海兰褐鸡法氏囊中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及NOS cDNA克隆及序列分析

通过对海兰褐鸡法氏囊中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及iNOS cDNA克隆及序列分析,了解海兰褐鸡法氏囊中主要氧化-抗氧化酶的分布及其基因组成,为研究传染性法氏囊病及与法氏囊相关禽病的氧化-抗氧化发病机制奠定基础.结果显示,Cu/Zn-SOD、Mn-SODcDNA序列分别出现2个碱基的突变,iNOS cDNA序列与原始序列同源性为100％.海兰褐鸡法氏囊中存在Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及iNOS 3种与氧化-抗氧化相关酶,并且Cu/Zn-SOD、Mn-SOD cDNA序列具有新特征,iNOS在海兰褐鸡体内是稳定存在的;海兰褐鸡可能与康奈尔K系鸡具有相似的遗传背景.     

海兰鸡IL-18全基因的克隆与序列分析

IL-18是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。     

海兰褐蛋鸡体内Toll样受体的分子克隆与序列分析

为了研究海兰褐蛋鸡的先天性免疫机制,根据已报道的鸡的9种Toll样受体（TLR）和其他动物（人、小鼠和猪） TLR9的基因序列,设计特异性引物,从海兰褐蛋鸡体内扩增出11个鸡Toll样受体部分基因片段,与GenBank登录的序列进行比对和分析,同源率达99%以上。同时也证实鸡体内不存在TLR9,但是存在TLR21。     

海兰褐鸡肠道菌群多样性分析

为评价鸡肠道中微生物种群结构,采用不同培养基对海兰褐鸡肠道菌群进行分离培养和16S rDNA测序,结合分类学和系统发育进化分析对3组不同的海兰褐鸡肠道菌群的多样性进行研究。结果表明,健康海兰褐鸡肠道中优势微生物为乳酸杆菌属、芽孢杆菌属和肠球菌属,分别占25%、19%、19%。非健康海兰褐鸡的肠道中优势微生物为志贺菌属和克雷菌属,分别占20%、20%。饲喂过微生态制剂的海兰褐鸡肠道中优势微生物为肠球菌属和芽孢杆菌属,分别占21%和14%。这些数据将为开发更有针对性的微生态制剂产品提供科学依据。     

四川草科鸡IL-15 cDNA的克隆与序列分析

根据GenBank上登录的鸡白介素15(IL-15)基因序列,设计合成一对特异性引物,以ConA诱导的鸡脾淋巴细胞提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增,并克隆到pMD18-T载体测序.测序结果表明,四川草科鸡IL-15开放阅读框(ORF)由564个核苷酸组成,编码187个氨基酸,与GenBank中公布的鸡白介素15基因进行比较,核苷酸和氨基酸同源性为98.6%～99.5%.生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有亲水性,有很强的抗原性,共有3个潜在的N-糖基化位点,可能存在3个蛋白激酶C磷酸化位点,存在2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点.     

海兰鸡白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析

白细胞介素-18（Interleukin-18，IL-18）是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子，在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列，自行设计一对引物，经植物血凝素（PHA）活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后，提取其总RNA，经反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增，扩增产物进行了T-A克隆、测序，获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列，其大小为597bp，与在GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现，中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致，为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。     

济宁百日鸡与海兰褐鸡蛋品质分析

本研究测定了济宁百日鸡与海兰褐鸡所产的鸡蛋蛋各20枚的蛋重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋黄颜色、哈夫单位以及蛋黄比例和蛋黄中胆固醇、铁、钙、锌、硒的含量,结果显示,海兰褐蛋重显著大于济宁百日鸡,但两品种鸡蛋品质在蛋壳厚度、蛋形指数、蛋壳强度方面无显著性差异(P0.05);其中海兰褐蛋鸡在蛋壳厚度、蛋壳强度稍微优于济宁百日鸡,济宁百日鸡在蛋黄比率、以及蛋黄中的胆固醇含量、铁、锌、硒等含量显著高于海兰褐(P0.05)。     

鸡生长激素cDNA的克隆分析

本研究从肉用品种鸡的垂体文库中克隆分离了鸡生长激素ｃＤＮＡ，并作了核苷酸序列测定。克隆的鸡生长激素ｃＤＮＡ序列全长为７８７个碱基对，其中５′非转译区为３８个碱基对，３′非转译区为１０１个碱基对，编码区为６４８个碱基对。通过序列比较分析，克隆的鸡生长激素ｃＤＮＡ序列与已报道的鸡生长激素ｃＤＮＡ序列的同源性为９６％，与鸭生长激素序列的同源性为８７％，但与火鸡生长激素序列的同源性只有５２％。另外，鸡生长激素对多个数量性状的影响也在本文中进行了讨论。     

