豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的体外联合抑瘤作用研究

［目的］研究豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的降毒增效作用。方法］分别采用6种不同浓度的豆类丝核菌次级代谢产物（苦马豆素含量分别为10.00、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31 μg/ml）处理人肝癌细胞HepG2,测量其IC50;然后用此代谢产物与2种不同浓度（60、6 μg/ml）阿霉素（ADR）联合处理HepG2,分析两者的增效作用。结果］豆类丝核菌次级代谢产物可抑制肝癌细胞HepG2生长,其对HepG2细胞作用72 h的IC50为1.25 μg/ml;ADR可显著抑制肝癌细胞HepG2生长,加入豆类丝核菌次级代谢产物后HepG2细胞的形态和存活率变化不大。结论］豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素体外联合不具有增效作用。     

豆类丝核菌次级代谢产物的抑瘤作用及其对荷瘤小鼠巨噬细胞活性的影响

建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌服含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7和16.2mg/(kg·d)的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,分别于灌药前(0d)及灌药后4d和8d时测定其肿瘤抑制率和腹腔巨噬细胞吞噬百分率。结果表明,8d时 组(高剂量灌药组)的腹腔巨噬细胞吞噬率达到(33.99±1.56)%,显著高于 组(生理盐水对照组)的(27.95±4.03)%; (低剂量灌药组)、 2组肿瘤抑制率分别在4d时达到26.44%和33.91%,8d时达到46.98%和47.22%。说明该次级代谢产物能够使荷瘤动物巨噬细胞吞噬力增强,并能抑制种植性实体瘤(H22)的生长。表明该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。     

豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠围产期毒性的研究

[目的]为豆类丝核菌次级代谢产物在临床上的安全用药提供试验依据。[方法]将受孕0 d的母鼠随机分为正常对照组,豆类丝核菌次级代谢产物56.62、14.15、3.54 mg/kg 4个组,研究豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠的围产期毒性。[结果]中剂量组母鼠21 d体重显著下降（P〈0.05）。各试验组F1代小鼠出生胎数、0 d成活率与对照组无显著差异（P〉0.05）,而生长指数、内脏指数、游泳生存时间、生理发育指标、反射发育指标与对照组有显著或极显著差异。[结论]在该试验条件下豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠有围产期毒性,在临床上作为抗肿瘤药物使用时孕妇应禁用。     

豆类丝核菌次级代谢产物的遗传毒性与致突变作用

通过小鼠骨髓染色体畸变试验、睾丸染色体畸变试验及鼠伤寒沙门氏菌回复试验考察豆类丝核菌次级代谢产物的遗传毒性与致突变性。结果显示,豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠骨髓染色体及睾丸染色体均无致畸变作用;Ames试验结果显示在本次试验的各个浓度下无论是加入活化系统(S-9混合液)还是不加,回变菌落数均未大于自然回变菌落的2倍,而各阳性对照组均显示强烈的诱变作用,表明,本次试验剂量和条件下,豆类丝核菌次级代谢产物未见遗传毒性和致突变作用。     

豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠行为致畸学研究

研究了豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠后代的行为致畸作用.将5组孕鼠分为空白对照组、豆类丝核菌次级代谢产物低剂量组、中剂量组、高剂量组及阳性对照组,分别灌胃给予生理盐水、低剂量（SW含量3.54 mg/kg）、中剂量（SW含量14.15 mg/kg）、高剂量（SW含量56.62 mg/kg）豆类丝核菌次级代谢产物及10 mg/kg环磷酰铵（CP）,待其自然分娩后,观察其后代生长发育及行为状态.结果表明,豆类丝核菌次级代谢产物3个剂量组在反射能力、协调运动能力、学习记忆能力及自主活动能力各方面指标与空白对照组相比差异均不显著（P＞0.05）,而与阳性对照组相比差异极显著（P＜0.01）.在本实验的剂量和条件下,豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠后代不具有行为致畸作用.     

