羧甲基纤维素钠对猪精液常温保存效果的影响

在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。     

新西兰兔精液冷冻保护剂的筛选

本试验的目的是分析在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中分别添加不同浓度的海藻糖、透明质酸、维生素E(Ve)、超氧化物歧化酶(SOD)对兔精液冷冻保存效果的影响,以冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率等作为质量评定指标,筛选出效果较好的新西兰兔精液的冷冻保护剂种类及浓度。结果表明,精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度的海藻糖均未提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加0.5%和1%的透明质酸提高了兔精液冷冻后的精子活率(P0.05),但各组间质膜完整率和顶体完整率无显著差异;添加2 g/L Ve提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加4 000 IU的SOD提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05)。结果证实,在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中添加适宜浓度的Ve和SOD可提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牛冷冻精液品质及受精能力的影响

本试验旨在探究牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对精液品质及受精能力的影响。在牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度(0、5、10和20μmol·L~(-1))EGCG,38.5℃孵育1h后,检测精子动力学参数、结构完整性、精子中相关酶活力和体外受精能力。结果表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理显著提高了精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz,P0.05);与对照组相比,5、10和20μmol·L~(-1)EGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P0.05);5和10μmol·L~(-1 )EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理能够显著提高精子中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,10μmol·L~(-1 )EGCG处理降低乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理牛冷冻-解冻精液能提高精液品质及受精能力。     

添加咖啡因、亚牛磺酸对牛精子功能的影响

为研究获能液中添加咖啡因和亚牛磺酸对牛精子功能的影响,本研究将荷斯坦牛冻精解冻后分别添加在含不同浓度咖啡因(0、2.5、5.0、7.5mmol/L)或亚牛磺酸(0、5、10、20、40μmol/L)的获能处理液中,且每个处理组加入约200μL的精液,在CO_2培养箱里经上游处理45min,以评估咖啡因和亚牛磺酸对牛精子活力、顶体及质膜完整性的影响,进而探讨在获能液中亚牛磺酸替代咖啡因的效果。结果显示,添加2.5、5.0mmol/L咖啡因组经上游法获能处理后的牛精子活力和顶体完整率均显著高于对照组(P0.05),且2.5mmol/L咖啡因组精子活力最高;添加10、20μmol/L亚牛磺酸组经上游法获能处理后的牛精子活力、顶体完整率和质膜完整率均显著高于对照组(P0.05),且20μmol/L亚牛磺酸组的精子功能参数值最高;将筛选的最佳浓度2.5 mmol/L咖啡因和20μmol/L亚牛磺酸采用同样的方法处理,发现20μmol/L亚牛磺酸组的精子顶体完整率和质膜完整率均显著高于2.5mmol/L咖啡因组和对照组(P0.05)。因此,20μmol/L亚牛磺酸可以替代2.5mmol/L咖啡因用于体外受精体系中的精子获能处理,有助于提高精子功能参数。     

红景天多糖对牛精液冷冻效果影响的研究

为了进一步提高冷冻-解冻后牛精液品质和精子抵抗低温打击的能力,试验将0.02,0.04,0.06,0.08,0.1mg/mL5个浓度梯度的红景天多糖分别添加到牛精液冷冻稀释液中,比较了不同浓度红景天多糖对牛精液冷冻后精子质量的影响。结果表明:红景天多糖相对于对照TCG稀释液能够显著改善和提高牛精液的冷冻效果,当添加量为0.06mg/mL时,效果良好,与对照组比较活率提高了13.8%,差异显著(P0.05);顶体完整率、质膜完整率和精子运动的各项参数均高于对照组,差异显著(P0.05)。说明红景天多糖对牛精子冷冻保护效果良好。     

添加褪黑素对牛精液品质的影响

为探讨褪黑素(melatonin,MLT)在牛精液保存中的抗氧化作用,本研究利用目测法、低渗膨胀法和考马斯亮兰染色法分析了不同MLT浓度(0、10^-3、10^-4和10^-5 mol/L)和不同孵育时间(1、4和8 h)对精子活力、质膜和顶体完整性的影响。结果发现,与对照组相比,在稀释液中分别添加10^-3和10^-4 mol/L MLT均可显著提高精子活力、质膜完整率和顶体完整率(P＜0.05),且10^-3 mol/L MLT添加效果最佳;MLT(10^-3 mol/L)组在27 ℃孵育1、4 h后,其精子的活力、质膜完整率和顶体完整率均显著高于对照组(P＜0.05)。因此,添加10^-3 mol/L MLT可明显改善牛精液品质,提高牛精液的保存时间和保存质量。     

