基于TLH重组蛋白单抗的磁性免疫层析试纸条构建

为了检测不耐热溶血毒素TLH,以His-TLH重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备TLH单克隆抗体,然后将纯化后的单抗与磁珠偶联制备免疫磁珠,以此免疫磁珠为标记物构建了TLH重组蛋白的磁性免疫层析检测试纸条。结果表明,该磁性免疫层析试纸条实现了TLH重组蛋白的快速定性和定量检测,具有快速、操作简便、灵敏度高(检测限12.5 ng/mL)等特点。本研究所构建的磁性免疫层析试纸条为重组溶血毒素的快速鉴定、诊断和检测提供了一种新途径。     

免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗

试验选取自身蛋白制备克盐酸伦特罗克伦特罗载体抗原,免疫动物后产生高效价的特异性抗体,纯化抗体与胶体金结合成免疫金,制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验,证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。自身全血清作载体可使抗盐酸克伦特罗的ELISA效价高达4万以上。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng·mL-1,试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品,其符合率分别为100%和95.2%。市售单抗金标试纸条检测结果与ELISA法的阳性符合率为95%(19/20)。     

口蹄疫抗体免疫层析试纸的临床应用及性能评价

为评价前期研制的猪口蹄疫O型抗体检测试纸的临床应用效果,检测了162头份口蹄疫病毒(FMDV)多肽疫苗免疫猪血清和87头份灭活疫苗免疫猪血清,并与UBI FMDV抗体检测ELISA和美国BioXL FMDV抗体检测ELISA做平行对比试验。结果显示,试纸与2种ELISA方法的符合率分别为95.06%和96.55%。说明该试纸可以用于猪FMDV O型抗体的临床检测,为评价口蹄疫疫苗免疫效果提供了快速、简便的方法。     

快速检测联苯菊酯的胶体金层析试纸条研制

[目的]采用免疫胶体金技术,建立一种快速检测联苯菊酯的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法制备了联苯菊酯半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫抗原,利用人工免疫的方法获得其单克隆抗体,通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。联苯菊酯胶体金层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,并将联苯菊酯抗原与羊抗鼠Ig G分别喷制到硝酸纤维膜上,与样品垫、吸水垫组装在PVC衬板上制备而成。[结果]联苯菊酯胶体金层析试纸条检测限为500~800μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的拟除虫菊酯没有明显的交叉反应,利用该试纸条可实现对苋菜中联苯菊酯添加试验的准确判定。[结论]胶体金试纸条方法具有前处理简单、检测速度快、可以肉眼判断结果等优点,该试纸条有望实现对果蔬中联苯菊酯残留的快速筛查。     

免疫试纸条结合RT-PCR法快速检测马铃薯Y病毒

利用马铃薯Y病毒(PVY)免疫试纸条,对PVY进行了快速检测,结果表明,试纸在2 min内,可特异性检出PVY,而健康的叶片无反应.刮下试纸条上显示的检测带,进行RT-PCR,能扩增到与预期大小相同的DNA条带,是对快速检测试纸条检测结果的验证.     

莱克多巴胺荧光试纸的初步研制及性能测定

基于河南省动物免疫学重点实验室制备并保存的莱克多巴胺单克隆抗体(RAC McAb),采用异硫氰酸荧光素(FITC)作为标记材料对之进行荧光标记,并对荧光探针FITC-RAC McAb进行纯化和荧光光谱鉴定;应用免疫层析技术研制RAC残留荧光检测试纸,并对其敏感性、特异性、重复性进行初步测定。结果表明：荧光探针标记成功,并应用于免疫层析试纸,检测试纸的最低检测限为1 μg/L,较同抗体的胶体金试纸的敏感性提高10倍;与其他激动剂类药物无交叉反应,具有良好的特异性;以不同批次的检测试纸对猪尿样和牛奶样进行检测,结果一致,具有良好的重复性;检测试纸在10 min内可显示结果。     

甲霜灵、吡虫啉胶体金免疫层析试纸与色谱仪检测蔬菜农药残留比对试验分析

主要通过采用胶体金检测试纸与色谱仪检测蔬菜中农药残留的比对来检验胶体金免疫层析试纸的可靠性。经试验,胶体金检测试纸检测与色谱仪检测结果一致,相关性良好,可作为蔬菜采摘前农药残留自我检测的应用手段,适合在蔬菜生产基地、专业合作社等地推广应用。     

