微藻的分离技术及其应用

介绍了微藻分离的几种常用方法,包括样品系列稀释法、水滴分离法、微吸管分离法、固体培养基分离法,分析了这几种分离方法的特点和适用范围;另外,还对这几种分离技术的应用进行了简单概述,以期能对微藻分离工作的开展有所裨益。     

大西洋鲑循环水养殖水体异养细菌组成的研究

采集养殖池水样,选取Zobell 2216E琼脂培养基、溶菌肉汤琼脂培养基、硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基、脑心浸液琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、营养琼脂培养基6种常见固体培养基进行细菌分离培养,以平板菌落计数法和菌落外观形态特征辨别及16SrRNA基因测序方法进行异养菌计数和种类组成分析。结果显示:(1)养殖池水体异养菌可分为4大类,分别属于变形菌门(包括α-、γ-变形菌纲)、厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门,其中以γ-变形菌纲为优势菌群。按属分类大多为假交替单胞菌属和弧菌属。(2)不同培养基分离菌落数量2216E培养基溶菌肉汤琼脂培养基胰蛋白胨大豆琼脂培养基脑心浸液琼脂培养基营养琼脂培养基硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基,且2216E培养基菌落数极显著高于其余5种培养基(P0.01);2216E培养基所分离细菌的种类最多,分属于12个属,假交替单胞菌属为优势类群,占比50%,弧菌属仅占3.13%;脑心浸液琼脂培养基、溶菌肉汤琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基所分离细菌均以弧菌属为优势菌群,分别占33.33%、60%、25%;硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基所分离细菌仅分属于1个属,即弧菌属;营养琼脂培养基无弧菌,但有假单胞菌分离出。     

海水蛭弧菌分离纯化方法初步研究

蛭弧菌(Bdellovibrio)广泛存在于自然水体,它具有噬菌的特性,对水体中细菌数量控制具调节作用,有可能是进行生物防治的一种重要生物。本文比较不同分离方法、上层培养基营养盐浓度和富集培养与直接培养等对海水蛭弧菌分离、计数的影响,从而建立了海水蛭弧菌分离和纯化的方法。应用无营养盐的海水双层琼脂平板法,采用6种宿主菌分别对海南4份海水样品进行计数检测,发现不同宿主菌所得到的蛭弧菌数量不同,同时对分离纯化到的3株海水蛭弧菌进行液体培养增殖,进一步检验了海水双层琼脂法的可靠性。     

单胞藻软琼脂克隆固体培养基保藏技术

单胞藻藻种的保藏,国内外一般采用液体低温保藏技术,这种方法保种时间短。改用单胞藻软琼脂克隆固体培养基保藏技术,能够使营养成分缓慢地释放;软琼脂固体培养基的表面覆盖0.3 cm厚度的单胞藻培养液,可防止固体培养基水分的挥发;使单胞藻藻种在低温(8~10°C)环境中能够保藏较长的时间(2~3年)。     

单胞藻软琼脂克隆固体培养基保藏技术

单胞藻藻种的保藏技术,国内外多采用的是液体低温保藏技术,此方法保种时间短、营养盐消耗速度快、易污染、工作量大.试验改用单胞藻软琼脂克隆固体培养基保藏技术,能够使营养成分缓慢的释放;软琼脂固体培养基的表面覆盖0.3cm厚度的单胞藻培养液,可防止固体培养基水分的挥发;使单胞藻藻种在低温（8～10℃）环境中能够保藏较长的时间（2～3年）.     

