不同激素配比对紫花苜蓿不同外植体愈伤组织诱导的影响

[目的]为紫花苜蓿外植体培养筛选最佳激素配比培养基。[方法]分别以盛世无菌苗的下胚轴、子叶、叶片、叶柄、根为外植体。在MS附加不同激素配比的培养基上诱导愈伤组织,研究不同处理对愈伤组织诱导率的影响。[结果]5种外植体均能诱导出愈伤组织,其中下胚轴的愈伤组织诱导率最高（达87．5％）,且愈伤组织长势良好,其次为子叶〉叶柄〉叶片〉根;不同外植体愈伤组织的形成时间为下胚轴〉子叶〉叶柄和根〉叶片;2,4-D诱导愈伤组织的效果优于NAA.[结论]2,4-D、NAA、6-BA和KT配合使用的培养基上形成的愈伤组织浅黄带绿,表面突起,松软,带簇状芽或单芽或形成胚状体.     

荞麦愈伤组织培养及其分化的研究

以荞麦的成熟胚，幼胚，下胚轴为外植体，在不同激素浓度配比，不同基本培养基质培养基上的组织培养研究表明：以成熟胚为外植体时，对愈伤组织诱导和生长最适培养基是２．４－Ｄ２．０，ＮＡＡ１．０，６－ＢＡ。０．５的Ｂ＿５培养基；以幼胚为外植体时，对愈伤组织的诱导和生长最适合的培养基是２．４－Ｄ２．０，ＮＡＡ１．０，６－ＢＡ０的ＭＳ培养基；以下胚轴为外植体时，Ｂ＿５和ＭＳ两种培养基均不适合愈伤组织的生长。２．４－０对荞麦愈伤组织根的分化有一定的促进作用。     

小豆外植体的愈伤组织诱导及直接植物体再分化

本文主要报导小豆初生叶、上胚轴、子叶、子叶节部位切段、主根根基部和主根根尖等外植体的愈伤组织诱导及其外植体的直接植物体再生实验结果。研究表明;初生叶以出芽后第二天的材料最好;而其它部位的外植体以出芽后第三天的愈伤组织分化诱导率较高。在发芽培养基中加入6—BA获得的供试外植体,其愈伤组织诱导所需时间短,而且诱导率均可达100％。,在6—BA浓度为0.1～0.4％的植物体直接再分化培养基中,上胚轴能够诱导出愈伤组织及芽、根、幼苗,并能顺利地驯化成植株;子叶也能诱导出愈伤组织、根和芽;其它外植体均可诱导出愈伤组织和根。幼胚在本实验的愈伤组织诱导培养基和再分化诱导培养基中既可诱导出愈伤组织,也可将原胚芽培养成苗。     

香根草外植体的选择及植株再生试验

为建立香根草组织培养及植株再生体系,分别选取生长健壮无病虫害的植株茎杆、根、叶和幼嫩芽不同部位进行外植体选择及愈伤组织诱导,以及香根草外植体消毒方法和激素处理及培养基对丛生芽诱导的影响试验.结果表明,茎杆、根、叶作为外植体,诱导不出愈伤组织.幼嫩芽是最佳香根草外植体的选择.0.1％升汞对各部位处理效果成功率在65％以上,幼嫩芽消毒浸泡8 min成功率达88％.在MS＋6-BA 1.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L的培养基上培养25 d幼芽愈伤组织诱导率为100％.在MS＋6-BA 0.8 mg/L＋NAA 0.2 mg/L培养基上培养20 d诱导丛生芽效果最好,增殖系数为6.4.生根培养基选用1/2 MS＋NAA 0.3 mg/L＋IAA 0.1 mg/L为最佳,生根率达90％以上.     

菊花快速繁殖初探

用地被菊的花托为外植体，接种在不同激素配比的ＭＳ培养基上，结果表明，生长素浓度在０．５ｍｇ／ｍＬ以上时。无论是２．４—Ｄ还是ＮＡＡ，外植体诱导愈伤组织的频率都在８７．２％以上，而当外植体接种在细胞分裂素浓度在２ｍｇ／ｍＬ为ＭＳ培养基上时，能直接使花托长出不定芽。将愈伤组织转移到ＭＳ＋ＫＴ２的培养基上，愈伤组织均有器官分化，但分化率因诱导培养基中的生长素种类和浓度不同而表现出明显的差异，外植体的遗传型对分化率的影响也十分明显．     

胡萝卜幼苗根、茎、叶组织培养再生植株

[目的]研究胡萝卜幼苗的组织培养再生技术。[方法]以培养约2个月的胡萝卜幼苗为材料,分别取幼苗的根、茎、叶为外植体,研究不同培养基、不同外植体对愈伤组织诱导的影响,以及培养基对愈伤组织分化的影响。[结果]根、茎、叶为外植体均能产生愈伤组织,但以茎为外植体诱导的愈伤组织质量最佳,其愈伤组织的诱导率和分化率均为最高。[结论]建立了胡萝卜试管培养幼苗的愈伤组织诱导和再生植株体系,为今后的试验打下了基础。     

