液体培养条件对白僵菌代谢物产量的影响

白僵菌代谢产物可以大大提高靶标害虫的杀虫效果,揭示菌株培养条件与代谢物产量之间的关系对于代谢物的大量提取具有重要意义。本研究采用正交试验对白僵菌2382菌株的培养基初始pH值、培养时间、培养温度和转速4个培养条件与代谢物产量之间的关系进行了研究。结果表明:各因子对白僵菌液体培养代谢物产量影响的强弱排序为培养基初始pH值培养时间培养温度转速,白僵菌液体培养代谢物产量最佳的培养条件为:初始pH值5.0、培养时间10d、培养温度30℃、转速140r·min-1。该研究为大批量提取白僵菌代谢产物及其在害虫生物防治中的应用提供了科学依据。     

白僵菌Bb98土壤培养方法的优化

采用液固双相发酵技术,对白僵菌的培养进行了液体接种、固体配方筛选和固体培养发酵抗污染试验。结果表明,加有土样成分配方比传统配方可降低生产成本,简化操作方法,而且具有一定的抗污染作用。     

球孢白僵菌营养需求及培养条件研究

用含不同营养的培养基对球孢白僵菌Bb13菌株进行培养产孢。以不同的培养温度、pH值及培养基中所添加的不同的碳、氮源,微量元素进行正交实验,以所产孢子的含孢量和萌发率为主要指标,筛选确定了适合球孢白僵菌Bb13孢子生长的最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是蛋白胨,微量元素铜和锌,对产孢和孢子萌发有明显的促进作用,最适pH值为6￣7,最适培养温度是20￣25℃。     

白僵菌有关培养条件及其与毒力关系的研究

以麦麸、米糠、黄豆粉、蛋白胨、牛肉膏、蚕蛹粉作供试氮源,在３种动物性氮源的培养基上,白僵菌的产孢量及毒力均高于植物性氖源,其中以蚕蛹粉最优;在１６种不同碳氮比的培养基上,以碳氦比２（４０／２０）和１．５（３０／２０）产孢量和毒力为高;在８种不同ｐＨ值的培养基上,以ｐＨ５．５～６．５最适于产孢,ｐＨ６．３、７．０时,白僵菌的毒力明显较强。研究结果显示,菌落生长量和产孢量往往不一致,而产孢量与毒力则明显相关。     

继代培养对球孢白僵菌抗旱力的影响

检测了球孢白僵菌继代培养中菌落局变产生的分离株在不同湿度下分生孢子的发芽率,结果显示继代培养能增强菌株的抗旱力,但菌株生活力减弱。     

白僵菌半固体平板培养的工艺研究

以平板和塑料网格平板为载体,研究优质液体种子的高效培养、半固体发酵工艺.结果表明,在25℃下培养36 h可获得高活性的优质液体种子,接种量10%、半固体培养基在平板上粘附的厚度0.25 cm左右、培养环境湿度90%～95%、产孢最佳终止时间9 d最为经济合理.利用塑料网格平板生产的孢子粉含量可达1.2×1011～2.0×1011g-1(含水率为9.05%～11.36%),萌发率在98%以上.     

不同基质和培养时间对球孢白僵菌孢子耐逆性研究

球孢白僵菌孢子是应用最广泛的真菌杀虫剂关键因子,为了解不同培养基和培养时间对球孢白僵菌孢子抗逆能力的影响,从采集自全国不同温区30株球孢白僵菌菌株中筛选出5株生长快、产孢量大的菌株——RCEF5609、RCEF5746、RCEF5688、RCEF6200和RCEF6857。采用营养丰富度不同的常用培养基（PDA、SDAY和MEA）和不同培养时间两个方面研究菌株耐热和抗紫外性,并分析相关基因转录水平上的变化。结果表明,菌株RCEF6200和RCEF5688分生孢子发芽率最高,抗逆性最强,RCEF5609孢子萌发率最低,抗逆性最弱;营养贫瘠的PDA较营养丰富的SDAY和MEA产生的孢子更有利于耐热和抗紫外,培养7 d的分生孢子抗逆性更强。进一步分析抗逆性最强的菌株RCEF6200和抗逆性最弱的菌株RCEF5609抗逆基因转录水平,结果显示,菌株RCEF6200和RCEF5609逆境胁迫后与对照组相比,在PDA培养基上和7 d的培养条件下,较其他处理中耐热性和抗紫外线相关基因表达水平呈不同程度增加,可见抗逆相关基因转录分析结果进一步验证上述结果。研究为生产抗逆性强的球孢白僵菌菌剂提供一定理论...     