红毛藻中多组分藻胆蛋白及其亚基的分离

采用DEAE-52离子交换柱对红毛藻(Bangia fusco-purpurea Lyngb.)中的藻胆蛋白进行分离，依次洗脱出蓝色、紫色、深红色、红色和浅红色等几种组分的藻胆蛋白；经光谱分析发现蓝色组分为R-藻蓝蛋白，紫色组分为1种三峰型的藻胆蛋白，深红色组分和红色组分为2种不同但又非常相似的藻红蛋白，其中深红色组分可能与某些色素物质结合较为紧密，而最后洗脱出的浅红色组分则为变性的藻红蛋白。尿素洗脱结果表明，蓝色组分的R-藻蓝蛋白是由2种双峰型的亚基构成。本研究旨为揭示藻胆蛋白的能量传递机制提供理论和技术依据。     

草鱼肠道中香港海鸥型菌的选择性分离与鉴定

从广东省某市池塘采集商品规格(体重2．0～2．5k)的草鱼(Ctenoharyngodon idellus)，利用加有头孢哌酮的麦康凯琼脂培养基，对其肠道中细菌进行选择性分离与鉴定。结果显示，12尾草鱼的肠道中，5尾可分离到具有以下特征的细菌：两端生鞭毛，菌体弯曲似海鸥状，革兰氏染色阴性，过氧化氢酶、氧化酶、尿酶和精氨酸双水解酶阳性，还原硝酸盐。不发酵、氧化或同化葡萄糖、甘露醇等15种常见的糖醇类，细菌形态、生化特性与报道的香港海鸥型菌相似，阳性率为41．7％。但在肌肉中未分离到此菌。进行分离细菌的16S rRNA基因序列分析，与GenBank中登录的4株香港海鸥型菌序列的同源性为99．7％～99．9％。由菌的培养特征、形态特点、理化特性、16S rRNA基因序列分析等多元鉴定的结果表明，从草鱼肠道中选择分离的细菌为香港海鸥型菌。药敏实验结果表明，所分离菌株对奥格门丁和亚胺培南的敏感性与报道的香港海鸥型菌有一定区别。     

金藻、角毛藻等藻种的固体培养基保藏技术

球等鞭金藻3010、3011、湛江叉鞭藻、Coccolithus藻、牟氏角毛藻等单细胞藻种在以硝酸钠为氮源的固体培养基上不能够正常生长，在以尿素为氮源的固体培养基上生长良好，藻种易提纯保种。     

副猪嗜血杆菌病原分离应注意的问题

<正>从病料分离副猪嗜血杆菌,通常在接种了金黄色葡萄球菌的血液琼脂上进行,目的是通过金黄色葡萄球菌为副猪嗜血杆菌的生长提供NAD。也可以选用巧克力琼脂或者加有NAD的PPLO培养基。培养时间通常需要24～48h。本菌为难于培养的微生物之一,尤其是从病料中分离时,常常受到杂菌的干扰。解决的办法,一是采用稀释培养法,二是在培养基中加林肯霉素和抗菌肽。由于本菌为上呼吸道常在菌,因此,必须注意由呼吸道分离到本菌并不一     

一株野生型耐饱和盐度的盐藻

从江苏盐城射阳盐场自然海水中分离得到一株可在NaCl浓度为6.15 mol/L培养基中很好生活的野生型盐藻,是目前已报道的最高盐度.研究其在不同盐度下的生长适应性,发现该盐藻细胞可以生活在多个NaCl浓度培养基中;以纵裂方式增殖;盐藻细胞通过改变自身的形状和形成透明状膜来快速响应盐度突然改变.     

黑斑蛙“白内障”病原菌分离及药敏试验

为探明湖南怀化芷江某青蛙养殖场患病黑斑蛙(白内障)的致病原,对患病蛙进行解剖后利用营养琼脂培养基对病原进行分离纯化,并用细菌16SrRNA引物进行PCR基因扩增。同时,采用19种抗菌药物对分离细菌进行药敏试验。通过试验,对黑斑蛙养殖户进行指导性用药,减少养殖户的经济损失的同时为病害的防治提供了可靠的依据。     

创伤弧菌(Vibrio vulnificus)五种选择性培养基的比较分析

本文主要对创伤弧菌的一种选择性培养基:CPC琼脂培养基、mCPC琼脂培养基、CC琼脂培养基、VVM培养基和VVMc培养基的选择效率进行比较分析,得出不同培养基对创伤弧菌选择效率的详实数据。     

