骆驼刺源产乳酸的枯草芽孢杆菌分离鉴定和菌株特性研究

为了解疏叶骆驼刺青贮中乳酸菌的组成,用MRS培养基对骆驼刺青贮中的细菌进行分离和纯化,通过革兰氏染色、细胞形态学观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析对分离的单菌落进行菌株特性研究和种属鉴定。结果表明:L14菌株呈杆状,G+,有芽孢;产乳酸,液化明胶,水解淀粉,触酶阳性,温度生长范围15~55℃,酸生长范围p H值为4~7,Na Cl生长范围为2%~10%,可利用多种碳源和氮源;16S rDNA测序结果显示该菌株与ATCC 6051的相似性为98.7%,说明该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

高寒地区菊芋青贮物料耐低温乳酸菌的筛选与鉴定

为筛选可提升高寒地区菊芋(Helianthus tuberosus)青贮发酵品质的耐低温乳酸菌,本研究以‘青芋2号’菊芋青贮物料为材料,利用平板培养法分离乳酸菌株,分析菌株生理生化特性,并通过16S rRNA测序进行菌株种属鉴定。结果表明,菊芋青贮物料中共分离得到34株乳酸菌株,经低温及生理生化筛选获得13株耐低温乳酸菌株,包括11株同型发酵乳酸菌和2株异型发酵乳酸菌,其耐酸性和耐盐性均较强;经产酸和生长能力对比,GN02菌株生长最快(OD=2.63),GN10菌株具有更强的产酸能力(pH=3.59),XN25菌株兼具较强的生长和产酸能力;16S rRNA测序鉴定出9株植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)、1株戊糖乳杆菌(Lactiplantibacillus pentosus)、1株棒状乳杆菌(Lactiplantibacillus coryniformis)、1株短乳杆菌(Lactiplantibacillus brevis)及1株无法鉴定。本研究筛选出适合高寒地区菊芋青贮发酵的耐低温植物乳杆菌、戊糖乳杆菌、短乳杆菌各1株。     

谷草青贮用耐低温产乳酸芽孢杆菌的筛选、鉴定及性质研究

本试验旨在筛选一株谷草青贮用耐低温产乳酸芽孢杆菌,首先通过溴甲酚紫平板扩散法和气相色谱法分离得到1株乳酸产量较高的菌株。再通过形态学观察、16S rDNA序列发育树分析和生理生化试验对目的菌株进行种属鉴定。最后对目的菌株进行性质研究,包括pH耐受性、温度耐受性、抑霉菌试验、产酸时间。结果表明:筛选获得了1株产乳酸含量较高的菌株F-1,该菌株在10℃、180 r/min培养48 h后乳酸产量为1328.9 mg/L,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。性质研究发现,菌株F-1耐酸,在pH为3.0的条件下可以生长;该菌耐低温,在10℃时生长良好;对禾谷镰刀菌有明显的抑制作用;摇床培养12 h菌株开始产酸,并且随着发酵时间的延长产酸量越来越大。     

自然青贮多花黑麦草优良乳酸菌的筛选及对多花黑麦草青贮品质的影响

为了筛选出适用于多花黑麦草青贮发酵的优良乳酸菌菌株,从自然青贮多花黑麦草中分离乳酸菌,筛选并鉴定生长快速且产酸效率高的菌株,分析其生理生化特征以及对多花黑麦草青贮品质的影响。利用传统的平板培养法,从自然青贮多花黑麦草中分离获得180株乳酸菌。其中,5株乳酸菌生长快速且产酸能力强,均能够在NaCl浓度为3.0%,温度为15~35 ℃,pH为3.5~7.0的MRS液体培养基中良好生长。经16S rRNA基因序列比对鉴定,菌株PR_LAB_9、PR_LAB_34、PR_LAB_67和PR_LAB_86为植物乳杆菌,PR_LAB_76为戊糖片球菌。对菌株进行生长曲线和产酸性能测定,该5株乳酸菌均能够在12 h内快速繁殖和产酸,菌株PR_LAB_76在24 h内生长速率和产酸效率均优于其他4株乳酸菌。进一步分析添加该5株乳酸菌对多花黑麦草青贮发酵品质、营养成分、微生物数量的影响,发现该5株乳酸菌均能提高多花黑麦草的青贮品质,包括显著降低青贮料pH和氨态氮含量,减少干物质损失,提高可溶性碳水化合物含量。其中,菌株PR_LAB_76处理组多花黑麦草青贮品质最优,干物质含量、粗蛋白含量、乳酸含量、乳酸菌数量显著高于其他4株乳酸菌处理组,且pH值、酵母菌数量显著低于其他4株乳酸菌处理组。综上,戊糖片球菌PR_LAB_76可作为多花黑麦草青贮的备选菌株。     

