抗草甘膦转基因大豆及其加工产品的环介导等温扩增检测技术

本研究旨在建立抗草甘膦转基因大豆及其加工产品中外源基因的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测技术.根据转基因大豆外源CP4-EPSPS基因的6个区域设计4条特异性引物,利用LAMP法对选取的大豆、豆粕及含有大豆成分的饲料样品进行检测.结果提示,LA...     

饲料中转基因成分的实时荧光PCR检测研究

本试验采用实时荧光PCR方法对饲料中的转基因成分进行了检测研究。对国产的14份猪饲料、3份水产饲料和3份荷兰进口代乳粉共20份样品进行了大豆、玉米、棉花、油菜和大米物种特异性基因和CaMV35S、NOS、FMV35S、NPTⅡ、PAT、BAR、GOX、CryⅠA(b)、CryⅠA(b)-CryⅠA(c)、rrsoy外源基因检测。在11份样品中检出转基因成分,其中8份样品中含有转基因大豆成分,2份样品中含有转基因大豆和转基因棉花成分,1份样品中含有转基因大豆、转基因油菜和转基因棉花成分。     

豆粕饲料中转基因成分的多重PCR快速检测

以大豆内源基因、35 S启动子基因、NOS终止子和35S-CTP4为检测对象,研究了对内源基因与外源基因的引物终浓度配比及退火温度对转基因豆粕多重PCR检测的影响.结果表明,建立的多重PCR方法能够准确的同时检测出豆粕中的内源基因和转基因成分.     

应用巢式PCR技术对水产饲料及食品转基因成分检测的研究

根据GenBank中登录的转基因大豆完整外源DNA序列设计了几对引物,对转基因大豆和水产饲料以及部分豆制食品进行了巢式PCR检测。结果表明,巢式PCR可以扩增10-10g/μl浓度的DNA溶液,检测灵敏度高达0.01%;该巢式PCR技术具有高度特异性、灵敏度和很好的重复性。用巢式PCR对部分市售的水产饲料和豆制食品进行检测,90.6%的水产饲料和46.5%的食品能检测出外源基因片段,表明转基因大豆广泛存在于水产饲料和我们的日常食品中,为食品安全分析和管理提供了方法和依据。     

转基因大豆出新品种

消息 :科学家2004年3月4日表示 ,巴西农作物研究机构Embrapa已经开发了一种新的转基因 (GM ,基因改造 )大豆品种。若获批供销售 ,则将结束孟山都 (Monsanto)在巴西这一领域的垄断地位。这种新的转基因大豆与美国生物技术种子公司孟山都的RoundupReady(RR)大豆类似 ,后者的技术获得专利 ,并且是目前在巴西惟一使用的大豆种子。Embrapa研究部副主管席尔瓦称 :“这可能有助于转变公众对巴西转基因大豆的看法 ,因为许多人称不应使转基因大豆合法化 ,因为孟山都会形成垄断。”巴西此前一直禁止转基因食品和农作物 ,直至2003年初 ,政府对从黑市获得转基因种子并进行种植的农户进行了特赦。Embrapa一研究员说 :“新的转基因大豆已经被多个巴西大豆品种所适应 ,早期的实验结果不错。”转基因大豆出新品种$《中国农业科技信息网》     

科技动态

转基因农产品检测试剂盒面世上海市农科院生物技术中心成功研制出“转基因农产品检测试剂盒”并进行规模生产。据悉,经过两年来的攻关研究,上海市农科院生物技术中心研究出的能在50min内快速抽提转基因食品DNA的试剂盒,加上PCR检测等其他步骤,一个样品的检测时间大约在4～5h左右。同时,该项快速检测的内容可以从过去单纯检测有无转基因成分扩展到确定转基因成分含量的高低。该试剂盒系列产品品种齐全,可用于检测目前商业化生产的主要转基因农产品(大豆、油菜、玉米)中多种外源基因和表达调控元件;DNA提取率高,纯度高,质量高,可定性PCR…     

实时荧光定量PCR法检测转基因猪外源基因整合拷贝数

以GFP转基因猪为研究对象,以转铁蛋白受体基因为内参基因,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR建立针对外源基因GFP和内参基因的双标准曲线和方程。对转基因猪基因组DNA中外源基因和内参基因的拷贝数同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在转基因猪中的整合拷贝数。同时,利用Southern-blot进行验证分析。结果显示:实时荧光定量PCR法检测2头转基因阳性猪外源基因拷贝数分别为3和2,2头转基因阴性猪外源基因拷贝数均为0,结果同Southern-blot检测一致。结果表明:实时荧光定量PCR法高通量、灵敏、方便,可以更好的用于转基因猪外源基因整合拷贝数的检测。     

