系统山茶属茶组植物24种、变种的遗传多样性和分子系统学进行了RAPD分析。从冬梢中获得了高质量和高得率的基因组DNA, A260/A280平均为1.71,平均得率为331μg/g鲜重。从Operon技术公司的61个十聚体随机引物中筛选出15个用于茶组植物的RAPD扩增,在所扩增得到的107条可重现谱带中(平均7.1条/引物)有102条(平均6.8条/引物)是多态的,多态性程度是95.3%。每个引物扩增的谱带数在211条之间,相对多态性频度在0.04—0.96之间,不过总平均多态性频度只有0.30,     

墨兰"达摩"芽变叶艺品种亲缘关系的RAPD分析

利用RAPD分子标记对10个墨兰叶艺品种进行亲缘关系分析。从100个10碱基随机引物中筛选出17个多态性高的引物,共扩增出159条DNA带,其中137条(86.2%)为多态带,平均每个引物扩增DNA带数9.3条。10个叶艺品种之间的Dice相似系数变化范围为0.598-0.813,平均相似系数为0.706。RAPD扩增结果的UPGMA聚类分析的结果表明,墨兰叶艺品种间的亲缘关系与形态学分类结果基本一致,而且还与品种来源地密切相关。     

我国杂交水稻主要恢复系的DNA多态性研究

利用RAPD引物对我国杂交稻主要的31个恢复系进行了DNA多态性分析。从152个随机引物中筛选出48个引物扩增恢复系的基因组DNA,选取9个引物的扩增结果进行分析,共获得78条带,其中61条带为多态性标记,每个引物平均提供8.7个标记信息。由UPMGA方法得到的聚类分析结果表明了31个恢复系间的亲缘关系,聚类结果与它们的系谱关系基本吻合。     

柱花草种质遗传多样性的SSR和SRAP分析

应用SSR和SRAP标记,对20份柱花草种质的遗传多样性进行研究。从113对SSR引物中筛选出41对多态性较好的引物,共扩增出229个位点,多态性比率达76.86%,平均每个引物扩增多态性位点4.29个。从224对SRAP引物中筛选出25对多态性较好的引物,共扩增出359个位点,平均每个引物扩增多态性10.72个,多态性比率达74.65%。综合SSR和SRAP两种标记对20份材料计算出的遗传相似系数(GS)为0.65~0.90,表明柱花草种质遗传多样性比较丰富;通过UPGMA聚类分析,把这20份材料聚为3个类群,其中类群Ⅰ又分为4个亚类。     

分子标记与甘蔗育种群体划分

利用RAPD标记分析19个杂交亲本音质遗传差异研究，结果表明：26个引物在19个材料间共扩增出279条带，其中182条带（占65.2%)具有多态性。每个引物可扩增2-18条多态性带，平均为7条，并通过聚类分析建立了它们的树形图。     

利用RAPD和微卫星标记对协优杂交稻及其亲本进行区别与鉴定

选用400个随机寡核苷酸和40个荧光标记的微卫星引物对,对我国主栽的协优杂交稻组合及其亲本进行多态性分析。RAPD分析显示,400个随机寡核苷酸引物中,有364个能够在供试基因型材料中扩增出肉眼可见的DNA条带,其中28个显示扩增的多态性,这中间9个引物产生的13条多态性条带具有清晰、易分辨的特点,可以在供试的水稻组合与亲本之间,以及杂交组合之间进行区别和鉴定。微卫星分析指出,40对荧光标记引物中,13对引物产生的31条标记带,能够在供试基因型材料中显示稳定的多态性,且杂种表现为双亲的互补型。与RAPD相比,微卫星分析具有多态性强、精确性高和重复性好的特点。     

Diversity Analysis in Selected Non-basmati Scented Rice Collection

Diversity analysis among 23 rice varieties including 16 non-basmati scented accessions, 5 basmati accessions and 2 non-scented accessions was performed by random amplified polymorphic DNA (RAPD) and inter-simple sequence repeat (ISSR) marker systems. The varieties analyzed by 11 RAPD and 8 ISSR primers yielded an average of 65% and 80% polymorphism, respectively. The average number of polymorphic bands generated per RAPD primer was 6 and per ISSR primer was 5.87. RAPD and ISSR data analysis individually could not segregate basmati and non-basmati scented rice accessions. However, the analysis using a combined data could group basmati and non-basmati scented rice accessions separately. The bands present specifically among three accessions of non-basmati scented rice were also identified. The study revealed a high genetic diversity among non-basmati scented rice accessions.     

