猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其荚膜血清型鉴定

从病死母猪肺脏中分离到一株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验、致病性试验和PCR鉴定方法对分离菌株进行鉴定,并用多杀性巴氏杆菌荚膜分型引物对分离株的荚膜血清型进行鉴定。结果表明:本菌为猪多杀性巴氏杆菌,对多种抗生素高度敏感,对小白鼠有强致病性;PCR扩增16SrDNA基因获得1415bp片段,分离株的16SrDNA核苷酸序列与多杀性巴氏杆菌(AY078999)的同源性为99%,因此该分离菌株被鉴定为致病性巴氏杆菌,命名为YN20110122株;本菌分离株为荚膜A型血清型多杀性巴氏杆菌。     

禽巴氏杆菌Pm-HB株的分离与鉴定

湖北省某鸡场疑似巴氏杆菌(Pasteurella)感染,从送检病鸡的肺脏和肝脏中分离到1株细菌,通过菌落形态、培养特性、生化试验、16S rRNA序列比对鉴定为禽多杀性巴氏杆菌,并命名为Pm-HB株。动物回归试验表明,10 CFU细菌即可100%致死30日龄SPF鸡,可确诊为巴氏杆菌病。     

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及oppA基因遗传进化分析

【目的】了解福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）的流行及oppA基因遗传进化情况。【方法】本研究采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、PCR荚膜分型、oppA基因克隆及相似性分析、动物回归试验等方法对分离菌株进行鉴定和分析。【结果】本研究共分离到10株菌,分离菌在血平板上形成淡灰白色、湿润光滑、奶油露珠状菌落;分离菌株能酵解蔗糖、果糖、麦芽糖和甘露醇,不能分解葡萄糖、枸橼酸盐、乳糖、硫化氢等,与多杀性巴氏杆菌生化特性基本一致;分离菌株16S rRNA序列与GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌相似性达99.9%以上,10株分离菌均为多杀性巴氏杆菌;PCR荚膜分型显示,6株分离菌为荚膜A型,4株为荚膜D型;基于oppA基因的遗传进化树显示,10株分离菌均位于同一分支内;动物回归试验结果显示,在24 h内攻毒小鼠死亡率较高（21/30）,分离菌有较强的致病力。【结论】福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌流行菌株的荚膜血清型主要是A和D型,且大部分菌株都来源于共同的祖先,本研究结果丰富了猪多杀性巴氏杆菌的流行病学资料,并为该病的防控奠定基础。     

一例猪巴氏杆菌病的诊断及体外抑菌试验

为了确诊某猪场患病猪的病原菌,找到防控办法,对死亡猪肺脏、气管液进行细菌分离鉴定,经过生化试验、药敏试验、体外抑菌试验、动物试验等,得知:分离菌培养特性、生化反应特性与巴氏杆菌基本一致;分离菌高敏药物为头孢氨苄、头孢曲松等,低敏药物为青霉素G、林可霉素等;乳酸菌对巴氏杆菌有明显的抑菌作用;攻毒小白鼠48 h内全部死亡。结论:分离菌为多杀性巴氏杆菌,该病为多杀性巴氏杆菌引起的猪巴氏杆菌病,乳酸菌配合高敏药物能防治该病。     

猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

为了确定引起青岛市某猪场发病的主要病原菌,本试验对该猪场送检的病死猪进行剖检,从肺脏中分离得到一株细菌,随后进行分离菌的形态观察、生化试验、细菌16S r RNA基因测序与药敏试验。结果显示该株分离菌为革兰氏阴性杆菌;生化试验结果表明该株菌分解氨基酸、不分解糖类,与支气管败血波氏杆菌的生化试验结果大致相同;16S r RNA基因序列与支气管败血波氏杆菌(Gen Bank序列号:AP014582.1)同源性为100%;药敏试验结果表明该株分离菌对部分氟喹诺酮类、氨基糖苷类药物敏感。细菌分离鉴定和药敏试验的结果为猪场发生该病时如何用药治疗提供参考依据。     

一株猪A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对东营某猪场送检猪病料进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、生化试验、药敏试验、致病性试验和PCR鉴定.结果成功分离到一株血清A型多杀性巴氏杆菌,该菌的分离鉴定为自家灭活菌苗的制备提供了候选菌株.     

