2种中药提取液对兔球虫卵囊孢子化的影响

为了研究青蒿、秦皮这2种中草药不同质量浓度溶液对兔球虫卵囊孢子化的影响,笔者采用饱和食盐水漂浮法分离兔球虫卵囊,再将未孢子化的兔球虫卵囊分别置于不同质量浓度(0.25 g/m L、0.50 g/m L、1.00 g/m L)的青蒿及秦皮中药提取液中,28℃恒温连续培养5 d。每24 h在显微镜下观察兔球虫卵囊的孢子形成情况,计算兔球虫卵囊孢子化率。试验结果表明,2种药物对球虫卵囊孢子化均有抑制效果,但在相同时间、相同浓度时秦皮的抑制作用高于青蒿,且随着药物浓度的增加,对球虫卵囊的孢子化抑制效果也增强。5 d后抑制效果最好的是1.00 g/m L的秦皮,孢子化率为62%;抑制效果最差的是0.25 g/m L的青蒿,孢子化率为85%。     

中草药对兔球虫卵囊孢子化的影响

为了解中草药对球虫卵囊孢子化的影响,将未孢子化斯氏艾美尔球虫卵囊分别在质量浓度为0.25g/mol、0.50g/mol、1.00g/mol的蒲公英、青蒿、白头翁、秦皮药物中进行孢子化,于第4、6、8天观察球虫卵囊的孢子化情况。结果表明,所用中草药对球虫卵囊的孢子化率有一定的抑制作用,白头翁的抑制效果最好,其中以青蒿的抑制效果最差。     

白头翁汤复方及组分对柔嫩艾美耳球虫卵囊的影响

观察白头翁汤复方及组分对球虫孢子化率及孢子化卵囊致病性的影响,探讨白头翁汤的抗球虫机理。结果显示,白头翁及其总皂苷对球虫的孢子化抑制效果较好,白头翁汤、黄柏、黄连和秦皮的抑制效果较差。相同浓度下,随时间的延长,孢子化率呈上升趋势;相同时间下,药物的浓度越高,抑制效果越好;中药处理孢子化卵囊后再接种鸡,各中药组除白头翁汤和白头翁对孢子化卵囊有一定的抑杀作用外,其余各组对孢子化卵囊均无效。     

茶多酚和茶皂素体外抗柔嫩艾美尔球虫的研究

本文主要研究茶皂素(TS)和茶多酚(TP)对未孢子化以及完全孢子化柔嫩艾美尔球虫卵囊的作用效果。首先进行茶皂素和茶多酚体外抑制未孢子化柔嫩艾美尔球虫卵囊试验,然后通过动物模型试验对各试验组肉鸡的存活率、相对增重率、病变值、卵囊值和抗球虫指数的观察和记录,研究茶皂素与茶多酚体外抑制已孢子化柔嫩艾美尔球虫卵囊试验效果。试验结果表明:茶皂素与茶多酚对球虫卵囊孢子化有着明显抑制作用,并且浓度越高,抑制效果越好,二者协同后效果最佳。     

用消毒药抑杀鸡球虫卵囊的试验

本试验按照安全、有效、经济、来源容易的原则，从时鸡球早卵囊有一定抑杀作用的三类消毒药物（酸类、消毒剂类、表面活性剂类）中，筛选了17组不同药物和浓度的搭配组合，设计了3个试验，抑制鸡球中新鲜卵囊孢子化试验；抑杀孢子化卵囊试验；新鲜 囊和孢子化卵囊经药物处理后感染小鼠试验。通过试验，4、7、8、11、13号药物组合对新鲜球虫卵囊的抑杀率是100％，其中7、13号药物组合在抑杀孢子化试验中孢子化率和感染小鸡试验中的感染均为阴性，证明了7、13号药物地鸡球虫卵囊有很好的体外抑杀作用，可作为环境消毒药的首选物在生产上推广。     

