白羽鹌鹑IFN-α基因克隆、遗传衍化及原核表达研究

<正>干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等功能的细胞因子,可以通过调节机体的某些细胞来间接发挥抗病毒生物学作用,抑制病毒生长,促进免疫细胞活性。IFN-α属于Ⅰ型干扰素,是由白细胞分泌的一类具有抗病毒和免疫调节功能的细胞因子~([1])。IFN-α与靶细胞的表面受体结合后可以激活靶细胞内潜在抗病毒基因的表达,产生具有三磷酸鸟苷(GTP)酶活性的抗病毒蛋白质,使细胞具备     

牦牛IFN-α基因的克隆表达及抗病毒活性研究

从我国地方品种环湖型牦牛和野牦牛基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,PCR产物酶切后与载体pQE30连接,构建重组质粒pQE30/BoIFN-α,将其转化JM109E.coli并用IPTG进行诱导表达。序列分析表明,环湖型牦牛和野牦牛IFN-α成熟肽基因全长均为498个核苷酸,编码166个氨基酸,其中环湖型牦牛IFN-α与已报道的8个BoIFN-α亚型氨基酸的一致性为92.8%~95.2%,野牦牛为88.6%~92.8%,均为BoIFN-α新亚型。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,重组蛋白约为20kD,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的25%。经包涵体提取、尿素变性和复性后,重组牛IFN-α粗提物在MDBK/VSV和CEF/VSV细胞系上的抗病毒活性分别为1.6~1.8×106U/mg和2.3×105U/mg,而且对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)也有一定的抑制作用。     

食蟹猴的实验室检查

非人灵长类 (ＮｏｎｈｕｍａｎＰｒｉｍａｔｅ)在解剖、生理和生化代谢等特点与人相似 ,在神经生理学、病理学、心理学及计划生育学等生物学和医学领域的研究中 ,常把猴作为实验动物来应用。以前使用最多的是弥猴属中的恒河猴 ,但近年来食蟹猴作为实验动物应用的数量日益增多 ,这是因为食蟹猴体形小 ,性情温顺 ,便于实验操作 ,更重要的是已积累了丰富的基础数据 (各项生理、病理指标及各种实验模型等 ) ,具备了作为实验动物的必要条件[1] 。食蟹猴与其它非人灵长类一样会感染各种病 ,有些疾病是人猴共患的 ,为保证实验用猴的质量和接触猴的…     

食蟹猴的饲养管理

食蟹猴作为一种良好的实验动物在科学研究领域具有突出的贡献,因此尽量做好饲养管理工作、减少疾病发生,使它们更好地服务于科学研究显得格外重要。尤其是平时的检疫和疾病防治,是食蟹猴养殖场管理人员最应该关注的二个方面。制定出一套合理有效的食蟹猴饲养管理程序,能大大提高食蟹猴的     

食蟹猴脱肛的治疗

猴直肠脱俗称脱肛,是指直肠的一部分或大部分向外翻出而脱垂于肛门外.在人工饲养的猴群中,比较常见,是食蟹猴临床常见外科病,笔者在临诊中共收治30多例,全部治愈.     

鸭IFN-α成熟蛋白基因的克隆

干扰素（IFN）是一类能诱导产生多种广谱抗病毒蛋白的细胞因子．为了克隆樱桃谷鸭α干扰素成熟蛋白基因,从GenBank搜索出鸭α干扰素基因的序列,参照AY879230设计引物．利用PCR技术从鸭肝脏提取的基因组DNA扩增目的基因。将目的基因与pMD18-T我体进行连接,转化到大肠杆菌DH50α感受态细胞中．涂抹在含Amp＋的LB固体培养基上。应用蓝白斑筛选,挑选白斑接种到LB液体培养基中。提取重组质粒DNA,对质粒DNAPCR扩增和内切酶酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序。测序结果表明．鸭α干扰素成熟蛋白基因长度为486bp,为进一步研究鸭α干扰素基因表达、生物学活性和应用奠定基础。     

梅花鹿IFN-α基因的克隆与原核表达研究

为研究梅花鹿IFN-α的抗病毒功能和分子机制,根据GenBank中牛IFN-α基因序列(A00145),设计并合成1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-α全基因核苷酸序列。序列分析表明梅花鹿IFN-α基因全长570 bp,编码189个氨基酸,其中含18个氨基酸的信号肽和169个氨基酸的成熟多肽,存在1个潜在跨膜区,基因随不同物种发育进化地位表现出种属间的差异性。在此基础上,合成1对引物,扩增梅花鹿IFN-α成熟肽核苷酸序列,构建pET28a-IFNα原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在24 kd左右出现特异性蛋白带,表达产物主要为不溶性的包涵体,表达量占菌体总蛋白的34.04%,且表达产物与抗His标签抗体可发生特异性反应。将Ni柱纯化的pET28a-IFNα诱导表达产物复性后,细胞病变抑制法检测表明表达产物具抗病毒活性。研究结果为梅花鹿IFN-α蛋白抗病毒分子机制的研究及抗病毒药物的开发奠定了基础。     