浒苔抑藻物质的分离及其对赤潮微藻的抑制作用

采用液液萃取法和硅胶柱层析法对抑藻物质EPME(methanol extracts of Enteromorpha prolifera)进行分离,通过监测米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻的细胞数量,观察藻细胞形态,分析分离组分的抑藻活性。结果表明,EPME经液液萃取法分离,获得4个组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ,得率分别为29.0%、19.0%、12.7%和5.45%。其中,仅组分Ⅱ具有明显的抑藻活性。当浓度为1.0 g/L时,组分Ⅱ对米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻的生长抑制率分别为43.4%、44.9%和54.3%。组分Ⅱ经硅胶柱层析法分离,获得5种组分,组分Ⅱ-A、Ⅱ-B、Ⅱ-C、Ⅱ-D和Ⅱ-E。其中,组分Ⅱ-B和组分Ⅱ-C具有明显抑藻活性,并致使3种赤潮微藻的藻细胞出现空洞、细胞破碎和色素减褪等。进一步采用波长扫描和化合物检测方法,分析出此2种组分中含有内酯、香豆素类化合物,并确定了此2种组分硅胶GF254薄层层析分离的适宜展开剂,为后续纯化奠定了良好的实验基础。     

一株鸭源巴氏杆菌的分离与药敏实验

2012年1月9号扬州邗江区某养殖户送检4只病死高邮麻鸭,剖检取病死鸭肝脏进行细菌分离,在鲜血琼脂培养基上经过37℃培养24h后,出现灰白色、湿润、边缘整齐、露珠状不溶血的小菌落;在麦康凯培养基上不生长。病料触片经美蓝染色后镜检发现呈蓝紫色,两端着色深,中间浅的球杆菌。生化特性符合多杀性巴氏杆菌特性,药敏试验结果表明该菌对复方新诺明、头孢曲松钠、多粘菌菌B等药物有较强的敏感性。     

犊牛皮癣病的鉴定与病原分离

2013年3月察布查尔县郊区25头45日龄犊牛群发生皮肤病,3头犊牛不同部位的病变皮宵,被毛,经镜检,沙保弱氏培养,1%葡萄糖玉米粉琼脂等培养基培养分离,小样培养,鉴别。结果表明:犊牛皮廯病病原为石膏样毛廯菌,石膏样孢子菌等皮肤真菌。经致病性实验证实,犊牛皮廯病主要由石膏样毛廯菌致病性真菌所致。     

盾叶蕨藻夏季室内笼箱栽培技术

<正>盾叶蕨藻(Caulerpa peltata Lamouroux),属绿藻门、蕨藻科、蕨藻属。可作为水族箱观赏海藻,药用,生物净化器及食用海藻。藻体浅绿至深绿,全球分布。近年来研究证明从盾叶蕨藻中分离的单体化合物,经鉴定含有大量抗肿瘤、抗菌等生物活性物质。从营养成分上看,盾叶蕨藻是优质     

内蒙古碱湖一株菱形藻的分离鉴定及其应用潜力评价

从内蒙古哈马太湖中分离得到一株淡水硅藻NW129,经形态学和分子生物学鉴定,该藻株与菱形藻属的普通菱形藻亲缘关系最近。该藻在温度28℃、光照100μmol/(m~2·s)、光暗周期12 h∶12 h,摇床转速为160 rpm的条件下培养。在Zarrouk培养基中,连续培养25 d。培养12 d,干重达到1.06 g/L,每天平均生长率为0.10 g/(L·d),培养至25 d,干重达到1.95 g/L,后13 d的平均生长率仅为0.08 g/(L·d)。整个生长过程中,培养液pH从初始的9.20增至12.30。培养25 d后,采收藻细胞总脂含量为24.00%,可溶性蛋白为12.00%,多糖比例为3.35%,岩藻黄素含量达13.06 mg/g。结果表明,该藻株速生性状突出,对高pH耐受能力强,岩藻黄素含量高,是一株具有开发应用潜力的藻株。     