辅酶Q10对绒山羊精液冷冻保存效果的影响

旨在探讨辅酶Q10对绒山羊精液冷冻保存效果的影响。利用添加不同浓度辅酶Q10(4、40、400?滋g/mL)的精液冷冻稀释液对绒山羊精液样本进行冷冻保存,待冷冻精液解冻后,采用流式细胞仪和计算机辅助精液分析系统(CASAS)分别检测不同精液样本的精子活率、质膜完整率、顶体完整率、DNA完整率、线粒体膜电位和细胞内ROS水平。结果表明,当冷冻稀释液中添加浓度为40μg/mL辅酶Q10时,经历冷冻—解冻过程的绒山羊精液样本的精子活率、质膜完整率、顶体完整率均显著高于对照组(P<0.05);在冷冻稀释液中添加浓度为40μg/mL或400μg/mL的辅酶Q10均能显著提高线粒体膜电位并降低细胞内ROS水平(P<0.05)。综上所述,在冷冻稀释液中添加40μg/mL的辅酶Q10能够显著提高绒山羊精子抗氧化能力和冷冻保存效果。     

香菇多糖对牛精液冷冻保存效果的研究

为了研究香菇多糖对牛精液冷冻保存效果的影响,在牛精液冷冻稀释液中添加不同质量浓度(1、5、25、125、625mg/L)的香菇多糖,冻融后检测牛精子活率、动力学参数以及顶体完整率、质膜完整率等。结果表明,25 mg/L组的冷冻保存效果最好,精子活率、质膜完整率、顶体完整率分别达到42.04%、43.57%和63.87%,显著高于对照组(P0.05)。而过高浓度的香菇多糖(125、625mg/L)则显著降低了冻融精子的质量。牛精液冷冻稀释液中添加香菇多糖具有显著的保护作用,其最佳添加浓度为25mg/L。     

稀释液中添加维生素E对宠物犬精液冷冻效果的影响

在宠物犬冷冻精液稀释液中添加质量浓度为0,200,400,600μg/mL的维生素E,以观察对精液冷冻效果的影响。结果表明:冷冻精液稀释液中添加维生素E 400μg/mL时,解冻后精子活力显著高于对照组(P0.05);畸形率极显著低于对照组(P0.01),各浓度维生素E组精子解冻后体外存活时间均极显著高于对照组(P0.01),解冻后精子顶体完整率和冻后精子运动速率(VAP、VSL、VCLL)较对照组都有所提高,但差异不显著(P0.05)。综合各项指标后表明以质量浓度为400μg/mL维生素E组的效果最好。     

稀释液中添加精氨酸和牛血清白蛋白对驴冻精品质的影响研究

为了探究在驴精液冷冻稀释液中添加不同浓度的精氨酸和牛血清白蛋白(BSA)对德州驴冷冻精液品质的影响,并找出两种试剂混合最佳添加浓度,试验用分别添加不同浓度的精氨酸(0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mg/mL)和BSA(1,2,3,4,5 mg/mL)的常规驴精液冷冻稀释液对德州驴精液进行稀释,稀释后的精液液氮冷冻保存30 d后解冻,检测精液的精子活率、顶体完整率及质膜完整率,找出最佳浓度;然后选择精氨酸和BSA最佳浓度及其左右相邻浓度,两两组合成9个浓度组合对德州驴精液进行稀释,然后根据上述步骤找出最佳浓度组合。结果表明：单独添加精氨酸时,浓度为1.5 mg/mL时精液的精子活率、顶体完整率及质膜完整率较优于其他浓度,其中顶体完整率与未添加精氨酸相比显著提高(P<0.05)。单独添加BSA时,浓度为3 mg/mL时精液的精子活率、质膜完整率较优于其他浓度,但对顶体完整率无显著改善作用,其中精子活率、顶体完整率与未添加BSA相比极显著提高(P<0.01);精氨酸和BSA联合添加时(除1.5 mg/mL×3 mg/mL、1.5 mg/mL×4 mg/mL、2.0 mg/...     