食蟹猴的麻醉及麻醉前用药

正食蟹猴是与人类最为接近的物种之一,在生理学、解剖学、免疫学以及神经学等方面有很高的相似度,在生物医学研究领域也是比较理想的实验动物,利用其建立的动物模型被广泛用于研究人类疾病,如在传染病、心血管疾病、内分泌疾病、生殖疾病、神经疾病及眼疾病等方面,对比欧美发达国家,中国具有相当丰富的灵长类动物资源提供国内外应用~[1]。食蟹猴为医学实验动物模型广泛应用于科学研究的过程中,科研人员很快发现,对食蟹猴的合理保定和麻醉是进行科研项目首先要解决     

水貂IFN-α基因的克隆与原核表达

从水貂基因组中通过PCR的方法克隆得到干扰素α基因(IFN-α),将IFN-β成熟肽插入原核表达载体pET32a,在E.coliBL21(DE3)工程菌中表达重组蛋白。结果表明IFN-β片段长564 bp,与已报道的水貂干扰素-α基因相比同源性98%。IFN-α成熟肽可编码166个氨基酸。重组质粒经ITPG诱导6 h后蛋白表达产物较高,表达量占菌体表达量的50%,分子量约为36 ku,与预期结果相符。     

晋南黄牛IFN-α基因的克隆、表达及抗病毒活性研究

本研究通过PCR从晋南黄牛(Yellow cattle)基因组DNA中克隆了IFN-α(BoIFN-α)基因,PCR产物酶切后直接与载体PQE30连接,构建重组质粒PQE30/BoIFN-α,进行测序和诱导表达.测序结果表明,晋南黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与所报道的BoIFN-α 8个亚型中D亚型最接近,氨基酸序列同源性为97.0%.表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,表达出20kD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的20%,表达产物以包涵体形式存在,包涵体占沉淀蛋白的35%.包涵体提取物用8 M尿素溶解变性,经尿素和PBS透析复性后初步纯化.重组牛IFN-α(rBoIFN-α)初提物在MDBK-VSV和CEF-VSV上的活性分别为2.3～6.5×106U/mg和1.3～4.1×105U/mg,对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)有一定的抑制作用,抗病毒效价达到8.2×105U/mg.结果显示大肠杆菌可以高效表达具有生物学活性的rBoIFN-α.     

利用微卫星标记分析4个食蟹猴群体的遗传多样性

利用7个恒河猴源微卫星标记和4个人源微卫星标记共11个标记,分析了来源于束埔寨(Pop1)、老挝(Pop2)、越南1(Pop3)和越南2(Pop4)共4个群体食蟹猴的遗传多样性.研究结果显示,所选择的11个微卫星位点表现出很高的多态性,群体内的多态性较低,存在较严重的近亲交配.Hardy-Weinberg平衡检测说明4个群体在这11个位点上均处于不平衡状态,可能存在较严重的人工选择繁育.亚群体内的固定指数平均为0.526 2,说明群体内存在近亲交配;亚种群间的固定指数均值为0.016 6,说明各群体间的遗传分化很小;各位点上的基因流均值为14.814 2,说明其交流很活跃,可有效地防止因遗传漂移而产生的遗传分化.从基于Nei氏标准遗传距离的UPGMS聚类图看出,先是Pop3和Pop4聚为一类,再和Pop1聚在一起,最后和Pop2聚在一起,其结果和其地理分布所表现的遗传差异一致.     

食蟹猴直肠脱的手术治疗

食蟹猴是一种重要的非人灵长类实验动物,人工繁殖是目前获得食蟹猴的主要途径,在实际生产中需经常对食蟹猴种群进行调整并群,由于非人灵长目动物具有很强的等级制度,因此在并群过程中,食蟹猴通过争斗而形成等级明显的群体,而争斗也成为直肠脱出的一个主要原因。脱出的直肠感染后需及时采取手术治疗,并对术后动物进行人工护理。结果表明,手术治疗食蟹猴直肠脱具有很好的治愈效果。     

食蟹猴低钙血症的诊治

在家畜、家禽中,低钙血症多发生于仔猪、犊牛及幼禽,青幼年食蟹猴钙及维生素D缺乏而影响食蟹猴生长发育,引发食蟹猴肢体残疾甚至死亡的重要疾病之一[1].2009年8月～9月广东某猴场由于在自制饲料(松糕)中,饲料制作员在制作饲料时没有按照要求添加磷酸氢钙,导致饲养的0.7岁～3岁的100多头食蟹猴陆续出现不同程度的不愿走动、行走困难、跛行、后肢膝关节肿大、头皮下出现血肿等症状,但未见死亡. 1 发病情况 在一个月时间里,整个发病猴区出现了18例头皮下血肿病猴;后肢无力、后肢瘫痪、关节肿大的病猴85例.     