利用荧光定量PCR法检测转基因绒山羊外源基因整合拷贝数

外源基因拷贝数是转基因动物检测中的重要内容。本实验室使用PiggyBac(PB)转座子系统获得Tβ4-GFP、FGF5s-GFP、VEGF164-GFP 3种转基因类型陕北白绒山羊,为研究其外源基因整合情况,利用荧光定量PCR方法对其外源基因copGFP的整合拷贝数进行检测。以Gluc为内参基因,建立外源基因和内参基因的标准曲线方程,对转基因陕北白绒山羊DNA进行荧光定量PCR,将copGFP/Gluc的比率作为外源基因的拷贝数。同时,选取Tβ4-GFP转基因绒山羊对其整合位点进行检测,以验证拷贝数结果。结果显示:copGFP与Gluc的标准曲线方程分别为,y=-3.230 6x+39.216(R~2=0.998 8)、y=-3.564 8x+38.440(R~2=0.996 0);成功得到9只转基因绒山羊的整合拷贝数;Tβ4-GFP转基因绒山羊整合位点数目和拷贝数检测结果一致。结果表明,利用荧光定量PCR检测转基因绒山羊外源基因整合拷贝数,操作简单、灵敏方便,是一种切实可行的检测方法。     

转基因作物安全性及外源基因加工降解研究进展

转基因作物的种植面积已累计达到约十亿公顷,转基因作物市场价值累计数百亿美元。国内外对转基因作物及产品采取积极研发和严格审批的态度。转基因作物的安全风险或潜在安全风险主要包括对环境生态危害、对人体和动物体以及食品安全的影响。转基因作物外源基因可通过特定饲料加工手段降解。研究结果表明,挤压膨化对转抗草甘膦基因大豆外源基因的降解效果而言,温度是主要影响因素,其次为剪切作用,二者的复合作用是正向加强的。     

盐胁迫应答基因GmWRKY6的克隆及转基因百脉根的抗盐分析

根据大豆盐胁迫RNA-Seq数据,筛选并克隆得到1个大豆WRKY类转录因子GmWRKY6基因。序列分析表明,该基因含有1个1674bp的开放阅读框,编码557个AA,编码蛋白属于IIb类WRKY家族成员,含有1个WRKY保守结构域和1个C2H2锌指结构基序。基因表达模式分析表明,GmWRKY6基因在大豆根中表达量较高,并且该基因受盐胁迫诱导表达。构建GmWRKY6基因的植物超表达载体,获得7株T0代阳性转GmWRKY6基因百脉根。进一步对T1代转基因株系进行抗盐分析发现,在200mmol·L-1 NaCl处理14d后转基因株系生长状态良好,而野生型对照生长矮小,叶片干枯。此外,对相关生理指标的测定发现,转基因株系叶片中脯氨酸和叶绿素含量显著高于野生型对照,而丙二醛含量和相对质膜透性显著低于野生型对照。此外,盐胁迫下转基因百脉根叶片中钠离子含量显著低于对照,而钾离子含量显著高于对照。以上结果表明大豆GmWRKY6基因的超表达能够显著增强百脉根的抗盐能力。     

食品与饲料加工过程中转基因作物的检测技术进展

1引言转基因作物是指利用重组DNA技术将外源基因整合于受体植物基因组,改变其遗传组成后产生的植物及其后代,也称为遗传修饰生物体(Geneticallymodified organisms,GMOs)。自1983年首例转基因植物——转基因烟草问世以来,全球转基因作物的种植面积和销售收入均以倍数增长。全球转基因作物的种植面积2005年达到9000万公顷,其中大部分种植在美国、加拿大和阿根廷。从转基因作物种类来看,转基因大豆占60%左右,其次是转基因玉米和棉花。我国大豆年产量仅次于美国、巴西和阿根廷,居世界第四,2003年大豆产量约1620万吨。但是,国产大豆仍远不能…     

盐胁迫应答基因GmWRKY6的克隆及转基因百脉根的抗盐分析

根据大豆盐胁迫RNA-Seq数据,筛选并克隆得到1个大豆WRKY类转录因子GmWRKY6基因。序列分析表明,该基因含有1 个1674 bp的开放阅读框,编码557 个AA,编码蛋白属于IIb 类WRKY 家族成员,含有1个WRKY 保守结构域和1个C₂H₂锌指结构基序。基因表达模式分析表明,GmWRKY6基因在大豆根中表达量较高,并且该基因受盐胁迫诱导表达。构建GmWRKY6基因的植物超表达载体,获得7株T₀代阳性转GmWRKY6基因百脉根。进一步对T₁代转基因株系进行抗盐分析发现,在200 mmol·L^-1 NaCl 处理14 d后转基因株系生长状态良好,而野生型对照生长矮小,叶片干枯。此外,对相关生理指标的测定发现,转基因株系叶片中脯氨酸和叶绿素含量显著高于野生型对照,而丙二醛含量和相对质膜透性显著低于野生型对照。此外,盐胁迫下转基因百脉根叶片中钠离子含量显著低于对照,而钾离子含量显著高于对照。以上结果表明大豆GmWRKY6基因的超表达能够显著增强百脉根的抗盐能力。     