维生素P对低温保存猪精液的影响

在猪精液稀释液(Zorlesco)中分别添加0,40,80,120,160,200μg/mL的维生素P,研究其对猪精子低温保存的影响。结果表明,维生素P的添加显著延长了猪精子低温保存时间,在各试验组中,维生素P的最适添加浓度为160μg/mL。在该浓度下,维生素P并对第3天时精子的活力、活率、顶体完整率、低渗肿胀率及线粒体活性作用效果不明显(P0.05)。在第6天时,维生素P显著地提高了精子的活力、活率、顶体完整率和质膜完整率(P0.05),但对精子线粒体活性没有显著影响(P0.05)。在保存第9天时,猪精子的活力、活率、顶体完整率、低渗肿胀率及线粒体活性与对照组相比具有显著的提高(P0.05)。     

红景天多糖对藏猪精液冻后品质及精子基因组DNA甲基化的影响

在藏猪精液的冷冻液中添加不同质量浓度的红景天多糖(0,2,4,6,8,10mg/L),制成高密度细管冻精,以冷冻解冻后精子活率、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为精液品质的评价指标,筛选最适红景天多糖添加质量浓度;用甲基化荧光定量法检测3组(鲜精组、未添加组、最适添加组)精子基因组DNA甲基化的水平。结果显示:添加红景天多糖质量浓度为6mg/L组的精子活率显著高于其他组(P<0.05),该组精子畸形率、精子顶体完整率、精子质膜完整率也显著好于未添加组(P<0.05);这3组精子基因组的DNA甲基化水平(0.610 5±0.080 0,0.945 7±0.043 7,0.680 2±0.051 0)中,最适添加组虽显著高于鲜精组(P<0.05),但却显著低于未添加组(P<0.05)。结果表明:在藏猪精液冷冻液中添加质量浓度6mg/L的红景天多糖不仅可以明显改善藏猪精液冻后品质,而且可以明显减少冷冻对藏猪精子基因组DNA甲基化水平的影响,这将为提高藏猪精液冷冻保存效果的进一步研究提供参考。     

冷冻稀释液和抗氧化剂对金华猪精液冷冻效果的影响

为了探究不同冷冻稀释液及抗氧化剂对金华猪精液冷冻效果的影响,试验通过手握法采集健康的20月龄纯种金华猪公猪精液,采用两种常用的商品冷冻稀释液(A、B)稀释精液,然后液氮冻存1 d,解冻后测定精液精子活力、顶体完整率和质膜完整率指标,筛选最适金华猪精液冷冻保存的稀释液;在最适冷冻稀释液中添加20,30,40,50μmol/L表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG),以未添加EGCG和上述添加EGCG的冷冻稀释液稀释金华猪精液,然后液氮冷冻保存精液1 d,解冻后测定精液精子活力、顶体完整率、质膜完整率及抗氧化指标[包括活性氧(reactive oxygen species, ROS)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性],筛选EGCG的最适添加量。结果表明：两种商品冷冻稀释液的精子活力、顶体完整率、质膜完整率差异不显著(P>0.05),但考虑到价格成本,选择B冷冻稀释液作为后续试验的冷冻稀释液。随着EG...     

精液稀释液中添加维生素C和E对陆川猪精液冷冻效果的影响

为了研究维生素C和E作为精液冷冻保护剂对陆川猪细管冷冻精液品质和精浆中抗氧化物酶活性影响的影响,在精液稀释液中分别添加0、300、600以及900μg/m L的维生素C或E,对陆川猪稀释精液进行冷冻-解冻处理后,检测精液冻后的精子活力、运动速率、线粒体活性、顶体和质膜完整性、存活时间等常规参数,采用试剂盒测定精浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱胺肽过氧化物酶(GSHPx)的活性。结果表明:精液稀释液中添加300μg/m L的维生素C可显著提高冻后精子的体外存活时间以及CAT酶活性(P0.05);同浓度的维生素E仅可提高精子的存活时间(P0.05);添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高解冻精子的活力、线粒体活性、质膜和顶体完整性、存活时间以及抗氧化物酶活性(P0.05),同时明显降低精子畸形率(P0.05);当维生素C或E添加量为900μg/m L时,虽可提高线粒体活性、质膜和顶体完整性、CAT酶活等部分指标参数(P0.05),但精子活力与对照组相比没有差异(P0.05)。提示:冷冻稀释液中添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高陆川猪精液冷冻保存效果。     