PCR检测方法在多杀性巴氏杆菌定种中的应用

为修订行业标准《猪巴氏杆菌病诊断技术》（NY/T 564-2002）,改进多杀性巴氏杆菌定种方法,采用16S rDNA基因序列分析法对中国兽医微生 物菌种保藏管理中心（CVCC）保藏的63株猪源多杀性巴氏杆菌进行复核鉴定。63株猪源多杀性巴氏杆菌中有60株菌种与原鉴定结果一致。建立多杀性巴 氏杆菌基于kmtΙ基因的PCR定种方法,对经16S rDNA PCR方法确认为多杀性巴氏杆菌的60株菌进行定种。结果表明,60株菌均扩增出了预期片段,基于 kmtΙ基因的PCR定种方法与16S rDNA PCR方法试验结果相一致。研究结果显示,可将基于kmtΙ基因的PCR定种方法增添至行业标准中,作为原有生化鉴 定方法的补充进行多杀性巴氏杆菌的定种。     

鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定临床疑似鸭多杀性巴氏杆菌感染肉鸭的病原菌，本试验通过细菌分离培养、菌体形态观察、细菌生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、细菌种特异性鉴定、荚膜分型鉴定和动物回归试验进行鉴定，并通过药敏试验和耐药基因检测进行耐药性分析。结果显示，从患病鸭肝脏组织分离到的细菌在鲜血琼脂培养基中呈现表面光滑凸起、灰白色菌落，为革兰氏阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；生化鉴定结果显示，分离菌能发酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇，硫化氢、氧化酶和吲哚等试验阳性；16S rRNA基因序列系统进化树分析显示，该分离菌与多杀性巴氏杆菌聚为一支，同源性 > 99%；细菌种特异性鉴定结果与多杀性巴氏杆菌相符；荚膜分型鉴定结果仅扩增到约为1 050 bp的目的基因片段，与荚膜血清A型相符；动物回归试验显示，该分离菌有较强的致病性；药敏试验结果显示，该分离菌对羧苄西林、氨苄西林、复方新诺明和四环素等12种药物耐药；经耐药基因PCR检测显示，该分离菌携带Sul1、Sul3、tet（X）和Intl1 4种耐药基因，与药敏表型相符。本试验成功分离到1株鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌，为鸭多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考依据。     

兔源多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定引起兔呼吸困难、死亡的病原,本研究对河南省某兔场发病病例剖检,采集8份有呼吸道症状的病兔样品对病原进行分离培养,通过生化鉴定、16S rRNA PCR鉴定及小鼠致病性试验确定病原,并采用药敏试验分析其耐药性。结果显示,分离得到8株两端钝圆、卵圆形的革兰阴性球杆菌及8株短粗、卵圆形的革兰阴性菌;生化鉴定结果显示分离的细菌1和细菌2分别符合多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的生化特性,分别命名为HN-W01和LY-W05株;扩增的分离菌16S rRNA基因序列片段大小分别为643和1 494 bp,与多杀性巴氏杆菌AY604234.1和肺炎克雷伯菌MK824895.1的同源性分别为99.32%和99.93%,表明该兔场患病兔为多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染。致病性试验显示,分离出的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌对小鼠均有致病力,可使小鼠死亡。经药敏测定发现分离得到的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌同时对多粘菌素B和氯霉素敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。本研究为家兔养殖过程中多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染的分离鉴定以及临床科学用药提供了参考依据。     