Landersberg生态型拟南芥愈伤组织的诱导和植株再生体系的研究

以landersberg生态型的拟南芥为试材,建立了一套简便有效的组培体系。无菌苗的生长采用竖直培养,易于收集外植体。莲座叶、叶柄、下胚轴、根分别作为外植体在B5+5 mg/L2,4-D+0.5 mg/L KT培养基上诱导愈伤组织,结果表明,莲座叶作外植体出愈慢,出愈率低,愈伤组织质量较差;叶柄、下胚轴和根作外植体出愈快,且愈伤组织质量好,后期易分化。根外植体在MS+5 mg/L KT+0.1 mg/L IAA配方的出芽诱导培养基上诱导2～3周后,愈伤组织能有效分化出芽,分化率达100％。分化出的芽移至MS+2 mg/L NAA培养基上竖直培养,2周左右诱导分化出根,然后移至MS培养基上开花结果。     

发根农杆菌转化茶树的研究

以3个品种茶树的不同部位、器官为材料,探讨发根农杆菌转化茶树及毛状根增殖的条件.感染1025菌种的大红品种茎段,在添加IBA 0.4mg/L的1/2MS培养基上诱导出了毛状根.茶树毛状根细如头发,着生稀疏长根毛,具有激素自主性、分枝多、生长快等特点.经正交试验,将1/2MS培养基的KNO3,NH4NO3质量浓度降至MS培养基的1/8时的培养基,是毛状根伸长、分枝较好的基本培养基.添加IBA 0.2mg/L的培养基,毛状根的伸长、分枝优于添加IBA 0.1mg/L的培养基,但在毛状根上出现少量愈伤组织.     

激素和外植体对辣椒愈伤组织诱导的影响

本实验以辣椒优良品种的种子为试验材料,接种在MS培养基上培养无菌苗,再分别以无菌幼苗的子叶、胚轴、根为外植体,接种在添加有不同浓度6-BA和2,4-D的MS培养基上进行愈伤组织诱导。结果表明:以下胚轴为外植体,诱导的愈伤组织质量最好和出愈率最高,愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+6-BA0.5mg/L+2.4-D2.0 mg/L。     

茶树不同外植体组织培养与试管苗保存研究初探

选取福鼎大白茶的种子、子叶、叶片、根、短穗作为外植体,进行愈伤组织诱导培养、愈伤组织继代培养和愈伤组织分化培养,结果表明:(1)叶片是诱导愈伤组织最好的外植体,适合的诱导培养基为N6+2,4 D(2.5mg.L-1);(2)愈伤组织通过多次继代培养扩大繁殖,可获得充足的愈伤组织;(3)愈伤组织在20种分化培养基中分化生长,绝大多数愈伤能长出绿色小突起,有一部分愈伤能分化出根。     

新疆紫草毛状根愈伤组织诱导及其生长条件研究(Ⅰ)

[目的]建立以新疆紫草毛状根愈伤组织为基础的细胞悬浮体系.[方法]以新疆紫草毛状根为外植体,探讨激素、培养基、蔗糖、钙离子等对愈伤组织诱导、生长的影响.[结果]MS附加2,4-D 1.0 mg/L+ KT0.5 mg/L的愈伤组织诱导率为100;;钙离子浓度为250 mg/L时的B5 +6- BA0.1+ NAA 0.5愈伤鲜重最多,愈伤增殖倍数为9.63倍;愈伤组织在P-1中的生长量均较小,但愈伤的颜色普遍较红,当钙离子浓度为250mg/L、P-1附加1.0 mg/L KT的处理愈伤最红.[结论]毛状根是诱导新疆紫草的最佳外植体.研究为利用新疆紫草毛状根进行细胞悬浮培养提供了理论依据.     

曼陀罗毛状根的诱导及其悬浮培养合成天麻素初探

利用A4和R1601两种发根农杆菌菌株分别感染曼陀罗的嫩叶及嫩茎诱导产生毛状根。探讨了不同菌株、不同外植体、蔗糖预处理、外植体预培养与染菌时间以及外植体二次染菌等条件对转化频率的影响,并建立毛状根悬浮培养体系及转化外源底物对羟基苯甲醇合成天麻素。结果表明:A4转化频率高于R1601;嫩叶转化频率最高;嫩叶最佳预培养时间为4 d;最佳染菌时间为5 min。HPLC法分析表明,悬浮培养毛状根能转化外源底物对羟基苯甲醇合成天麻素。     