转人血清白蛋白基因奶牛多重PCR快速检测方法的建立

建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品进出境监测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据转基因奶牛内源基因β2-微球蛋白基因(β2-microglobulin,B2 M),外源基因人血清白蛋白基因(Human α-lactalbumin,α-LA)及标记基因绿色荧光蛋白基因(EGFP)和新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。该方法敏感、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。     

转人溶菌酶基因奶牛多重PCR快速检测方法的建立

建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品进出境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)设计奶牛内源性基因引物,根据外源基因人溶菌酶基因(human lysozyme,hLY)及标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。结果表明,建立的方法灵敏、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。     

转人乳铁蛋白基因奶牛多重PCR检测方法的研究

本研究旨在建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品出入境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因(mtDNA)设计奶牛内源基因引物,根据外源基因人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,hLF)和新霉素磷酸转移酶基因(NPT Ⅱ)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。本方法敏感、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。     

转基因大豆内外源DNA在少孢根霉发酵中的降解

试验旨在研究转基因大豆内、外源基因在少孢根霉发酵过程中的降解变化规律,并探讨其降解规律与相关酶活性的关系。试验采用定性和定量PCR检测各基因的降解变化,同时测定相关酶活。结果表明:内源基因Lectin和外源基因EPSPS在高温蒸煮下降解至800 bp以下,在发酵4 d后降解至200 bp以下;发酵过程中外源基因相对含量的变化与核酸酶、脂肪酶、蛋白酶活性的变化相一致。该研究为我国转基因食品加工过程中外源基因的降解及其机理研究提供一定的理论基础。     

转基因动物细胞中外源基因整合位点的分析

旨在通过测定转基因动物中外源基因在宿主染色体上的整合位点来阐述外源基因的整合机制及对该过程中出现的有关问题进行讨论。本研究以MYF6(Myogenic factor 6)转基因小鼠及FAT-1转基因牛为试验材料,采用TAIL-PCR(热不对称交互式PCR)、hiT AIL-PCR(高效热不对称交互式PCR)及本试验室改进的hiT AIL-PCR法,对转基因动物进行了外源基因的整合位点的检测及测序分析。本研究检测到3个MYF6转基因小鼠和一个FAT-1转基因牛的外源基因插入到染色体上的片段,还获得了大量的未能整合到染色体上的PCR片段。通过对以上片段的测序分析,我们发现重组质粒并不一定是在酶切位点断裂,重组质粒可以发生随机断裂,首尾相连等,外源基因整合如宿主染色体,可以同源重组的方式进行整合,也可以进行随机插入。同时,发现并分析了在转基因动物检测中可能存在的问题。通过对外源基因在转基因动物体内整合位点的分析,能够明确转基因动物的遗传背景,能够为转基因动物的生产提供帮助。     

获批进口转基因大豆掀起新风浪

根据国家农业转基因生物安全委员会评审结果,日前,农业部批准发放了3个可进口用作加工原料的转基因大豆品种的安全证书。一时间有关转基因大豆的各种争论再一次掀起新风浪——转基因大豆的安全性如何?转基因大豆对我国非转基因大豆市场是否有冲击?对饲料价格有哪些影响?未来国内大豆市场将何去何从?转基因大豆的由来据资料显示,1996年春,美国伊利诺伊西部许多农场主     

转基因小鼠多重PCR快速检测方法的建立

以转赖氨酸基因小鼠为研究对象,根据转入基因的载体结构分别设计赖氨酸基因、新霉素抗性基因、转基因启动子及小鼠基因组内参基因特异性引物,优化反应条件,建立转基因小鼠多重PCR检测方法。结果表明,建立的方法可以用于转赖氨酸基因小鼠的检测,同时为转基因动物检测标准的建立提供试验依据。     

转pGH基因猪繁殖性能及外源基因的传代

为探讨外源pGH基因对转基因猪繁殖性能的影响及其在F1代中的遗传情况,对转pGH基因长白猪与普通长白猪繁殖性能的各项指标进行了测定和比较,并对转基因猪F1代仔猪进行了外源基因的检测。结果显示,除转基因母猪F1代仔猪断奶个体质量差异显著(P0.05)外,转pGH基因猪与非转基因猪繁殖性能其他指标均差异不显著;转基因公猪和转基因母猪F1代仔猪转基因阳性率分别为50.00%和47.83%,外源pGH基因对转基因猪的繁殖性能未产生显著影响,并可遗传给下一代。本研究为规范合理选育转pGH基因猪提供了理论依据,为进一步研究节粮型高瘦肉率转基因猪及其在实际生产中的应用奠定基础。