白僵菌菌株退化与培养条件关系及其控制技术

通过对 1 0个菌株在 5种培养基上继代培养情况检测 ,探讨了不同培养基对菌种稳定性、产孢量和毒力的影响 ,结果显示 ,菌落局变的分离株多表现为菌落生长速率增加 ,产孢能力下降 ,对寄主害虫毒力降低趋势 .经过比较 ,以营养贫乏的 PDA培养基培养容易产生变异 ,以含虫尸、蛋白胨加 PDA培养基 (CPPDA)培养最为稳定 ,表明氮源是影响变异的主要因子 ,但菌株变异主要决定于本身的遗传物质 ;并提出了控制菌种退化的有效措施     

利用赤眼蜂和白僵菌防治黏虫初步研究

对赤眼蜂(Trichogramma)和白僵菌(Beauvenia bassiana)防治黏虫的效果做了初步探索。研究结果显示,螟黄赤眼蜂(T.chilonis)的卵块寄生率在55.56%~77.78%之间,卵粒寄生率在14.24%~27.69%之间。松毛虫赤眼蜂(T.dendrolimi)的卵块寄生率在66.67%~88.89%之间,卵粒寄生率在14.63~30.54之间。白僵菌的校正防效在20.75%~54.72%之间。     

球孢白僵菌原生质体获得和再生恢复培养条件的研究

对球孢白僵菌菌龄、β-巯基乙醇、溶壁酶、渗透压稳定剂和琼脂粉含量等条件对球孢白僵菌原生质体的获得和再生恢复培养的影响进行了研究,建立了球孢白僵菌原生质体获得和再生恢复培养的最佳体系。原生质体获得的最佳菌龄为培养24~28 h的菌丝体,最佳β-巯基乙醇浓度为0.01 mol/L,最佳酶为真菌溶壁酶,最佳渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl,原生质体获得频率高达99%;原生质体再生恢复时培养基中最佳渗透压稳定剂为0.7 mol/L葡萄糖,最佳琼脂粉质量分数为0.75%,再生频率达57%。     

食用菌摇瓶和罐发酵两种深层培养结果差异的分析

对食用菌摇瓶和罐发酵两种深层培养试验结果存在的差异进行了分析,认为①氧吸收系数(kd)和溶解氧②二氧化碳(CO_2)③对菌丝的损伤等三方面因素是造成差异的原因,提出了消除差异的措施。     

球孢白僵菌和布氏白僵菌对甜菜夜蛾的室内毒力测定

采用浸虫法测定球孢白僵菌(ACCC30111)和布氏白僵菌(ACCC30290)在不同浓度下对甜菜夜蛾的室内毒力。结果表明:105~109个/ml孢子浓度的球孢白僵菌和布氏白僵菌孢子悬浮液对甜菜夜蛾均有杀伤作用,相同浓度下球孢白僵菌杀伤力强于布氏白僵菌,其中109个/ml孢子球孢白僵菌处理的甜菜夜蛾在第8 d校正死亡率就达到了100%,其LT50为1.70 d;球孢白僵菌和布氏白僵菌对甜菜夜蛾第3 d的LD50对数剂量分别为8.2955、14.0898,第5 d的LD90对数剂量分别为8.7598、14.6219;经LD比率测定,球孢白僵菌对甜菜夜蛾的毒力明显大于布氏白僵菌。     