鹿源多杀性巴氏杆菌的鉴定、分型及生物学特性分析

为了对新疆南疆某鹿场疑似感染多杀性巴氏杆菌的死亡马鹿肺脏样本中的分离菌株进行鉴定、分型及生物学特性分析,试验首先采用染色法和生化鉴定初步判定分离菌株的种类,然后通过PCR扩增分离菌株的16S rRNA基因、Kmt1基因、荚膜血清分型基因和LPS基因,进一步对分离菌株进行鉴定和分型,最后对分离菌株进行遗传进化分析和药敏试验。结果表明：分离菌株为荚膜血清D型、LPS基因L3型多杀性巴氏杆菌;该分离株的16S rRNA基因序列与多杀性巴氏杆菌参考株DY120818、GDZQ201401、PM-LK、PM-R1601、4085、FUP12、PM30、PM75、Tabriz31、Tabriz61的核苷酸序列相似性在99.9%～100%之间,Kmt1基因序列与多杀性巴氏杆菌参考株CSWRI-AH-PmAg16、HaiNGoosePm2012、Jhakhrana、M14、OND Duck、PMI030、PMUEL 1-BR-11、SichuanPm2014、VRI-Pm2的核苷酸序列相似性在94.9%～99.5%之间,荚膜血清分型基因与同为荚膜血清D型的多杀性巴氏杆菌参考株CSWRI-AH-PmD1...     

一株兔源D型多杀性巴氏杆菌的分离和鉴定

多杀性巴氏杆菌是引起兔呼吸道疾病的重要病原.2020年12月,福建省某兔场发生一起呼吸道传染病,从病死兔肺脏样品中分离到一株D型多杀性巴氏杆菌PMD2057.PMD2057经滴鼻感染试验兔,能复制出临床症状和病变特征与自然感染发病病例相同的病兔,且能从试验兔的肺脏样品中回收到该菌,证实D型多杀性巴氏杆菌PMD2057是...     

貉巴氏杆菌病的诊断与中西医结合治疗

为了确定某养殖场的使貉发病的主要病原菌并筛选出治疗药物,对青岛市某养殖场送检的病死貉进行病理剖检,并分离到1株细菌,随后进行分离菌形态观察、生化试验、细菌16S rRNA基因测序及药敏试验。结果表明:该株菌为多杀性巴氏杆菌,药敏试验显示该株菌对庆大霉素、妥布霉素、诺氟沙星、左氧氟沙星、多黏菌素B高度敏感;中西医结合治疗可有效控制病情。     

鹅源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与药物敏感性分析

为了鉴定引起雏鹅死亡病原,无菌采集肝、心、肺等病料组织进行细菌分离培养,通过分离培养、培养特性鉴定、形态学观察、生化试验、16 S rRNA PCR等方法进行鉴定。结果显示:分离菌株16 S rRNA基因序列与GenBank中公布的12株多杀性巴氏杆菌参考株的同源性在98%~100%之间,分离菌株为多杀性巴氏杆菌;动物回归试验结果表明,该菌具有致病性,且致病较强,对雏鹅的LD_(50)为3.16×10~6cfu/mL;PCR检测结果表明,分离菌株属于多杀性巴氏杆菌荚膜型A型,同时携带18个毒力基因;药敏试验结果显示,分离菌对恩诺沙星、丁胺卡那霉素、头孢曲松等11种药物高敏,对其他药物存在不同程度的敏感性。     

一株猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

采用分离培养、生化鉴定、16S r RNA扩增片段同源性分析等方法,对采自四川某规模化猪场有明显呼吸道症状的猪肺脏拭子进行细菌的分离鉴定,并进行药敏试验及毒力试验。结果显示,分离得到1株多杀性巴氏杆菌,该分离株对头孢呋辛、头孢曲松、阿米卡星等19种抗生素敏感,对氨苄西林和麦迪霉素中度敏感,对苯唑西林表现耐药。小鼠毒性试验显示,该菌株对小鼠有强致病性。本研究为猪巴氏杆菌病的防控提供参考。     

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

从福建省某猪场发生以呼吸道病为主要特征的病死猪脏器中分离到1株可疑菌,通过细菌分离和纯培养、涂片镜检、生化试验、小鼠致死性试验、药敏试验,并设计1对检测猪多杀性巴氏杆菌的引物,对可疑菌做PCR检测。结果表明,可疑菌对小鼠有致死毒力;PCR检测结果与生化鉴定结果符合,可疑菌为猪多杀性巴氏杆菌;药敏试验检测结果显示,该菌对先锋霉素Ⅴ、阿米卡星、氟哌酸、氯霉素和庆大霉素高度敏感。     