Estimation of genetic variation and relationship in potato (Solanum Tuberosum L.) cultivars using AFLP markers

Amplified fragment length polymorphism (AFLP) markers were used to distinguish commercial cultivars and to assess the level of polymorphism in potato. AFLP analysis templates were made using Eco RI and Mse I as described in the Gibco BRL AFLP kit protocol. Seven primer combinations with three selective nucleotides on both primers were screened individually with 12 potato cultivars. Multiple polymorphisms could be detected in a single reaction to the extent that all 12 commercial potatoes tested could be distinguished using any one primer combination. Up to 84 polymorphic bands were detected with a single primer combination among 12 accessions. The seven primer combinations generated a total of 466 bands, of which 409 (88%) were clearly polymorphic among the cultivars. The presence or absence of each AFLP markers was scored and then phylogenetic and genetic distance analyses were used to generate dendrograms showing genetic relationships among the cultivars evaluated. The analyses based on amplified DNA fragments did not always reflect the known genetic relationships among the cultivars. These results demonstrate that AFLP DNA markers can be of great value in identification and measurement of variation, but should be treated with caution for purposes of estimating true measures of genetic similarity in potato.     

应用RAPD分子标记分析“晚绿”品种的杂交亲本

应用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术对茶树无性系品种“晚绿”进行亲子关系分析。所用 10 8条随机引物中的 93条引物对日本静冈和枕畸两地取样的 6个无性系茶树品种的 8份材料的基因组DNA分别扩增出 1- 8条谱带 ,平均每条引物 3 5条。其中 19条引物扩增出“晚绿”与其母本“数北”不同的RAPD分子标记 30个。从中选择 6条引物对 8份供试材料的基因组DNA鉴定表明 ,其中 4个RAPD分子标记显示出“晚绿”品种特异性 ,说明包括“静在 16”在内的 4个供试品种都不是“晚绿”的真正父本。本文还证明 ,不同生态条件下生长的同一无性系茶树品种的基因组DNA具有遗传保守性     

我国主要杂交水稻组合及其亲本SSR标记和纯度鉴定

选用分布于水稻12条染色体上的26对SSR引物对我国9个主要的杂交水稻组合及其亲本进行了SSR标记分析,21对多态性引物共扩增出62条条带,平均2.95条,能够有效地区分所有恢复系和大部分不育系。杂交种条带均为父母本的互补型,很适合做杂交种纯度鉴定。用引物RM17对杂交稻组合汕优63和两优培九进行了100粒单种子SSR鉴定,所测纯度分别为96.0%和98.0%,与田间纯度96.2%和97.7%非常接近,显示出SSR技术在品种认证和纯度鉴定中有广阔的前景。     

大豆疫霉菌遗传多样性的RAPD分析

利用随机扩增DNA (RAPD)技术分析了15个大豆疫霉菌( Phytophthora sojae)的遗传多样性,并同其它7 个疫霉种的8个菌株进行了比较。运用筛选出的12个引物共获得152个RAPD标记,其中84. 2%具有多态性。通 过聚类分析结果表明,疫霉属种间的遗传相似系数的变化幅度为0. 533～0. 783,大豆疫霉菌与其它几种疫霉的遗 传距离相对较远,用引物OPB06扩增到P. sojae种特有的一个RAPD标记; P. sojae种内菌株间遗传相似系数的变化 幅度为0. 855～0. 967,亦存在较丰富的遗传多样性,该遗传多样性与菌株毒力之间有一定相关性,而与菌株地理来 源没有相关性。     

我国甜菜多倍体品种的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对15个甜菜多倍体品种进行了遗传分析。从以前在甜菜中使用过的14个随机引物中筛选出具有非常明显多态性的引物8个,它们在多倍体品种间共扩增出47条不同位置的带,平均5.9条,特异带32条,特异带比率为68%;两个“双引物”共扩增出10条带,公共带仅1条,多态性频率高达90%。15份材料的遗传相似系数在0.75￣0.99。经聚类分析,可将这些材料分成5个组。RAPD聚类结果基本与血缘、系谱及其在生产实践中的表现相吻合,但也有例外。从分子水平上进一步证明了我国糖甜菜育种中存在的遗传材料基础狭窄的问题。     

PCR analysis of bisulfite-modified DNA to investigate developmental variation in micropropagated potatoes (Solanum tuberosum L.)

Summary Bisulfite modification of DNA from potato leaves showing juvenile and mature leaf morphologies and from leaves of autotrophic and heterotrophic microplants showing different morphologies was carried out to deaminate cytosine residues while leaving 5-methylcytosine residues intact. RAPD analysis of the DNA was then performed using selective primers; firstly, with a 50–70% GC content and subsequently with a 50–70% AT content which contained CG or CA 3' ends. Three of the 4 primers used detected band polymorphisms in the juvenile versus mature leaves and all four primers detected band polymorphisms in the autotrophic·versus heterotrophic in vitro leaf samples. These results indicate differences in methylation in the different paired DNA samples. The hypothesised increase in band numbers in the relatively less mature samples was confirmed for both the in vivo and in vitro leaf samples; a higher number of bands was amplified from the DNA of the leaves from heterotrophic cultures compared with those from autotrophic culture when the results for all primer sets were grouped. however, this trend did not apply to the results from all the individual primers. The application of this approach to the evaluation of in vitro protocols for potato micropropagation is discussed.