青贮用乳酸菌的分离鉴定及生物学特性评价

本研究旨在从构树青贮、玉米青贮及饲喂构树青贮的羔羊粪便中分离鉴定可饲用乳酸菌,为开发构树青贮用乳酸菌提供试验材料。以构树青贮、玉米青贮以及饲喂构树青贮的羔羊粪便为菌株分离来源,使用含有1%碳酸钙的MRS琼脂培养基分离纯化乳酸菌,获得菌株经16S rRNA测序鉴定后对其中可饲用菌株进行生长、产酸性能的筛选,评估在pH 3.0、3.5、4.0条件下存活率和对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑制能力,并对筛选菌株进行菌株之间拮抗性测定。结果表明：获得可饲用乳酸菌共37株,包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)4种,不同的菌株在生长和产酸性能上表现出差异,在不同pH中存活率和抑菌性能也具有菌株特异性。综合比较不同菌株之间的生物学特性,植物乳杆菌GQ-3-2、GQ-3-29及GQ-5-4具有良好的生长、产酸及抑菌性能;粪肠球菌Y-3-15在发酵2 h进入对数生长期,能够为植物乳杆菌的大量繁...     

青稞秸秆青贮饲料中优良乳酸菌的筛选及鉴定

为筛选出适合于青藏高原青稞秸秆青贮用的优良乳酸菌菌株,研发新型青贮添加剂。分离了青藏高原青稞(Hordeum vulgare)秸秆青贮饲料中的乳酸菌,利用传统微生物培养法和16S rRNA序列分析法对乳酸菌进行鉴定,探讨其生物学特性,并筛选出优良的乳酸菌菌株。共分离获得4株同型发酵乳酸菌菌株,其中HG24,LH2为植物乳杆菌(Lactobacillusp lantarum),LH9为乳酸片球菌(Pediococcusacidi lactici),LH7为戊糖片球菌(Pediococcusp entosaceus)。分离出的乳酸菌菌株均能在5～30℃,pH 3.5～7.0及3.0%和6.5% NaCl培养基中生长良好,其中HG24,LH2在pH值为3的培养基中仍能生长,体现出分离的乳酸菌菌株具有耐低温、耐酸性和耐盐性强的特征。4株乳酸菌菌株中HG24和LH2产酸能力强、生长速率快,最适宜于用作青贮乳酸菌菌种。     

狼尾草属牧草青贮优良乳酸菌的筛选及生理生化特性研究

本研究以"桂闽引"象草和"桂牧1号"杂交狼尾草为对象,探究其微生物和乳酸菌的多样性,并对乳酸菌进行分离鉴定,以期筛选出适宜西南地区狼尾草属牧草青贮用的优良乳酸菌菌株。研究利用微生物学鉴定法及16S rRNA序列分析对分离得到的菌株进行鉴定,共分离获得48株乳酸菌,其中鲜草样品和青贮样品各获得24株。其中分离得到4株产酸能力强的乳酸菌,分别为戊糖片球菌F04(Pediococcus pentosaceus),植物乳杆菌F17、F05和S694(Lactobacillus plantarum)。4株乳酸菌均能在Na Cl浓度为3.0%和6.5%,温度为10℃~40℃及p H 3.5~8之间的液体培养基中良好生长。此外,4株菌在p H为3和温度为45℃的环境条件下生长较弱,且均不能在50℃的环境条件下生长。菌株F04,F17和S694均能在12h内迅速繁殖和产酸,而菌株F05有明显的生长滞缓期,24h后才能大量生长,故不能达到快速降低p H的目的。F17和S694生长曲线和产酸效率相当,但S694利用糖源范围更广。所以,综合考虑可将菌株F04和S694作为狼尾草属牧草青贮的备选菌株。     