桑树毛状根再生条件研究

为建立桑树毛状根的再生体系,以桑树毛状根作为外植体,研究不同质量浓度6-BA和NAA配比对桑树毛状根愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,并对再生植株进行PCR检测。结果表明,桑树毛状根的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA,最佳不定芽分化培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,3周愈伤组织不定芽分化率为16.7%。应用该不定芽获得再生植株的根系生长旺盛,叶片提取的基因组中含有rolB生根基因。     

曼陀罗毛状根的诱导及其悬浮培养合成天麻素初探*

 利用A₄和R₁₆₀₁两种发根农杆菌菌株分别感染曼陀罗的嫩叶及嫩茎诱导产生毛状根。探讨了不同菌株、不同外植体、蔗糖预处理、外植体预培养与染菌时间以及外植体二次染菌等条件对转化频率的影响,并建立毛状根悬浮培养体系及转化外源底物对羟基苯甲醇合成天麻素。结果表明:A₄转化频率高于R₁₆₀₁;嫩叶转化频率最高;嫩叶最佳预培养时间为4 d;最佳染菌时间为5 min。HPLC法分析表明,悬浮培养毛状根能转化外源底物对羟基苯甲醇合成天麻素。     

巴西橡胶树树根组织培养外植体消毒研究

[目的]寻找一条降低橡胶树树根组织培养中外植体污染的有效途径。[方法]对巴西橡胶树树根进行组织培养,取林段断根处理30d后的新根为外植体,采用1g/L多菌灵、0.1%HgCl2和不同浓度益培隆对其进行了消毒试验。[结果]在常规消毒前先采用1g/L多菌灵对外植体处理2.5h,再用75%乙醇消毒30s及0.1%HgCl2消毒6min,然后接种到添加0.1%益培隆的固体愈伤诱导培养基上,培养30d后外植体污染率下降至44.59%,存活率达25.60%。[结论]该研究为降低橡胶树树根组织培养中外植体污染提供了理论依据。     

发根农杆菌介导的怀地黄遗传转化研究

利用发根农杆菌转化怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根在附加0.2mg/LKT和3.0mg/L6-BA的1/2MS培养基上能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛。rolB基因PCR和冠瘿碱纸电泳检测证明,农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达,获得转基因怀地黄。     

毛状根的研究进展及应用

作为一种天然遗传工程菌株,发根农杆菌可侵染160多种植物,使植物产生特殊的形态学变化并诱导植物产生大量的毛状根。由于毛状根可稳产高产的生成大量有重要价值的植物次生代谢物质,近几十年来毛状根系统的研究受到越来越多的关注。简要阐述了发根农杆菌诱导毛状根生成的机理,着重介绍了毛状根培育的研究进展及在生产植物次级代谢产物方面的应用。     

松果菊根外植体植株再生能力的评价

为了评价松果菊Echinacea purpurea L.根外植体的再生能力,将从松果菊无菌小苗得到的根外植体和叶片以及叶柄外植体接种到含有不同种类和浓度的细胞分裂素和生长素的培养基上,诱导不定芽的再生.结果表明,在多数情况下,根外植体的再生能力显著高于叶片,和叶柄类似.0.3 mg/L的苄基腺嘌呤和0.01 mg/L的萘乙酸是诱导根外植体不定芽再生最合适的激素种类和质量浓度组合.根外植体培养的不定芽再生频率为100%,每个根外植体得到再生芽1.75个.当把这些由根再生的不定芽从母体组织切开并转移培养到含有0.01 mg/L萘乙酸的培养基后,很容易生根并成为完整的植株.可见根是组培快繁松果菊理想的外植体材料.     

Optimizing hairy root production from explants of Phyllanthus hainanensis, a shrub used for traditional herbal medicine

Phyllanthus hainanensis is a shrub that has been used in traditional herbal medicine. It has great pharmaceutical potential for treating diseases such as cancer and diabetes. As a prerequisite for propagation of this species on a large scale, hairy roots in P. hainanensis were induced using Rhizobium rhizogenes and various factors affecting hairy root induction and growth evaluated. Seven factors were tested: (1) type of explant, (2) type of culture medium, (3) duration of pre-culture, (4) R. rhizogenes inoculum cell density, (5) duration of infection, (6) acetosyringone concentration in the culture medium, and (7) duration of incubation. The optimal protocol for hairy root induction and growth was: young shoots, pre-cultured in Y1 for 2 d, inoculated with R. rhizogenes broth with an OD₆₀₀ of 0.6 for 20 min, and incubated for 3 d. Putative transgenic hairy roots were initially identified by morphology and then confirmed by polymerase chain reaction. Successful and optimal production of hairy roots is a critical prerequisite for industrial scale clonal propagation of P. hainanensis. Being able to cultivate the plant on a large scale will provide rapid and ready supply of the plant materials that can be used in herbal medicine and in scientific and industrial exploitation.