青蒿散抗鸡球虫药效研究

为探讨青蒿散对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的防治效果,本试验选取90只健康黄羽肉鸡,分为6组,除空白对照组外,其余各组(感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组)试验鸡均经口感染6×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,各试验组在接种前一天开始用药至试验结束。记录各组试验鸡的眼观病变、组织病理学检查、相对增重率、盲肠病变记分、血便记分、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊值及抗球虫指数(ACI)指标,评价青蒿散不同给药浓度的抗球虫效果。结果显示,空白对照组、感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组的抗球虫指数分别为200.00、72.23、157.19、82.89、125.32和137.06,与感染对照组相比,药物对照组和青蒿散各剂量组的眼观病变、组织病理学检查均有所缓解,青蒿散能减轻病鸡盲肠的肿胀和出血等症状,且病鸡精神状态较感染对照组好;与感染对照组相比,各给药组的平均增重均有所升高,盲肠病变、卵囊值及血便情况减少。综上所述,青蒿散能缓解柔嫩艾美耳球虫侵染鸡盲肠所致的病理症状和组织病变,减少粪便中卵囊的排出数量,有一定的抗球虫效果,且给药浓度越高抗球虫效果越好,具有剂量依赖性。     

温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响

为探讨温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响,试验以7%氨水作为对照组,设置1:50、1:100、1:150的球虫消杀剂溶液组,同时设置生理盐水对照组.各处理液分别在4℃和20℃下与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊在体外相互作用6、12和24h,然后用2.5%重铬酸钾溶液培养处理后的球虫卵囊,观察其孢子化率.结果表明:1:50、1:100、1:150球虫消杀剂在4℃分别处理6、12和24h的卵囊孢子化率均极显著(P<0.01)高于20℃下的对应处理组.球虫消杀剂在20℃下有更好的抑制球虫卵囊孢子化的作用.     

巨型艾美尔球虫卵囊蛋白的特性

用克隆抗体(MAb)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、十二烷磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGA)和蛋白免疫斑点技术法测定了巨型艾美尔球虫孢子化和非孢子化卵囊蛋白的特性。产生了抗孢子化卵囊蛋白的MAb(EM_1、EM_2和EM_4),ELISA结果表明,EM_1与孢子化卵囊蛋白反应,EM_2可与孢子化和非孢子化卵囊蛋白反应,EM_4可与非孢子化卵囊蛋白反应。孢子化卵囊含200干道尔顿(KD),非孢子卵囊几乎没有明显的高分子蛋白区带。     

亚硝基谷胱甘肽对孢子化卵囊、孢子囊活力及致病力的影响

以亚硝基谷胱甘肽(S-nitroso-glutathione,GSNO)处理柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)卵囊和孢子囊,通过检测子孢子的脱囊情况以及卵囊和孢子囊的致病力来探讨GSNO对E.tenella卵囊和孢子囊活力的影响。体外脱囊试验结果表明,GSNO处理孢子囊的脱囊率只有1.01%~1.48%,而GSNO处理的孢子化卵囊的脱囊率为45.73%~63.90%。接种试验表明,各接种组鸡均发生了明显的临床球虫病,但与攻毒对照组相比,只有GSNO处理的孢子囊组鸡的发病情况有所减轻,这说明GSNO能明显抑制孢子囊的脱囊,并能在一定程度上减轻其致病力,而对孢子化卵囊无明显抑制作用。     