宫廷黄鸡与海兰褐杂交效果观察

<正> 许多人多喜食风味独特的鸡种(如宫廷黄鸡),但这些鸡饲养成本较高,而产蛋量低;海兰褐在本地区有很强的适应性,且产蛋量高(80周龄产蛋可达330枚),抗病力强,饲料转化率高,颇受当地人喜爱。针对此情况,本研究用宫廷黄作父本与海兰褐作母本进行杂交,生产商品兼用型鸡。     

坝上长尾鸡与海兰褐鸡肌肉营养成分对比研究

坝上长尾鸡是河北省唯一被列入《中国畜禽遗传资源志》的地方家禽品种。为了更好地保护和开发利用坝上长尾鸡资源,本试验选取相同饲养管理条件下200日龄的该鸡种和海兰褐鸡各180只,每组随机分为5个重复,每个重复36只。在同一条件下常规饲养,于230日龄每组挑选10只鸡屠宰,对肌肉中主要营养成分进行了比较分析。结果显示:1)坝上长尾鸡肌肉中的粗蛋白质和粗脂肪含量与海兰褐鸡相比差异不显著(P0.05)。2)2个鸡种间胸肌、腿肌中的必需氨基酸含量差异不显著(P0.05);坝上长尾鸡肌肉中的呈味氨基酸(谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和丙氨酸)含量显著高于海兰褐鸡(P0.05),腿肌中的苦味氨基酸——苯丙氨酸含量显著低于海兰褐鸡(P0.05)。3)坝上长尾鸡腿肌中的不饱和脂肪酸、饱和脂肪酸和总脂肪酸含量显著低于海兰褐鸡(P0.05);坝上长尾鸡腿肌中的花生四烯酸和二十二碳六烯酸含量显著高于海兰褐鸡(P0.05)。4)坝上长尾鸡胸肌中的镁(P0.01)和铁(P0.05)含量显著或极显著高于海兰褐鸡,腿肌中的钠(P0.05)、镁(P0.01)和铁(P0.05)的含量显著或极显著高于海兰褐鸡。由此可见,坝上长尾鸡和海兰褐鸡的肌肉均品质优良,且坝上长尾鸡肌肉品质优于海兰褐鸡。     

海兰鸡内源性白血病病毒位点序列鉴定与分析

鉴定和比较海兰鸡基因组中内源性禽白血病病毒(ALV)位点。使用超嗜热古菌Thermococcus sp.4557来源重组表达的Pol B DNA聚合酶,通过一次PCR反应从海兰鸡的基因组DNA中扩增到了包括gag、pol、env基因部分片段及3′-LTR的内源性ALV位点,将其命名为HL-E1。序列比较表明,其env基因与E亚群内源性ALV高度同源;与完整的ALV基因组相比,其gag、pol、env三个主要功能基因分别缺失了93、1 960和805个碱基。海兰鸡基因组中存在4 663bp的缺陷型ALV基因组片段,其env基因和LTR都与鸡基因组上经典的ev1位点的相应基因有96.8%和97.4%的相似性,表明这是整合进海兰鸡染色体基因组中的一个内源性E亚群ALV片段构成的ev位点,这是又一个ev位点的全序列报道。     

鸡IL-1β cDNA克隆和序列分析及原位杂交检测

根据国外报道的鸡 IL- 1β序列 ,设计引物 ,以提取的鸡外周血单个核细胞总 RNA为模板 ,RT- PCR扩增 IL- 1β c DNA全序列。将 RT-PCR产物与 p UC19载体相连 ,转化大肠杆菌 ,经 PCR、酶切分析及序列测定得知所克隆序列与报道序列同源性达 99%以上 ,证明所克隆基因为目的基因。用地高辛随机引物法标记 IL- 1βc DNA制备探针 ,原位杂交检测禽脑脊髓炎病鸡与正常鸡脑组织中 IL- 1β m RNA表达情况 ,结果表明脑炎病鸡脑中 IL - 1β m RNA表达水平高于正常鸡。     

蒙古绵羊Brachyury基因的克隆与生物信息学分析

为了对蒙古绵羊Brachyury基因DNA序列进行研究,试验主要利用PCR技术对蒙古绵羊Brachyury基因序列进行扩增并克隆,首次获得了完整的Brachyury 基因序列。利用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊Brachyury基因序列进行比对,结果显示同源性高达99%,大部分序列完全一致。将该序列与GenBank数据库中登录的牛、人、大鼠、小鼠、山羊、猴和蝾螈等10个不同物种的Brachyury分子序列进行了比对分析。结果显示,蒙古绵羊Brachyury氨基酸序列与牛Brachyury氨基酸序列同源性最高,为96.30%;最低的则是来源于蝾螈的Brachyury氨基酸序列,仅为58.45%。遗传进化分析进一步证实蒙古绵羊与牛的Brachyury亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。此外,序列分析发现蒙古绵羊Brachyury基因高度保守,仅个别碱基发生突变。研究结果表明,蒙古绵羊Brachyury基因序列与其他脊椎动物的Brachyury基因序列也具有高度的保守性。     