不同培养基继代培养球孢白僵菌对西花蓟马毒力和产孢量的影响

【目的】通过开展连续继代培养对高毒菌株产孢和毒力的影响研究,获得对西花蓟马(Frankliniella occidentalis)毒力和产孢量均高且稳定的球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株,进一步提出有效防止菌株退化、优良菌株保存和改良的方法与措施,为高效菌株的规模化生产提供参考。【方法】室内条件下,采用浸虫法,用浓度为1×107个孢子/mL球孢白僵菌悬浮液处理西花蓟马初羽化成虫,分别测定28株不同来源的菌株对西花蓟马的毒力;并将筛选出的4株高毒力菌株的分生孢子分别涂布于玉米琼脂（CMA）培养基与SDAY培养基上,比较不同菌株以及不同培养基之间产孢量的差异,筛选出高产孢菌株与产孢培养基,以筛选得到的白僵菌菌株为初始菌株F0,把F0代球孢白僵菌分别接种于CMA培养基、添加蝉蜕的CMA培养基和添加西花蓟马虫尸粉的CMA培养基,分别测定经过不同培养基连续5代继代培养得到的球孢白僵菌对西花蓟马成虫的毒力,并测定产孢量。使用模型模拟分析球孢白僵菌菌株经过不同培养基继代培养后培养代数与产孢量的关系,并对不同培养基培养得到的不同培养代数的白僵菌菌株的产孢量与其对西花蓟马的致死中时（LT₅₀）进行回归分析,研究毒力与产孢量的相关关系。【结果】经过室内毒力测定,处理5 d后,菌株DZDC-9、GZGY-5、WLMQ1-8、SZ-26对西花蓟马成虫的校正累积死亡率均高于90%,LT₅₀均在3 d内,毒力显著高于其他菌株;比较高毒力菌株在两种产孢培养基上的产孢量,发现4株球孢白僵菌的产孢量存在显著差异,菌株DZDC-9的产孢量显著高于其他3株,4株菌株在CMA培养基中的产孢量均明显高于SDAY培养基。随着白僵菌菌株在CMA培养基上连续5代的继代培养,菌株对西花蓟马成虫的致病力呈现下降趋势,从第3代开始致病力显著降低,而添加蝉蜕的CMA培养基培养得到的不同培养代数的分生孢子对西花蓟马致病力则没有显著差异,添加西花蓟马虫尸粉的CMA 培养基培养得到的不同代数的分生孢子对西花蓟马致病力有一定的增强趋势;通过模型可以发现单纯以CMA培养基继代培养白僵菌的产孢量随培养代数呈现指数下降,而在培养基中添加蝉蜕或西花蓟马虫尸粉白僵菌产孢量则随培养代数呈现指数上升,蝉蜕或西花蓟马虫尸粉的添加对产孢量有一定的增强作用。白僵菌菌株产孢量与毒力存在一定正相关关系,产孢量相对较高的菌株对西花蓟马成虫的致病力相对较高,致死中时短。【结论】筛选得到一株对西花蓟马高效的白僵菌菌株DZDC-9,产孢培养基中加入蝉蜕和西花蓟马虫尸可以维持菌株生长特性,延缓毒力退化趋势;同一菌株的产孢量可以作为菌株毒力评价的一个指标。     

氮源对不同寄主来源的球孢白僵菌菌株液体培养特性的影响*

 对从小菜蛾(Plutella xylostella)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)和马铃薯块茎蛾(Phthorimaea opercula)3种鳞翅目昆虫罹病虫体上分离纯化的球孢白僵菌DBM001, XWYE001和PTM001菌株在液体培养基(萨氏葡萄糖培养基)及其在不同氮源添加物培养基中菌丝产量、产孢量、孢子形成等特性进行了研究。结果表明：3菌株中,分离自斜纹夜蛾的XWYE001菌株培养物浓度及菌丝生长量略高于分离自小菜蛾和马铃薯块茎蛾的DBM001和PTM001菌株,但差异不显著(P>0.05）。而不同类型氮源物质对分生孢子的形成及菌丝生长影响显著(P＜0.05）,加入(NH4)2SO4 后液生分生孢子产量较高,菌丝产量相对较低;加入NH4NO3 或L-酪氨酸后菌丝产量较高,液生分生孢子产量相对较低。研究结果为球孢白僵菌高毒力菌株的筛选及液体培养提供理论依据。     