浅谈食蟹猴阴茎红肿的治疗

1 发病情况 在本实验动物养殖基地的食蟹猴阴茎红肿的病例时有发现,全年均可发病.笔者在近四年的兽医临床中共收治此类病例近60例,通过治疗都能治愈,无一死亡,现将治疗方法介绍如下.     

犬IFN-α1基因的克隆和序列分析

为对犬干扰素进行研究,试验采用PCR法将犬IFN - αl基因从基因组DNA克隆到pGEM -T载体,并进行测序分析.结果表明:犬IFN - αl基因ORF大小为564 bp,编码187个氨基酸,前23个为信号肽;成熟蛋白理论分子质量为19 ku,等电点为6.217,有4个潜在磷酸化位点、1个N糖基化位点和4个半胱氨酸...     

犬IFN-α1基因的克隆和序列分析

为对犬干扰素进行研究,试验采用PCR法将犬IFN-α1基因从基因组DNA克隆到pGEM-T载体,并进行测序分析。结果表明:犬IFN-α1基因ORF大小为564 bp,编码187个氨基酸,前23个为信号肽;成熟蛋白理论分子质量为19 ku,等电点为6.217,有4个潜在磷酸化位点1、个N糖基化位点和4个半胱氨酸残基,大部分为亲水区;经二级、三级结构预测,该蛋白主要由5段α螺旋组成;犬IFN-α1基因与貉子、赤狐的同源性最高,为98%,在进化树中处于同一分支;在干扰素多肽链中,15L、18L、77W、96L9、9C1、24F、131L、137S、140AWE1421、45R和150R在所有分析物种中高度保守。     

提高食蟹猴繁殖率的方法初探

食蟹猴属于猕猴（Macaca mulatta）属,繁殖率较低,只有56．12％[1];食蟹猴具有攻击性,难以使用人工授精的方法来提高繁殖率。本文从不同的公母猴搭配比例研究提高食蟹猴繁殖率的方法。     

堪萨斯分枝杆菌感染食蟹猴的临床及免疫特征研究

观察食蟹猴人工感染堪萨斯分枝杆菌的临床及免疫反应变化。通过气管注射法接种3只食蟹猴堪萨斯分枝杆菌,观察临床症状,每2～4周进行结核菌素试验、血常规检测、流式细胞分析、细胞因子和抗体检测,评价感染状态,在第16周对动物实施安乐死和尸检。感染后,动物体重出现一过性降低,2周后结核菌素试验阳性;白细胞及其亚群、T淋巴细胞亚群数量均出现升高;促炎症因子TNF-α、IFN-、IL-1β、IL-17A和抑炎症因子IL-4、IL-10浓度在2周后开始升高,并维持较高水平;尸检仅1只猴肺左中叶出现实变,HE染色见间质性肺炎伴肉芽肿,病灶肺组织载菌量为5 000 CFU/g。3只食蟹猴均成功感染堪萨斯分枝杆菌,其中2只为一过性感染,所示动态免疫反应与抗感染过程相关。     

氯胺酮麻醉对食蟹猴血压的影响研究

目的:观察使用氯胺酮麻醉对食蟹猴血压的影响状况。方法:10只食蟹猴先在清醒状态下测量血压,再使用盐酸氯胺酮注射液10 mg/kg肌肉注射全身麻醉后,测量其麻醉后血压,比较两种状态下血压之间的差异。结果:食蟹猴在使用氯胺酮麻醉后收缩压、舒张压和平均动脉压升高。结论:食蟹猴使用氯胺酮进行全身麻醉后,对血压产生明显影响。     

猪IFN-α1和IFN-β1基因的克隆与序列分析

从猪的肝细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增IFN-α1和IFN-1β基因,分别克隆到PMD18-T载体上。测序结果表明,克隆的IFN-α1核苷酸序列与GenBank上登录的猪IFN-α1核苷酸同源性为100%,与鼠、犬、人和牛IFN-α1基因同源性为71.1%~81.4%。克隆的IFN-1β核苷酸序列与Gen-Bank上登录的猪IFN-β1核苷酸同源性为99.6%,推导的氨基酸同源性为99.5%;与人、牛和马IFN-β1基因同源性为76.9%~80.4%。