锰苯甲酸卟啉对猪精液冷冻保存效果的影响

本实验旨在探究锰苯甲酸卟啉（MnTBAP）对猪精液冷冻保存的影响,从而筛选出适用于猪精液冷冻的MnTBAP浓度。实验一共分为6组：新鲜组、冷冻对照组、不同浓度MnTBAP组（在冷冻液I中添加50、100、150、200μmol/LMnTBAP）,对冷冻后猪精子动力学参数以及活率进行检测,从而筛选出适用于猪精子冷冻的最佳MnTBAP浓度。实验二共分成3组：新鲜组、冷冻对照组、最佳MnTBAP浓度组,对冷冻后猪精子质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数（DFI）、线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）进行检测。结果表明：与其他浓度的MnTBAP组相比,100μmol/L MnTBAP对动力学参数以及活力改善最显著;与冷冻对照组相比,100μmol/L MnTBAP组猪精子质膜完整率、顶体完整率、MMP和抗氧化酶显著升高,DFI、ROS显著降低。综上所述,在冷冻液稀释中添加MnTBAP可以改善猪精液冷冻后的质量,且最适添加浓度是100μmol/L。     

葡萄籽原花青素对猪精液冷冻保存效果的研究

在猪精液冷冻基础液中分别添加0μg/mL,10μg/mL,20μg/mL,30μg/mL,40μg/mL,50μg/mL的葡萄籽原花青素,通过对冷冻-解冻后猪精子的动力学参数、生理参数以及生化参数的检测,旨在研究其对猪精液冷冻保存效果的影响。结果表明,当葡萄籽原花青素添加浓度为20μg/mL和50μg/mL时,解冻后精子活力、活率、顶体完整率、线粒体活性、质膜完整性和酶活性都显著高于对照组(P0.05),但是两组间比较差异不显著(P0.05)。与对照组和其他实验组相比,当葡萄籽原花青素添加浓度为40μg/mL时,精子畸形率降低了9.30%,精子活力、活率、顶体完整率、线粒体活性和质膜完整性分别提高了12.59%、11.78%、14.27%、12.53%和11.96%(P0.05)。当葡萄籽原花青素的添加量为40μg/mL时,MDA的量最低为1.16nmol/mg,SOD和GSH-Px酶活性最大分别为77.36U/mg、35.21U/mg。结果显示,在猪精液稀释液中添加一定浓度的葡萄籽原花青素,可以显著提高冷冻-解冻后猪精子品质和抗氧化能力。当葡萄籽原花青素的添加量为40μg/mL时,其对猪精子冷冻保存效果最好。     

VE对4℃保存娟珊牛精液品质的影响

为研究维生素E对4℃保存娟姗牛精液品质和抗氧化保护作用的影响,用假阴道法采集体格健硕的娟姗牛精液,在稀释液中分别添加0 mg/mL、0.01 mg/mL、0.03 mg/mL、0.05 mg/mL、0.07 mg/mL、0.09 mg/mL的维生素E,将新鲜精液稀释至1.47×10~6/mL,于4℃环境下保存48 h,以评价精子活力、精子顶体完整率、谷胱甘肽还原酶(GR)和过氧化氢酶(CAT)活性等精液品质指标。结果显示:娟姗牛精液4℃保存至48 h时,维生素E 0.03 mg/mL添加组娟姗牛精子活力显著高于0.05 mg/mL维生素E添加组(P0.05),极显著高于对照组和其他试验组(P0.01);维生素E 0.03 mg/mL添加组牛精子顶体完整率极显著高于对照组和其他试验组(P0.01);GR酶活性维生素E 0.03 mg/mL添加组牛达71.55 U/L,较0.05 mg/mL维生素E添加组和0.07 mg/mL维生素E添加组高,且差异显著(P0.05),较对照组和其他添加组差异极显著(P0.01);维生素E 0.03 mg/mL添加组牛精子CAT值达5.68 U/mL,极显著高于对照组和其他添加组(P0.01)。说明在精液稀释液中添加0.03 mg/mL的维生素E可明显提高4℃环境保存娟姗牛精液的品质。     