鸡源巴氏杆菌GZ-TZ2017株的分离及其16S rRNA序列分析

为了探明贵州某肉鸡养殖场突发疾病病因,试验通过解剖、细菌分离、染色镜检、药敏试验、生化试验、16S rRNA的PCR扩增及序列分析等方法对病原进行分析。结果表明:从病鸡内脏中分离得到1株革兰氏阴性、两极浓染的球杆菌,将其命名为GZ-TZ2017;该菌株的培养特性、菌体形态、生化试验特征均与已报道的巴氏杆菌相似;GZ-TZ2017菌株对米诺环素、氧氟沙星和诺氟沙星等抗生素较为敏感,对头孢拉啶、苯唑西林、卡那霉素、青霉素等抗生素耐药;16S rRNA PCR扩增得到大小为1 400 bp左右的目的片段,分离菌GZ-TZ2017与各地分离的多杀性巴氏杆菌的同源性极高,均在99.0%以上;GZ-TZ2017与多杀性巴氏杆菌属细菌属于一个分支,和重庆分离株PM-LK(GenBank登录号为KX579746)、安徽滁州分离株CZ-6(GenBank登录号为KY673151)在同一小分支上,属于禽巴氏杆菌。说明该肉鸡场鸡群感染了禽巴氏杆菌。     

云南猪源A型多杀性巴氏杆菌 PMJC-1株的分离鉴定

为探明2022年2月玉溪市江川区某规模猪场大批保育猪发病死亡原因，对采集病料进行了细菌分离，从肺门淋巴结分离得到一株菌落表面光滑、湿润、半透明圆形菌株。分离菌株经生化试剂条鉴定为多杀性巴氏杆菌，分离菌株的16S rRNA序列与NCBI GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌PM8-6株的同一性达到99%以上，将分离菌株命名为PMJC-1株。荚膜分型结果显示该菌株为荚膜A型多杀性巴氏杆菌，毒力基因检测结果显示该菌含有黏附素、超氧化物歧化酶等6种毒力基因。分离菌株药敏试验表明，其仅对利福平、头孢哌酮、阿莫西林、呋喃妥因、头孢噻吩、大观霉素6种药物敏感，对其余18种药物均耐药。动物致病性试验结果显示该菌株对昆明小鼠具有较强致病性，8只实验组昆明小鼠在接种后72 h内发病死亡5只，其余3只发病后耐过康复。本研究结果可为生猪养殖过程中A型多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考。     

藏鸡副鸡嗜血杆菌的分离及16S rDNA序列分析

四川省某藏鸡场藏鸡发生以鼻腔与窦发炎、颜面肿胀、流鼻涕和打喷嚏为主要特征的疾病,通过对送检病鸡病原的分离纯化、生化鉴定、16 S rDNA基因的克隆和序列分析诊断为副鸡嗜血杆菌感染,将该株副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA序列与GenBank中15株巴氏杆菌科菌株进行同源性分析发现,与6株副鸡嗜血杆菌同源性较高,为94.2%～97.2%,与其它菌株16 S rDNA基因的同源性较低。另外,药敏试验表明,本菌株对菌必治、阿莫西林、庆大霉素、头孢氨噻肟和阿奇霉素等药物敏感。     

一例猪伪狂犬病毒与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断

为了对2017年3月份安徽省六安地区某猪场40~50日龄发病保育猪所患疾病进行诊断,试验采用病史调查、临床观察、病理剖检、细菌分离鉴定及PCR/RT-PCR检测的方法,对送检病猪进行诊断。结果表明:从病猪肺脏组织分离到一株革兰氏阴性杆菌,经PCR鉴定为多杀性巴氏杆菌,同时病原检测伪狂犬病毒也为阳性。说明该病例为猪伪狂犬病毒与多杀性巴氏杆菌的混合感染。     

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定和药敏试验

为了对河南省猪高热综合征发生期间多杀性巴氏杆菌引起的感染有全面了解,从2006-2010年河南省发生猪高热综合征的245家规模化猪场568份病料中分离革兰氏阴性小球杆菌,通过培养特性试验、生化试验和PCR试验分离鉴定到35株。对分离菌进行毒力和药敏试验,结果显示所分离的猪多杀性巴氏杆菌对小鼠均有毒力,对头孢噻呋、头孢噻肟、环丙沙星、氟苯尼考敏感。