豆类丝核菌次级代谢产物对阿霉素所致小鼠骨髓和心肌毒性的保护作用研究

探讨了豆类丝核菌次级代谢产物对阿霉素(ADR)所致小鼠骨髓抑制及心肌损伤的保护作用。建立小白鼠骨髓抑制和心肌损伤模型。检测血常规,描记心电图,测定血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。心肌组织石蜡切片,HE染色,光镜观察。结果表明阿霉素4 mg.kg-1可致小白鼠骨髓抑制和心肌损伤。豆类丝核菌次级代谢产物可抑制阿霉素引起的白细胞数、红细胞数、血红蛋白量的减少;使心率加快,心电图Q波振幅减小,QRS波时间缩短和S-T段回升;降低血清CK、LDH活力,增强心肌SOD活力,降低MDA含量,减轻心肌组织损伤。豆类丝核菌次级代谢产物对ADR所致小白鼠骨髓和心肌毒性有一定的保护作用。     

豆类丝核菌次级代谢产物对动植物细胞损害作用的对比

【目的】探索豆类丝核菌或其次级代谢产物的动植物损害在细胞生物学上的作用，为苦马豆素（swainsonine, SW）的毒理学研究提供新的思路。【方法】通过制作豆类丝核菌次级代谢产物污染的饲料和人工污染豆类丝核菌饲料，饲喂家兔17d ,剖检家兔并取其脑、肝脏、肾脏等组织分别进行病理组织学和电镜观察；并将不同浓度的次级代谢产物和不同株的豆类丝核菌分别污染回接的绿豆，待84h培养后，进行组织学和电镜观察。【结果】在对动植物细胞损害作用中，豆类丝核菌次级代谢产物使家兔脑组织和淋巴细胞呈现空泡变性，神经细胞核糖体脱颗粒，粗面内质网扩张等变化；同时还能使植物根部组织结构受损，细胞呈现空泡变性，内膜破裂等变化。【结论】豆类丝核菌引起的动物中毒作用主要是其次级代谢产物中SW发挥毒性，且同疯草中毒引起的病理变化基本一致；菌株对植物根部的致病性与其次级代谢产物中SW含量呈正相关。即推测，SW很有可能不仅是动物豆类丝核菌中毒的主要毒素，而且是豆科植物丝核菌病中细胞损害的主要化学物质。     

豆类丝核菌次级代谢产物对化疗骨髓抑制小鼠的保护作用

【目的】探讨豆类丝核菌次级代谢产物对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的保护作用及其作用机制。【方法】将昆明种小白鼠60只均分为6组:Ⅰ组(正常对照组)、Ⅱ组(CTX模型对照组)、Ⅲ组(苦马豆素(SW)低剂量组)、Ⅳ组(SW中剂量组)、Ⅴ组(SW高剂量组)、Ⅵ组(SW16 mg/kg)。Ⅰ、Ⅱ组灌胃生理盐水,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别灌胃浓度为8,16,32,16 mg/kg的SW液,剂量皆为0.4 mL/d,共10次;末次灌胃6 h后,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组腹腔注射环磷酰胺(CTX)80 mg/kg,每天1次,连续3 d,末次注射后24 h,眼眶采血并处死小鼠,测定血常规、脾脏指数、脾集落形成单位(CFU-S)、骨髓有核细胞(BMC)数及骨髓细胞增殖试验,研究豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠骨髓造血功能的影响。【结果】腹腔注射CTX80 mg/kg连续3次,可致小鼠骨髓抑制。豆类丝核菌次级代谢产物(SW剂量为16mg/kg)可较好抑制CTX引起的白细胞数(WBC)、红细胞数(RBC)、血红蛋白含量(HgB)、骨髓有核细胞数(BMC)减少;各剂量的SW能明显增加CFU-S数,其中以SW16 mg/kg效果最佳。当SW为8 mg/kg时,能很好地刺激骨髓细胞增殖。【结论】豆类丝核菌次级代谢产物对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制有较好的保护作用,其机制可能是通过刺激骨髓细胞增殖,增加BMC数和髓外造血来实现。     

豆类丝核菌次级代谢产物对肿瘤细胞超微结构的影响

通过建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌胃含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7mg/(kg·d)和16.2mg/(kg·d)的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,于灌药后16d剖检荷瘤动物并取肿瘤组织与肝组织制作超薄切片,透射电镜观察。结果表明,该次级代谢产物能抑制种植性实体瘤(H22)的生长和转移。因此,该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。     

豆类丝核菌次级代谢产物抗肿瘤作用的病理学观察

通过建立种植性肝癌(H22)实体瘤动物模型,并给荷瘤小鼠灌胃含有苦马豆素(swainsonine,SW)且剂量分别为2.7mg·kg-1·d-1和16.2mg·kg-1·d-1的豆类丝核菌次级代谢产物稀释液,分别于灌药后8d、16d剖检荷瘤动物并取肿瘤组织与肝组织制做石蜡切片,HE染色,普通光镜观察。结果表明,该次级代谢产物能抑制种植性实体瘤(H22)的生长和转移。因此,该次级代谢产物具有抗肿瘤药用价值。     