10株白僵菌菌株ITS序列测定和系统发育分析

通过对10株白僵菌菌株进行培养和提取基因组DNA,并利用真菌ITS序列通用引物ITS4和ITS5进行PCR扩增,均得到了1条长约500 bp DNA产物。分别对该产物进行序列测定和分析表明,这10株白僵菌菌株的ITS序列长为490~494 bp;利用ITS序列构建系统发育树表明,菌株YD-1、YD-2、JN-1、QC-1、SY-1、YC-1、YC-2、GA-1和FJ-2均为球孢白僵菌（Beauveria bassania）,而菌株FJ-1很可能为白僵菌属的一个新成员。     

球孢白僵菌原生质体制备和再生条件

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]经液体培养后,采用酶解方法制备其菌丝原生质体,并采取单因素实验对再生条件进行了研究。结果表明,经纤维素酶制备球孢白僵菌原生质体后,再生的最佳条件是:用L-broth培养基培养球孢白僵菌78h,KCl 0.8mol/L(再生用蔗糖0.6mol/L),柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为缓冲系统,纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5:2.5:2.5(mg/mL),在32℃水浴中酶解3h(pH自然)。     

维生素对白僵菌生长和液生分生孢子形成的影响

对球孢白僵菌在不同维生素为生长辅助因子的液体培养基中菌丝生长和液生分生孢子的形成进行研究。结果表明,不同维生素对球孢白僵菌的生长及液生分生孢子的形成影响极显著。在培养液中添加适宜的维生素能有效地刺激液生分生孢子的形成,VB6+VB1+VB2或复合维生素B能使球孢白僵菌获得较高的液生分生孢子产量,产孢量分别高达5.03×1011个·L-1和5.12×1011个·L-1。同时试验还表明,液生分生孢子的产量与维生素组合有关,复杂的维生素组合比单一的维生素更有利于液生分生孢子的形成。     

清罐作业的风险分析和安全控制

采用预危害分析法对清罐作业进行了详细的危害分析,指出入的不安全行为、物的不安全状态、管理缺陷和有害作业环境等是造成人员伤害、财产损失和环境污染的重要危害因素.从七个方面提出了相应的风险控制措施.     

烟田常用化学农药对白僵菌孢子和菌丝的影响

 测定了5种杀虫剂和5种杀菌剂对白僵菌孢子萌发和菌丝生长的影响。结果表明,杀虫剂对白僵菌的兼容性好于杀菌剂。杀虫剂辟蚜雾、功夫、氧化乐果对白僵菌孢子萌发和菌丝生长的影响小,混用时孢子萌发率超过80%,残效实验孢子萌发率分别为90.67%,90.67%,72.00%,因此可以与白僵菌同时使用或混用。百菌清、菌核净、多菌灵等杀菌剂抑制了白僵菌孢子的萌发和菌丝生长（萌发率不超过13%）,不应与白僵菌同时使用或混用。在化学农药与白僵菌混用时必须先进行严格的试验。     

不同温、湿度和光照对白僵菌孢子活力的影响

不同温、湿度用载片悬滴法培养白僵菌24h结果表明,温度25～30℃、RH95%～100%孢子萌发率高速度快,是白僵菌孢子萌发率最佳温、湿度。在自然直射光照时间(6h)以内对白僵菌孢子萌发无影响,而在直射光时间10h后白僵菌孢子萌发率逐渐下降,但白僵菌孢子落入玉米喇叭口内有叶片遮挡,对孢子萌发率影响不大。