纤维素降解菌的筛选及在狼尾草青贮中使用效果评价

纤维素降解菌对改善牧草品质和提高动物对饲草的利用率具有重要作用。引进多种纤维素降解菌并从中筛选出酶活力较高的11,21和36号菌株。利用筛选出的3株菌株的发酵液,开展在青贮杂交狼尾草中的使用效果评价[设4个处理,处理1为未添加菌液的对照组(CK),处理2,3,4分别添加11,21,36号菌株菌液]。结果表明,添加纤维素降解菌能提高青贮牧草乳酸含量,处理2,3,4的乳酸含量比CK提高了19.42%(P<0.05),38.35%(P<0.05)和4.85%(P>0.05);添加纤维素菌液进行青贮的3个处理的中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和半纤维素(HC)的含量均低于CK和青贮前,其中处理3的NDF、ADF和HC含量最低,表明筛选出的3种纤维素降解菌菌株均能改善青贮品质,不同程度地降解了牧草纤维素的含量,其中处理3(21号菌株)降解纤维素的效果最为明显,青贮料营养品质最好。     

俄罗斯木霉菌株GAU 1-X-2的生物学特性

从碳氮源、酸碱度及生长温度等方面对俄罗斯木霉(Trichoderma rossicum)菌株GAU 1-X-2的生物学特性进行了研究。结果表明,俄罗斯木霉菌株GAU 1-X-2的生长温度范围为10~35℃,最适温度为20℃;菌落在pH值为5.0~12.0的培养基上能够生长,pH为7.0时,生长最快,pH值为8.0时产孢量最大;营养生长最好的碳源为甘露醇,产孢量最好的碳源为葡萄糖;营养生长最适氮源为蛋白胨,在供试的7种氮源中,培养6d未观测到该菌株产孢;完全黑暗条件有利于菌丝生长和产孢;孢子致死温度为68℃,10min。     

玉米秸秆青贮饲料发酵早期优良乳酸菌的分离和鉴定

以发酵初期(5 d)的玉米秸秆青贮饲料为材料,分离获得乳酸菌菌株。经过表型特征,不同温度、p H和盐浓度生长,不同糖发酵底物和生长产酸速率筛选鉴定,选取3株乳酸菌通过测定16S rRNA序列,进一步鉴定属种。结果表明:菌株C1、C5和C8分别为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii),均可以在15~45℃环境下生长。菌株C5能在6%Na Cl,p H 3.0~6.0培养基中生长,并且与菌株C1和C8相比,具有更强的产酸和耐酸能力,适宜用作玉米秸秆青贮生产的乳酸菌添加剂。考虑到乳酸杆菌和肠球菌在青贮发酵过程中的作用,亦可将植物乳杆菌C5与肠球菌(C1和C8)组合添加用于玉米秸秆青贮饲料生产。     

奶牛乳房炎乳样产色葡萄球菌的分离鉴定及酸性电解水体外杀菌试验

为了解某奶牛养殖场奶牛临床乳房炎的致病菌及酸性电解水对奶牛乳房炎致病菌的体外杀菌效果,本试验采集该奶牛养殖场临床乳房炎患病奶牛乳样,对乳样中的病原菌进行分离后通过革兰氏染色和镜检、生化试验、16S rDNA基因序列分析鉴定病原菌种类,并对分离菌株进行药敏试验和动物致病性试验,通过体外杀菌试验分析酸性电解水对分离菌株的杀菌效果。结果表明：分离菌株在Baird-Parker(BP)培养基上生长良好,培养24 h后可见菌落表面光滑,呈灰黑色,无透明圈。革兰氏染色、镜检可见分离菌株呈蓝紫色并排列成葡萄串状,将该分离菌株命名为QSPT2023。分离菌株QSPT2023与葡萄球菌属的生化特性基本一致;16S rDNA基因序列与GenBank收录的产色葡萄球菌OP068076.1的基因序列相似性最高,为99.93%;与产色葡萄球菌OP068076.1位于系统发育树的同一分支,亲缘关系最近;与产色葡萄球菌KJ783397.1、LC317309.1、ON715882.1的亲缘关系较近,与金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌等的亲缘关系较远;对氯霉素、头孢噻肟、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢他啶、头孢唑啉...     