胶体金免疫层析技术在检测乳制品中三聚氰胺的应用

【目的】基于竞争抑制免疫层析原理,建立一种快速检测乳制品中三聚氰胺的方法。【方法】在胶体金免疫层析(GICA)技术的基础上,以胶体金为标记物,建立乳制品中三聚氰胺(MA)快速检测方法、研发GICA检测试纸;验证该方法的灵敏度、重复性和特异性。【结果】所研发的GICA试纸测定乳制品中MA的检出限为40～160μg/kg,重现性好;选用11种干扰物对GICA试剂进行特异性实验,仅发现尿素、缩二脲对GICA试纸检测液态奶时存在干扰,其他9种无干扰;使用GICA、HPLC、GC-MS同时检测阴性或添加MA质量分数2.00 mg/kg的阳性乳样品,检测结果一致。【结论】GICA试纸适用于乳制品中MA的快速检测。     

动物源食品中氯霉素残留速测金标试纸条的研制

应用杂交瘤技术制备了抗氯霉素单克隆抗体,并根据竞争式胶体金免疫层析试验原理,研制了氯霉素检测免疫试纸条。研究结果表明,该单克隆抗体对氯霉素的亲合性好,特异性高;该金标试纸条适用于动物源食品中氯霉素残留的快速检测,对虾肉、蜂蜜样品的最低检出限为1.5μg/kg,对鲜奶的最低检出限为3μg/kg,检测时间只需5～8min。     

金标试纸法和酶联免疫法检测呕吐毒素的对比研究

通过谷物及其制品中呕吐毒素的检测试验,将检测呕吐毒素的2种免疫技术(金标试纸法和酶联免疫法)进行了比较,考察2种方法的符合率。结果表明:2种方法测定结果基本一致,符合率达100%。     

快速检测生鲜乳中玉米赤霉醇试纸条的研制及其应用

[目的]采用免疫胶体金技术,建立了一种快速检测玉米赤霉醇的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法,研制了一种玉米赤霉醇半抗原,将其载体蛋白偶联得到免疫抗原,并通过人工免疫的方法获得单克隆抗体。通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。玉米赤霉醇层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,其原理是玉米赤霉醇抗原和羊抗鼠Ig G分别喷到自制的膜(硝酸纤维)上,然后将样品垫、吸水垫分别放置在PVC板上,再制成试纸条。[结果]试纸条检测限可达0.5~1.0μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的玉米赤霉醇没有明显的交叉反应。[结论]利用该试纸条可实现对生鲜乳中玉米赤霉醇添加试验的准确判定。该试纸条有望实现对生鲜乳中玉米赤霉醇残留的快速筛查。     

血清4型禽腺病毒POCT荧光微球免疫层析检测方法的建立

为了迅速且便利地判定血清4型禽腺病毒(FAdV-4),设计引物进行扩增,构建重组载体,原核表达的融合蛋白乳化后动物免疫得到多克隆抗体,用Western Blot检测,最后建立即时检验(POCT)荧光微球免疫层析试纸条,并进行初步应用。用POCT荧光微球免疫层析试纸条检测不同浓度的FAdV-4病毒液及临床阳性样本,结果表明,用POCT荧光微球免疫层析试纸条15 min可以检测出结果,且检测出阳性,与临床诊断结果相符。建立的POCT荧光微球免疫层析检测FAdV-4的方法,特异性良好,操作简单且便于携带,检测效率高,有利于基层兽医临床检测。     

氯霉素荧光纳米颗粒免疫层析法的建立

本研究将荧光纳米颗粒与氯霉素单克隆抗体共价偶联在一起,用该颗粒代替常用的金标颗粒标记氯霉素单克隆抗体,以竞争法作为反应模式来制备免疫层析试纸条。在紫外灯下观察免疫层析试纸条上经免疫反应而产生的质控线和检测线上的荧光信号,利用荧光强度来半定量检测动物源性食品中的氯霉素残留。所制备的检测氯霉素的免疫层析试纸条只与氯霉素有交叉反应,与非目标检测物之间没有交叉反应。该试纸条的肉眼检测灵敏性为0.5ng/mL,满足相关检测标准要求。通过比较检测线和质控线之间的亮度,能够对氯霉素进行半定量检测。本研究建立的用于氯霉素残留检测的免疫层析法,具有简便、快速、灵敏度高的特点,有广阔的应用前景。     