不同培养方式对鸡球虫卵囊孢子化率的影响

兑水离心洗净早熟艾美耳球虫(Eimeria praecox)保存虫株,经口感染雏鸡增殖卵囊,收集、分离刚排出粪便中的卵囊,以不同培养液、培养液深度、卵囊密度和3种状态的4种方式(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)进行卵囊培养试验。其结果方式Ⅰ:卵囊平均孢子化率以2.5%重铬酸钾组(91.98%)为最高,以鸡粪汁组(5.18%)为最低并与其他2组存在极显著差异(P<0.01);方式Ⅱ:最浅组至最深组卵囊平均孢子化率依次降低,分别为90.15%、89.25%和86.70%,组间差异不显著(P>0.05);方式Ⅲ:卵囊平均孢子化率以密度最小组(90.68%)为最高,以密度最大组(47.28%)为最低,密度最小组与其他2组存在极显著差异(P<0.01);方式Ⅳ:吹吸、静置、隔氧状态下,卵囊平均孢子化率依次降低,分别为90.65%、88.89%、86.94%,组间差异不显著(P>0.05);以2.5%重铬酸钾液、1×106/3 mL的卵囊密度、0.5 mm的液深且经常吹吸培养卵囊,卵囊孢子化效果最好。     

茶多酚抗柔嫩艾美尔球虫的效果及作用机制

根据鸡球虫病的特点,研究不同浓度水平的茶多酚(tea polyphenol)对未孢子化以及完全孢子化Emeria tenella球虫卵囊的作用效果;并通过在基础日粮中添加0.02%、0.04%和0.06%不同浓度水平茶多酚的肉鸡饲养试验,初步研究茶多酚抗E.tenella球虫的作用机制。结果表明,茶多酚具有明显抑制未孢子化E.tenella球虫卵囊成熟的作用,且茶多酚浓度越高,抑制效果越好;茶多酚对孢子化卵囊具有一定杀灭作用,并可提高肉鸡免疫器官指数,增强其免疫功能和抗炎作用,其中以添加0.04%茶多酚的试验效果较好。     

柔嫩艾美耳球虫孢子发育三种阶段的同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)未孢子化卵囊,孢子化卵囊、孢子囊的乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、6-磷酸萄萄糖酸脱氢酶(6PGD)、磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、碱性磷酸酶(ALP)和葡萄糖磷酸异构酶(GPI)等7种酶的同工酶,除IDH外,6种酶均显示出初步结果,孢子化卵囊和孢子囊6种酶的同工酶完全一致,未孢子化卵囊的LDH、G6PD、PGM、ALP、GPI 5种酶同工酶与孢子化卵囊、孢子囊一致,未孢子化卵囊的6PGD同工酶与孢子化卵囊、孢子囊呈现明显差异、讨论了球虫在孢子化过程中,一些酶的活性或同工酶发生变化的情况。     

阳光照射对球虫卵囊孢子化率的影响

为了解阳光照射对球虫卵囊孢子化率的影响,将未孢子化卵囊分别在阳光下照射2小时、4小时、6小时后,放在27～28℃恒温箱中培养,于第3天和第5天进行显微镜观察计数球虫卵囊孢子化率。试验结果表明,阳光照射对球虫卵囊的孢子化率有着明显抑制作用,随着光照时间的延长,球虫卵囊的孢子化率呈下降趋势。说明鸡球虫未孢子化卵囊对高温干燥的环境抵抗力差,阳光照射3～4小时,孢子化率明显下降12.67%￣26.00%。     

毒害艾美耳球虫卵囊先孢子化后贮存和先贮存后孢子化对其致病力的影响

新鲜收集的毒害艾美耳(Eimeria necatrix)球虫卵囊，一部分未孢子化即贮存在4℃冰箱，另一部分在28℃恒温水浴根荡孢子化48小时后再贮存在4DC冰箱。2个月后将先贮存的未孢子化卵囊在上述同等条件下进行孢子化48小时，然后两部分卵囊作致病力比较试验。结果表明，先贮存后孢子化卵囊的孢子化率和致病力都明显下降，先孢子化再贮存的卵囊存放2个月后其致病力各项指标也略有下降。     