沙枣多糖对免疫抑制小鼠的调节作用

[目的]研究沙枣多糖(EAPS)对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。[方法]以环磷酰胺(Cy)作免疫抑制剂建立小鼠免疫抑制模型,进行免疫脏器指数的检测、碳粒廓清试验、血清溶血素形成和迟发型超敏反应,探讨沙枣多糖对免疫功能低下小鼠的影响。[结果]沙枣多糖能明显提高正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及免疫抑制小鼠脾脏指数;增强正常小鼠和免疫抑制小鼠单核巨噬细胞系统吞噬功能,恢复免疫抑制小鼠迟发型超敏反应,促进溶血素的生成。[结论]沙枣多糖可对抗Cy所致的免疫抑制,明显增强小鼠免疫功能。     

雷蘑胞外多糖对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用

从雷蘑(Clitocybe gigantean)AS 5.105深层发酵的滤液中分离得到胞外粗多糖CEP,以KM系S180荷瘤小白鼠为试验模型,用免疫器官重量法,进行高、中、低剂量CEP的腹腔注射试验。结果表明,CEP能明显提高小白鼠的免疫功能,具有较高的抑瘤活性,并与剂量呈显著相关性;高剂量组与对照组相比较,小白鼠胸腺指数和脾脏指数均有显著增加(P<0.05);与低剂量组相比较,脾脏指数有显著增加(P<0.05)。     

发酵中草药对免疫功能低下小鼠的保护作用研究

试验旨在研究发酵中草药对环磷酰胺(CTX)致免疫低下小鼠的保护作用。将20±2 g昆明小鼠100只随机分为5组,每组20只,雌雄各两个重复,每个重复5只,各重复小白鼠分笼饲喂基础饲粮。正常组和模型组自来水灌胃,发酵中草药组中草药水溶液灌胃,灌胃浓度分别为100、200和400 mg·kg-1,灌胃剂量0.1 mL·10 g-1体重,1次·d-1,连续20 d。在灌胃的第5天开始,除正常组外,模型组和发酵中草药组均腹腔注射CTX 40 mg·kg-1,1次·d-1,连续5 d。检测各组老鼠免疫器官指数、血清生化指标及碳粒廓清法检测单核-吞噬细胞吞噬功能。结果表明,与模型组相比,发酵中草药高、中、低剂量(400、200和100 mg·kg-1)均能够极显著提高免疫功能低下小鼠的胸腺指数(P0.01),显著增加其脾脏指数和单核吞噬细胞的廓清指数和吞噬指数(P0.05),同时显著降低血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和尿素氮(BUN)含量(P0.05)。表明发酵中草药对CTX致免疫功能低下小鼠具有保护作用。     

鹅绒委陵菜多糖对荷瘤小鼠细胞因子的影响

[目的]研究鹅绒委陵菜多糖(PAP)对荷瘤小鼠外周血细胞因子白介素-2(TL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。[方法]建立肉瘤S180小鼠动物模型,灌胃给予50、100和200 mg/kg剂量的PAP,以抑瘤率为指标,考察鹅绒委陵菜多糖的体内抗肿瘤活性,测定其抑瘤率;ELISA法测定荷瘤小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TN-α)的水平。[结果]低、中、高3个剂量的PAP对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为46.41%、52.29%和59.48%;其中CY和低剂量的多糖组合抑瘤率与中、高剂量的多糖抑瘤率相当,并明显高于单用环磷酰胺组的抑瘤率;低、中、高3个剂量的PAP能明显提高荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α的水平。[结论]鹅绒委陵菜多糖具有提高荷瘤小鼠细胞免疫的作用。     

金樱子多糖对阿霉素的增效减毒作用

无菌抽取培养在小鼠腹腔内生长良好的S180腹水瘤制成匀浆,右腋接种,建立小鼠S180实体瘤模型。连续给药10 d,通过计算抑瘤率、q值、脾脏指数、胸腺指数,检测白细胞(WBC)、红细胞(RBC),Elisa法测定脾脏的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),判断金樱子多糖(RLP)对阿霉素(ADM)的增效减毒作用。结果表明:ADM单用抑瘤率为32.57%,与RLP合用后抑瘤率提高(q>1.15);RLP高剂量与ADM合用组与单用ADM组比较,外周血细胞(RBC、WBC)、脏器指数、SOD均明显增加(P<0.05),而MDA明显降低(P<0.05),说明金樱子多糖与化疗药物阿霉素合用后具有明显的增效减毒作用。