胚胎干细胞研究进展

介绍哺乳动物胚胎干细胞及其生物学特性；综述胚胎干细胞国内外研究进展和新动态；归纳利用早期胚胎或原始生殖细胞建立干细胞系的一系列技术要点；阐述胚胎干细胞潜在的应用价值。     

胚胎干细胞研究进展

介绍哺乳动物胚胎干细胞及其生物学特性;综述胚胎干细胞国内外研究进展和新动态;归纳利用早期胚胎或原始生殖细胞建立干细胞系的一系列技术要点;阐述胚胎干细胞潜在的应用价值.     

原始生殖细胞与胚胎干细胞

原始生殖细胞用于哺乳动物胚干细胞的分离与培养,是进入９０年代以来胚胎干细胞研究领域内的重大技术成果。在小鼠、大鼠、牛和猪等动物上,人们已由ＰＧＣｓ成功地建立了类ＥＳ细胞系。囊胚注射不仅已生出嵌合小鼠,而且其中生殖系嵌合体也已繁殖出数量可观的后代。因此,来自ＰＧＣｓ的ＥＳ细胞,业已证明具有囊胚ＥＳ细胞的全部特性。在ＥＳ细胞培养中,用ＰＧＣｓ替代桑椹胚和囊胚在取材等方面是有优势的。     

畜禽胚胎干细胞的研究进展

本文综述了主要畜禽胚胎干细胞的研究进展 ;归纳了胚胎干细胞的特性及影响其培养的因素 ;展望了人们对畜禽胚胎干细胞利用的趋势     

胚胎干细胞的研究进展及其应用

介绍了胚胎干细胞及其生物学特性，国内外研究进展和最新动态，ES细胞的应用及发展前景和主要存在的问题。     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ES细胞）是一种从早期胚胎的囊胚内细胞团（Inner Cell Mass,ICM）细胞或胎儿原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）经分离、     

从原始生殖细胞分离克隆绵羊胚胎干细胞

为了研究绵羊胚胎干细胞在体外培养过程中的生长行为,试验采用30～45日龄的绵羊胎儿生殖嵴及其周围组织共培养的方式分离克隆胚胎干细胞。结果表明:在不添加任何细胞生长因子的情况下,也能分离克隆到具ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞系,即具有连续传代能力、细胞集落有典型鸟巢状结构、AKP染色阳性等。说明该细胞具有多能性,类似ES细胞。     

猪胚胎多能性干细胞的分离培养

收集妊娠26．0～29．0d的猪胚胎，分离培养原始生殖细胞(PGCs)，在STO细胞饲养层上生长，形成了多能性干细胞(EG)。发现其具有干细胞的显著特性，并能在体外定向分化为神经细胞、上皮细胞和胚泡细胞。试验使用A、B、C3种不同的培养基培养PGCs，结果在形成EG细胞集落的数量和EG细胞分化上有着明显的差距，说明血清的质量和浓度以及细胞因子对干细胞的生成和增殖有着重要的影响。     

绒山羊原始生殖细胞用于胚胎干细胞培养的研究

该研究将20-45d的绒山羊胚胎生殖嵴及其邻近组织用机械剪和胰蛋白酶 EDTA消化处理，未加任何细胞生长因子。仅添加DMEM 10％犊牛血清，在38℃、5％CO2，饱和湿度条件下，将原始生殖细胞(PGCs)与其胎儿成纤维细胞共培养，在原代培养至1周左右时观察到了鸟巢状类胚胎干细胞(ES细胞)和集落团，贴壁生长于成纤维细胞层上面。经电镜观察，类胚胎干细胞体积小、核大，有多个核仁。细胞形态不规则，无明显界限等特点。     

哺乳动物PGCs用于多能性干细胞培养的研究进展

综述了哺乳动物原始生殖细胞（PGCs)研究进展；归纳了PGCs用于多能干细胞培养的影响因素，阐述了PGCs用于干细胞培养研究中存在的问题及其前景。     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