鸡β-防御素Gal-1 cDNA的克隆及序列分析

利用细胞总RNA提取试剂盒,从1月龄SPF鸡白细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡β-防御素(Gal-1)cDNA片段。PCR产物经凝胶回收纯化后与pMD18-T载体连接,转化感受态JM109细胞,在含X-gal、IPTG的LB平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR与质粒限制性酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明RT-PCR扩增出的cDNA片段ORF大小为198bp,用Blast程序进行检索比较表明该序列与Genbank中发表的鸡Gal-1 cDNA编码区序列同源性高达99.5%。该cDNA序列编码65个氨基酸,包括信号肽、前片段和成熟肽,成熟肽由40个氨基酸残基组成。     

鸡白介素-17 cDNA基因的克隆、序列分析及表达

用RT-PCR方法,分别以ConA体外刺激培养12、24、48 h的鸡脾脏淋巴细胞(SP)和经人工感染2次堆型艾美尔球虫(E im eria tenella)孢子化卵囊(约3.6×104个/鸡)的鸡盲肠扁桃体/肠上皮淋巴细胞(IELS)总RNA为模板,成功扩增出预计大小的鸡白介素-17 cDNA基因,并克隆入pM D 18-T载体,进行序列测定。测序结果显示其阅读框(ORF)为507 bp,与G enB ank上鸡IL-17基因已知序列(A J493595)BLA ST的比较表明:核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.4%和82.4%。将cDNA基因克隆入pET-32a质粒,构建了pET 32a-IL-17原核表达载体,IPTG诱导后表达出的融合蛋白大小为36 000左右。     

梅花鹿SNX10基因cDNA克隆与序列分析

为了获得梅花鹿SNX10基因编码区cDNA序列,试验提取了梅花鹿鹿茸尖端组织总RNA,设计上下游引物,利用PCR技术扩增SNX10基因,对扩增的基因进行氨基酸序列分析并构建系统进化树。结果表明:扩增获得的序列为854 bp,其中包括606 bp开放阅读框(ORF),编码201个氨基酸;SNX10蛋白为疏水性蛋白质且存在信号肽和跨膜结构,由α-螺旋、扩展链、无规则卷曲组成,蛋白亚细胞定位预测为细胞质。梅花鹿鹿茸SNX10蛋白氨基酸序列与白尾鹿的同源性极高,为99%。梅花鹿与白尾鹿的亲缘关系最近,与野猪、牛的亲缘关系较近,与人、白鳍豚、裸鼹鼠、黑猩猩、赤狐、刺猬的亲缘关系较远。     

狂犬病毒Flury株糖蛋白cDNA克隆与序列分析

根据狂犬病毒糖蛋白核苷酸序列,利用Oliga软件设计两对特异性引物,通过反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增了狂犬病毒Flury-lep糖蛋白的全长cDNA,将其插入克隆载体pMD-18T并测序。测序结果及同源性分析表明,糖蛋白cDNA长1574bp,编码524个氨基酸。狂犬病毒株Flury-lep的RGP基因序列与GenBank公布的狂犬病毒株RGP基因片段核苷酸序列的同源性为82．3％～96．3％,其编码产物的氨基酸序列同源性为88．4％～94．3％。     

梅花鹿Ghrelin cDNA的克隆及序列分析

为了扩增梅花鹿Ghrelin基因的cDNA序列,根据已发表的驯鹿生长素Ghrelin基因的cDNA序列设计并合成1对特异性引物,以梅花鹿皱胃组织中提取的总RNA为模板,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得了300 bp片段,重组到pBlueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列分析,确认PCR产物为Ghrelin cDNA。     

静宁鸡与海兰褐鸡肝脏的组织学观察报告

笔者以3周龄静宁鸡与海兰褐鸡为试验对象,研究相同发育阶段2种鸡的体重和肝脏重量,制作组织切片,进行H.E.染色、PAS染色和MASSON染色,对静宁鸡和海兰褐鸡的肝脏进行分析对比讨论。结果表明,静宁鸡体重和肝重比同龄海蓝褐鸡轻。前者肝脏颜色呈肉粉色,有明显的左二右三的分叶;后者肝脏颜色呈红褐色,分叶为左二右二。根据组织学观察结果表明,静宁鸡肝脏组织结构比海兰褐鸡的清晰,且前者中央静脉的形状比较规则、管径比后者的大;糖原在前者肝脏组织中的储存量比后者少;两者肝脏中的胶原纤维较少,且无肌纤维。以上结果均可说明静宁鸡肝脏的发育比海兰褐鸡的快。试验结果可为静宁鸡和海兰褐鸡解剖学和组织学方面的研究提供参考。