一株中度嗜盐菌的分离鉴定及其生物学特性研究

从山东东营的盐碱地土壤中分离出一株中度嗜盐菌BLCC9-0014,经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16Sr DNA序列分析相似度为99%,确定该菌株为特氏盐芽孢杆菌。并研究了该菌株的生长特性、抑菌特性及部分产酶特性。结果表明:该菌株嗜盐能力较强,可以在25%的盐浓度中生长良好,生长最适盐浓度为5%~15%,在p H6.0~10.0之间生长良好,最适生长温度为30℃;对鱼链球菌、嗜水气单胞菌及金黄色葡萄球菌有一定的体外抑制作用,能够产生胞外淀粉酶和蛋白酶。     

籽粒苋与青贮玉米混贮品质及微生物特性研究

以籽粒苋和全株玉米为原料,按不同比例10∶0(T₁)、7∶3(T₂)、5∶5(T₃)、3∶7(T₄)、0∶10(T₅)混合青贮, 60 d后,检测青贮材料的发酵品质以及青贮前、后营养成分、微生物种类、数量变化,并分析乳酸菌多样性,以明确添加玉米对改善籽粒苋青贮发酵品质和微生物特性的作用,为籽粒苋青贮饲料的开发利用提供有效途径。结果表明,籽粒苋单独青贮品质不佳,通过添加玉米可显著降低青贮材料pH和氨态氮/总氮的值,提高干物质和总有机酸含量,当玉米添加比例超过50%时,青贮品质良好。在青贮发酵乳酸菌群演替过程中优势菌群的种类和数量决定青贮饲料的乳酸/乙酸,是影响发酵品质的主要因素之一。乳酸球菌中的肠球菌、乳球菌和类肠膜明串珠菌产酸能力强,是青贮发酵的启动菌株,乳杆菌则是青贮稳定期的主要菌群。     

青贮料的发酵品质和青贮制作中存在的乳杆菌噬菌体之间的关系

<正> 青贮料是利用乳酸发酵过程的可贮存饲料。为了培育一种适于日本西南部,如Kyushu和Okinawa气候条件的青贮接种剂,作者分离出许多在高温(>30℃)、高水分含量(>80％)条件下产生高乳酸的同型乳杆菌菌株。在制作乳酸菌青贮过程中,噬菌体的存在是这些菌株商品化应用的主要问题。     

利用葡聚糖或木聚糖乳酸菌的筛选及特性研究

筛选分解利用葡聚糖或木聚糖的乳酸菌作为饲料作物青贮添加剂。从30株供试乳酸菌中筛选能够利用葡聚糖或木聚糖产酸的菌株。通过抑菌活性、生长情况、碳源发酵及利用饲料作物粉产酸试验研究菌株的特性,结合形态学特征和16S rRNA序列分析鉴定菌种。筛选得到1株利用葡聚糖及木聚糖产酸效果较好的乳酸菌ZZU 360;该菌株对G+及G-细菌均具有较好的抑菌活性,在45和50℃及pH 3.5、4.0和4.5环境条件下生长较好,能够耐受6.5%盐溶液,利用碳源种类比较广泛,对40%干物质的苜蓿粉、饲料桑粉及饲料槐粉均具有较好的酸化作用,菌株ZZU 360被鉴定为戊糖片球菌。该菌株在可溶性糖短缺的饲料作物青贮中具有潜在的应用价值。     

Lactobacillus plantarum A491的筛选及其在苜蓿青贮中的应用研究

为筛选适合苜蓿青贮用乳酸菌,本研究对64株苜蓿附生乳酸菌进行多糖利用能力的考察,结果显示有5株乳酸菌能较好利用葡聚糖和木聚糖产酸,进一步的抑菌活性试验筛选出对李斯特氏菌、大肠杆菌和沙门氏菌都有较好抑菌活性的菌株A491。通过生理生化试验、16S r RNA基因序列分析及rec A基因扩增试验将筛选菌株A491鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。将菌株A491进行苜蓿青贮应用研究,青贮95 d后,与自然青贮和添加商业添加剂的处理组相比,添加菌株A491处理组的乳酸含量较高(P0.05),而p H较低(4.62)(P0.05),有害菌较少,发酵品质较好。表明菌株A491在苜蓿青贮中具有潜在的应用价值。     