生殖细胞来源于原始生殖细胞,其在体内的分化机制已基本清楚。随着生殖细胞研究的不断深入,通过体外诱导途径获得生殖细胞已成为现实。将胚胎干细胞体外分化为上胚层样细胞,进而分化为原始生殖样或原始生殖细胞。将它们迁移入胎儿生殖腺,具有减数分裂及产生精子能力,与卵子结合移入缺生精管的生殖腺的新生鼠可以产生健康后代。为此,体外诱导生殖细胞的成功,进一步阐明了胚胎干细胞向生殖细胞分化的机制,为更有效利用干细胞造福人类奠定了基础。     

牛胚胎生殖细胞的分离与培养

以牛胎儿为材料,从原始生殖细胞（PGC）分离培养出胚胎生殖细胞（EG）,并进行传代和鉴定,对影响胚胎生殖细胞分离与培养的因素进行了探讨,研究发现以共培养方式培养牛原始生殖细胞时,原代培养都可以出现大量形态较好的EG细胞集落,说明同源的体细胞可以很好地支持PGC的生长和增殖,组织块培养细胞克隆数目较少,PGC很难增殖,不能形成典型的集落,传代也不理想,只传了一代.同时比较了不同传代方法对牛胚胎生殖细胞细胞传代的影响,发现消化＋机械分离法和消化＋吹打法都可以用于EG细胞的传代.消化＋吹打法操作简单,省时省力,也能够很好的保持细胞的增殖活力.原代培养的牛原代胚胎生殖细胞进行了细胞表面标志抗原SSEA-1,3,4鉴定,呈弱阳性.细胞体外培养可以分化为成纤维样细胞、上皮样细胞和类胚体.     

动物胚胎干细胞的概念及特性

胚胎干细胞是从早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离和克隆的具有全能性的细胞。其在动物克隆转基因动物的生产、基因结构与功能的研究以及细胞分化空的研究方面具有广泛的应用,对胚胎干细胞的概念特性以及胚胎干细胞特性之间的关系进行了论述。     

猪雄性生殖干细胞的分离纯化

 为了建立猪雄性生殖干细胞的分离纯化方法,以1~2周龄长白猪睾丸组织为材料,采用差异贴壁法和曲细精管培养法对猪雄性生殖干细胞进行分离纯化。结果表明：双酶消化-差异贴壁法和曲细精管培养法均能获得高活力的猪雄性生殖干细胞,但后者的富集效果较好,可以达到40.7%,前者的富集效果为 36.9%。差异贴壁法和曲细精管培养法具有操作简单、回收细胞纯度高等优点,可应用于猪雄性生殖干细胞的分离纯化。     

囊胚注射转基因ES细胞制作嵌合体的研究

在小鼠胚胎成纤维细胞制作的饲养层上培养并成功的维持了携带LacZ基因的胚胎干细胞系（S8），在此基础上，以S8为供体细胞，以远交系昆明白小鼠3．5d胚胎为受体，通过显微注射法将供体细胞转移到受体的囊胚腔内，经过恢复培养，移植到代孕鼠昆明白雌鼠的子宫中；后代在嵌合体出生一周后进行判定。本试验用8～13代的S8细胞共注射胚胎597枚，经1～3h恢复培养，有585枚胚胎重新具有膨大的囊胚腔，细胞轮廓分明，滋养层细胞间连接也清晰可见，胚胎成活率为97％；胚胎移植后，代孕母鼠共移植胚胎228枚，经17～19d的妊娠期后，产仔37只（2只死胎），产仔率为16％；有35只仔鼠（雄鼠18只，雌鼠17只）存活到可以判断毛色，共获得8只S8细胞毛色嵌合体小鼠，嵌合体的产生率为21．6％。结果表明用S8细胞经囊胚注射后能够获得嵌合体，并且嵌合体明显发生了性偏离现象。本试验为国内利用囊胚注射携带LacZ基因的胚胎干细胞获得嵌合体小鼠的首例报道。     