三种消毒剂对兔球虫卵囊孢子化的抑制作用研究

为研究消毒剂对兔球虫卵囊孢子化的抑制效果,选用聚维酮碘、二氧化氯和三氯异氰尿酸3种消毒剂,在不同浓度和作用时间下处理兔球虫卵囊,分别培养24、48和72 h后计算各条件下卵囊孢子化率。结果表明:处理5、15、30和60 min后,聚维酮碘(500 mg/L、1 000 mg/L、2 000 mg/L)、二氧化氯(以有效氯计,25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)各组对球虫卵囊孢子化无明显抑制作用,三氯异氰尿酸(以有效氯计,250 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)对球虫卵囊孢子化有一定抑制作用,其中以培养24 h抑制作用最明显。     

堆型艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫卵囊最短孢子发育时间的测定

将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。     

次氯酸钠对柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响研究

给14日龄海兰鸡雏接种E.tenella杂交F2株（本实验室培育），7d后扑杀，刮取盲肠卵囊制成卵囊悬浊液。用不同浓度次氯酸钠（含活性氯不低于7．5％）分别处理5min、10min、15min、20min后，离心洗涤并进行卵囊计数，加2．5％的重铬酸钾，28℃环境下孢子化。于60h取样检查其孢子化率。结果表明，高浓度长时间的次氯酸钠处理时E.tenella球虫卵囊孢子化率有显著影响（P〈0．05）。     

中药体外抗柔嫩艾美球虫的研究

根据中兽医学理论和鸡球虫病的特点选用中药组方，进行体外抗球虫试验。结果：所用中药组方具有明显抑制未孢子化卵囊的孢子化过程，且对巳孢子化卵囊具有杀灭作用。     

青蒿散抗鸡球虫药效研究

为探讨青蒿散对鸡柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的防治效果,本试验选取90只健康黄羽肉鸡,分为6组,除空白对照组外,其余各组（感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组）试验鸡均经口感染6×10⁴个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,各试验组在接种前一天开始用药至试验结束。记录各组试验鸡的眼观病变、组织病理学检查、相对增重率、盲肠病变记分、血便记分、每克粪便中的卵囊数（OPG）、卵囊值及抗球虫指数（ACI）指标,评价青蒿散不同给药浓度的抗球虫效果。结果显示,空白对照组、感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组的抗球虫指数分别为200.00、72.23、157.19、82.89、125.32和137.06,与感染对照组相比,药物对照组和青蒿散各剂量组的眼观病变、组织病理学检查均有所缓解,青蒿散能减轻病鸡盲肠的肿胀和出血等症状,且病鸡精神状态较感染对照组好;与感染对照组相比,各给药组的平均增重均有所升高,盲肠病变、卵囊值及血便情况减少。综上所述,青蒿散能缓解柔嫩艾美耳球虫侵染鸡盲肠所致的病理症状和组织病变,减少粪便中卵囊的排出数量,有一定的抗球虫效果,且给药浓度越高抗球虫效果越好,具有剂量依赖性。     

外源性一氧化氮对鸡柔嫩艾美尔球虫的作用

用酸化亚硝酸钠作为一氧化氮(NO)供体处理新收取的柔嫩艾美尔球虫未孢子化和已孢子化卵囊,来探讨外源性NO对球虫卵囊的抑杀作用。另外通过内服亚硝基谷胱甘肽(GSNO)试验来观察外源性NO对球虫病的防治作用。结果表明,酸化亚硝酸钠溶液(pH=1)对球虫卵囊的孢子生殖具有明显的抑制作用,20mmol/L酸化亚硝酸钠溶液对卵囊孢子生殖的抑制率可达100%;但不经酸化的亚硝酸钠溶液和相同pH的盐酸溶液对卵囊的孢子生殖没有明显影响。经20mmol/L以上浓度酸化亚硝酸钠处理的孢子化卵囊也失去了对雏鸡的致病力,但直接内服GSNO溶液则没有明显的抗球虫作用。这提示外源性NO对鸡柔嫩艾美尔球虫未孢子化和孢子化卵囊均有抑杀作用,但直接内服没有明显的抗球虫病作用。