维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理研究

以无角多赛特公羊为试验对象,采用2步稀释法,在冷冻精液稀释液中添加维生素E,对维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理进行初探.试验1证明,试验组的活率(0.435)极显著高于对照组(0.365)(P＜0.01),其精子顶体总异常率(33.72%)极显著低于对照组(44.35%)(P＜0.01),且顶体完整率与冻精活率相关极显著(r＝0.662,P＝0.037).添加维生素E可降低冷冻对精子顶体的损害程度,冷冻精液品质得到显著改善.试验2结果表明添加维生素E后AST、ALP、GGT、CK、LDH与ALT的活性均与对照组无显著差异.但对照组与试验组比较,GOT及CK释放量与解冻精子的活率负相关下降(分别为r＝-0.536,r＝-0.209及r＝-0.419,r＝-0.051),LDH的释放量与解冻精子的活率之间正相关(r＝0.123与r＝0.507).试验3结果证明在绵羊冷冻精液稀释液中添加维生素E可以显著提高精子顶体酶的活力,分别为82.91 mu/ml和99.82 mu/ml(P＜0.05).绵羊冷冻精液精子顶体酶活力与精子活率呈正相关(r=0.490),与精子畸形率呈负相关(r=-0.122),冷冻精子活率随着精子顶体酶活力的提高而提高.     

牛血清白蛋白对犬精液冷冻保存效果的影响

为了研究牛血清白蛋白(BSA)对犬精液冷冻保存效果的影响,试验配制含有不同浓度(0、3%、5%、7%)BSA的精液冷冻稀释液用于保存犬精液,测定冷冻-解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量及线粒体膜电位(MMP)等指标。结果表明：3%和5%BSA组冷冻-解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和T-AOC均显著高于对照组(P<0.05);3%BSA组MDA含量显著低于其他各组(P<0.05),线粒体膜电位值显著高于其他各组(P<0.05);除精子活力外,7%BSA组和对照组之间各项指标均差异不显著(P>0.05)。说明在犬精液冷冻稀释液中添加BSA能有效改善冷冻-解冻后精液品质,对提高精子抗氧化能力及代谢能力都有显著效果,BSA的最适添加浓度为3%。     

维生素C对荷斯坦公牛X精子冻后品质的影响

试验旨在研究维生素C（VC）对荷斯坦公牛性控精液冻后品质的的影响。在精液稀释液中分别添加0,2.0,4.0,6.0,8.0 mg/mL的VC进行试验。将装有X精子的细管冻精解冻（37.5 ℃,30 s）后分析0～3 h精子活率及0～4 h质膜完整率和顶体完整率的变化情况。结果表明,当添加量为6.0 mg/mL时,解冻后0 h精子活率与对照无差异显著,解冻后1、2、3 h精子活率与对照组差异显著（P<0.05）。当VC的添加量为4.0 mg/mL时,解冻后0 h时X精子质膜完整率显著高于对照组(P<0.05),解冻后1 h与对照相比差异不显著（P>0.05）,但数值依然高于对照组。解冻后存放2、3、4 h与对照组相比差异显著。添加量为6.0 mg/mL时,解冻后0 h时X精子顶体完整率显著高于对照组(P<0.05),解冻后1、3 h精子顶体完整率与对照组相比差异显著（P<0.05）,2、4 h与对照相比差异不显著（P>0.05）,但顶体完整率高于对照组。在冷冻精液稀释液中VC的适宜添加量为4～6 mg/mL,此浓度下可有效提高荷斯坦公牛X精子解冻后活率、质膜完整率及顶体完整率。