猪雄性生殖干细胞的分离培养及鉴定

本试验旨在探索猪雄性生殖干细胞(mGSCs)体外分离、培养的适宜条件,建立猪雄性生殖干细胞体外培养体系。采用两步酶消化法对新生小猪睾丸生殖干细胞进行了体外分离和初步的培养鉴定,并利用层黏连蛋白和明胶的不同贴壁特性,比较2种差易贴壁分选方法的富集效果,并对传代后的干细胞培养1周后进行碱性磷酸酶染色鉴定,通过免疫荧光技术检测培养细胞是否表达干细胞标志蛋白OCT-4。试验结果表明,层黏连蛋白更适用于猪生殖干细胞的富集、培养,细胞分选效率及增殖生长明显优于采用明胶分选的方法。培养的mGSCs拥有与小鼠mGSCs相同的形态、增殖及表达特征。鉴定结果显示,生长细胞克隆碱性磷酸酶染色呈阳性,支持细胞碱性磷酸酶染色呈阴性;培养的生殖干细胞克隆表达转录蛋白OCT-4,而饲养层支持细胞OCT-4抗体染色则呈阴性。结果表明培养的干细胞克隆仍保持较好的干细胞活性,保持正常的自我复制和分化潜能,初步建立了生殖干细胞培养体系。     

胚胎干细胞的体外诱导分化

胚胎干细胞是从早期囊胚内细胞团或桑葚胚中分离的一种多潜能细胞，具有体外无限增殖和自我更新能力，而且还能被定向诱导分化形成机体几乎所有的细胞类型，如肝细胞、造血细胞、成骨细胞、神经细胞、神经胶质细胞、肌肉细胞、胰岛细胞、内皮细胞、黑色素细胞、淋巴细胞、脂肪细胞、成纤维细胞等。     

胚胎干细胞分化研究进展

胚胎干细胞分化的研究已成为生物学领域中的研究热点,也是生物工程、组织工程产业化的主要方向,文章对胚胎干细胞的生物学性质、分化机制、诱导途径及研究进展做一综述.     

山羊PGCs用于分离与克隆类ES细胞

选择健康成年本地白山羊，自然发情，配种后44d取胎儿，以传统的原始生殖细胞（PGCs)分离与克隆的方法和PGCs与其胎儿生殖嵴周围组织细胞共同培养的方法获得类胚胎干细胞（类ES细胞），并对山羊类ES细胞在不同饲养层上进行培养。结果表明，采用传统方法与共培养的方法并添加细胞因子均能分离获得类ES细胞。分离获得的类ES细胞在同源（山羊）胎儿细胞饲养层上生长效果较好，可传4代或5代，而在小鼠原代成纤维细胞饲养层上类ES细胞仅传3代。另外，共培养不添加细胞因子组仅获1个ES细胞集落，传代后丢失。     

鸡胚胎干细胞的分离和培养

实验从鸡第X期胚胎中分离胚盘,以鸡成纤维细胞为饲养层,用添加了10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2mmol/LL-谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5mol/Lβ-巯基乙醇、10μL/mL非必需氨基酸以及含1000IU/mL白血病抑制因子(LIF)、10ng/mL碱性成纤维生长因子(bFGF)和5ng/mL干细胞生长因子(SCF)的高糖DMEM对细胞进行培养和传代,可以获得传至5～6代的鸡胚胎干细胞(ES)。通过对传代培养后的鸡ES细胞进行AKP染色鉴定和SSEA-1的鉴定,证实细胞未发生分化,具有胚胎干细胞的特征。同时通过不同分离胚盘方法和不同消化时间的比较得出药勺法提取胚盘简单易行,原代消化5～8min的ES细胞适合于传代培养。