一种苯醚氰菊酯胶体金免疫快速检测试纸条的研制

通过制备苯醚氰菊酯半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中苯醚氰菊酯的胶体金免疫层析试纸条,检测限为1μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求,该试纸条能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

胶体金免疫层析试纸结合RT-PCR法快速检测烟草环斑病毒

利用烟草环斑病毒胶体金免疫层析检测试纸条,对烟草环斑病毒3个分离物进行了快速检测。结果表明,试纸条在10min内,可特异性检出烟草环斑病毒的3个分离物,对番茄环斑病毒、南芥菜花叶病毒、番茄黑环病毒和健康叶片无反应。剪下试纸条上显示的检测带,进行RT—PCR,能扩增到与预期大小相同的DNA条带。试纸条检测烟草环斑病毒粗提纯液,检测灵敏度在1μg·mL^-1,试纸条检测烟草环斑病毒的病汁液,检测灵敏度在10^-3（W／V）,试纸条检测灵敏度与DAS—ELISA方法灵敏度基本相同。     

免疫胶体金技术在马铃薯病毒检测上的应用

免疫胶体金技术是一种快速、简便、结果容易判定的新型免疫标记技术,应用免疫胶体金技术制备试纸条具有特异性强、价格低、灵敏度高的特点,适用于马铃薯病毒检测,特别广泛适用于田间和口岸现场检测等工作。文章对免疫胶体金技术的基本原理、制备方法以及其目前在马铃薯病毒检测中的应用情况进行了综述。     

张改平 科学研究必须要以服务人民为宗旨

正人物名片张改平,河南农业大学校长,动物免疫学和免疫膜层析快速检测技术专家。2009年当选为中国工程院院士。1960年12月生于河南内黄。1993年获英国哈特大学细胞与分子免疫学博士学位。曾任河南省农业科学院副院长、河南省动物免疫重点实验室主任。长期从事动物病毒致病机制、动物重大疫病快速监测技术和食品安全快速检测技术研究。率先建立了免疫试纸快速检测技术体系,为我国     

河豚毒素的快速检测技术

为建立快速、简便、适用于河豚毒素免疫分析检测技术的前处理方法,通过采用不同体积分数的三氯乙酸对河豚鱼样品进行前处理,采用市售的酶联免疫(ELISA)试剂盒及由笔者所在实验室制备的以磁性纳米探针为标记物的免疫层析(LFIA)试纸条的检测结果作为前处理方法优劣的判断依据。试验结果表明,经2%乙酸对样品进行2次加热提取后,采用体积分数为10%的三氯乙酸对样品中的蛋白进行沉淀,待测样品适用于ELISA试剂盒及LFIA试纸条检测。     

农业三新

一种新型莱克多巴胺的快速检测试纸研制成功据我国华南理工大学科研人员根据胶体金免疫层析原理制备莱克多巴胺胶体金试纸条,建立了一种快速、有效的莱克多巴胺检测方法。该方法采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单     

新霉素免疫膜层析检测方法研究

 【目的】研制新霉素（neomycin,NEO）免疫膜层析快速检测试纸。【方法】建立分泌抗新霉素单克隆抗体(NEO mAb)杂交瘤细胞株,用胶体金免疫膜层析试验(GICA)制备NEO残留快速检测试纸(NEO-Strip),并对其性能进行鉴定。【结果】抗新霉素单克隆抗体的亲和力常数为3.75×1010 mol·L-1;制备的 NEO-Strip目测限为50 ng·mL-1;试纸可特异性检测NEO,与庆大霉素、链霉素、妥布霉素、紫苏霉素、莱克多巴胺、沙丁胺醇、泰乐菌素和氯霉素等其它药物均无交叉反应性;就定性检测而言,其结果与高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS-MS）完全一致;不同的基质液对试纸的敏感度影响甚微。【结论】建立了特异的NEO免疫层析检测方法。