西南高温高湿地区青贮中天然乳酸菌群落 结构特征及优质乳酸菌的筛选

为提高湿热地区青贮饲料的品质,本研究首先分析了从西南高温高湿地区青贮饲料中分离到的227株天然乳酸菌种群结构,再根据乳酸菌在高温条件下的生长活性和产酸能力筛选到4株优质乳酸菌(LP149、LS358、LR753和LPA761),并对菌株生理生化特性和生长、产酸曲线进行了测定。结果表明,天然植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是高温高湿地区青贮料中最常见的乳酸菌菌株(占62.55%),其次是鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)和副干酪乳杆菌(L. paracasei),分别占总乳酸菌的13.21%和9.25%。所筛选的4株菌株为革兰氏阳性和过氧化氢酶阴性的杆状菌,能够在pH 3.5和45℃的条件下生长。根据生理、生化特征和16S rRNA测序分析,LP149、LS358、LR753和LPA761分别被鉴定为植物乳杆菌、唾液乳杆菌(L. salivarius)、鼠李糖乳杆菌和副干酪乳杆菌。在37和45℃条件下的菌株生长和产酸曲线结果表明,筛选出的4株乳酸菌有良好的高温适应性(45℃),不仅生长速度快,产酸能力强,耐盐性较好,对糖源利用范围广,而且对酸性环境有较好的适应性,可以作为后续进行高温青贮回填试验的候选菌株。     

N+注入诱导突变乳酸菌筛选及对苜蓿青贮品质的影响

可溶性糖含量低影响乳酸菌添加剂产酸是影响苜蓿(Medicago sativa)青贮品质的重要因素之一。本研究采用N~+注入诱变的方法提高乳酸菌分解纤维素性能,以增强其在苜蓿青贮中的产酸能力。对具有良好抑菌活性及产酸能力的出发菌株植物乳杆菌ZZU A345进行N~+注入诱变,筛选出对羧甲基纤维素钠具有较好分解作用的突变菌株zw2-21和zw3-57,两株突变菌株酸化苜蓿粉的能力相较ZZU A345有显著(P0.05)提高,纤维素内切酶的活性亦高于ZZU A345,但没有显著差异(P0.05);苜蓿青贮试验结果显示,青贮65 d,添加zw2-21的处理组p H降至4.83,显著低于未添加乳酸菌的对照组(p H 5.5),也低于添加ZZU A345的处理组(p H 5.08),但没有显著差异;添加zw2-21的处理组乳酸含量达到1.22%,比添加ZZU A345的处理组提高了一倍。结果表明,N~+注入诱变技术在提高乳酸菌分解纤维素性能及苜蓿青贮高效产酸乳酸菌菌种选育方面具有潜在应用价值。     

海南天然饲草青贮饲料中乳酸菌分离鉴定及优良菌株筛选

为筛选适合热带牧草的高温发酵优良乳酸菌，改善青贮发酵品质，本试验从海南岛不同气候区采集野生草本植物斑茅(Saccharum arundinaceum)、蔓生莠竹(Microstegium vagans)和木本植物银合欢(Leucaena leucocephala)、构树(Broussonetia papyrifera)，青贮60 d后分离纯化乳酸菌，以培养36 h条件下最终发酵液pH≤4且OD(Optical density,吸光度)≥2作为条件初筛乳酸菌。用温度T=40℃，45℃，50℃和pH=3.0，3.5，4.0，6.0，8.0，9.0进行复筛，选取OD值较高的菌株作为优势菌株，再对其进行16S rDNA序列分析、生长和产酸速率测定以及生理生化实验。结果表明，本试验共分离到98株天然乳酸菌，经筛选得到4株优良乳酸菌(15B，10D，13C，14B)。经鉴定，10D，13C，14B为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，15B为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)。菌株15B，10D，13C，14B均耐酸、耐高温、且生长及产酸性能优良，具有良好的青贮潜力并对致病菌具有良好的抑制作用，可作为热带地区制备青贮添加剂的备选菌种。     

一株乳酸片球菌的分离鉴定

研究从青贮饲料中分离筛选获得3株乳酸菌,通过产酸试验、不同温度和pH培养试验及对糖类利用及抑菌试验,筛选出1株适合作为青贮接种剂的优良菌种,通过形态学、生理生化和分子鉴定相结合的方法对获得的菌株进行鉴定,最终确定菌株P1为乳酸片球菌,为青贮接种剂提供优良菌株。