条斑紫菜提取物对4种赤潮微藻生长的抑制作用

研究条斑紫菜水溶性抽提液对前沟藻、中肋骨条藻、米氏凯伦藻和塔玛亚历山大藻等4种赤潮微藻生长的影响,在此基础上,利用甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和石油醚等有机溶剂浸泡条斑紫菜干粉,经抑藻圈方法检测条斑紫菜水溶性抽提液的抑藻活性。通过测定藻细胞密度和细胞体积,观察藻细胞形态,分析藻细胞内叶绿素、蛋白质和多糖等生理生化指标的变化,对抑藻活性最大的提取物对前沟藻、米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻赤潮微藻生长的抑制作用进行分析,并依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇为提取溶剂,采用液液分离法对此提取物做了进一步分离。结果表明,当条斑紫菜水溶性抽提液浓度超过16g/L时能显著抑制4种赤潮微藻的生长,尤其是对前沟藻和米氏凯伦藻具有很强的抑制作用。在5种有机溶剂提取物中,甲醇提取物的抑制作用最为明显。进一步研究发现此提取物对4种赤潮微藻的生长抑制显著且具有浓度效应,在16g/L时,此提取物对前沟藻、米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻的生长抑制率分别为70.5%、79.9%、67.1%和65.1%。同时,致使米氏凯伦藻、中肋骨条藻和塔玛亚历山大藻等3种赤潮微藻体积变小,运动能力下降,藻细胞出现空洞、细胞破碎和色素减褪等现象;...     

青石斑鱼肠道菌群研究

以中国沿海重要经济鱼类青石斑为研究对象,分别以营养琼脂和脑心浸液琼脂培养基检测其肠道中总的好气和兼性厌氧菌及专性厌氧菌的数量,以TCBS(Thiosulfate Citrate Bile Salts Su-crose)、麦康凯、NAC(Nalidixic acid-cetri mide)、锰营养盐、TPY(Tryptone-phytone-yeast extract)和SL(Rogosa SL.)琼脂等6种选择性培养基对青石斑肠道菌群进行计数和选择性分离,并对分离的优势菌株进行16S rRNA基因同源性分析。结果表明,青石斑鱼肠道内好气及兼性厌氧菌的总量可达5.3×105CFU/g。在6种选择性培养基中TCBS培养基上生长的菌落数量最多,约占总好气菌及兼性厌氧菌的36%,优势菌与牙鲆弧菌(Vibrio olivaceussp.nov.)同源性最高;麦康凯琼脂平板中生长的菌落数量次之,约占总好气菌及兼性厌氧菌的24%,优势菌与阿氏肠杆菌(E.asburiae)同源性最高;而NAC和锰营养盐琼脂平板中生长的菌落数量较少,优势菌分别与假单胞菌属(Pseudomonassp.)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的同源性最高。厌氧菌的数量很少,约为总好气和兼性厌氧菌数量的1%,其中TPY培养基中生长的菌落数量约占总厌氧菌数量的53%,优势菌与拟杆菌(Bacteroidessp.)同源性最高;SL培养基中没有检测到细菌。     

中华鳖『烂嘴、烂脖子、烂爪』致病菌的研究

笔者目前对我所“烂嘴、烂脖子、烂爪子”病鳖进行了致病菌的分离培养，菌种提纯、菌种鉴定、人工感染及药物敏感性等进行了研究，初步得知，该病的主要病原为嗜水气单胞菌。经药敏试验确定其对头孢哌酮、头孢噻肟、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、氯霉素、丁胺卡那等敏感性较强。一、材料与方法１．试验用鳖：原发性病鳖及人工感染用鳖均来自本所，体重１５０～３００克。２．培养基：营养琼脂培养基、SS培养基、克氏双糖铁培养基。以上培养基经分装，高压灭菌２８小时培养过夜，无菌即可使用（SS培养基除外）。３．菌株：用无菌方法从患…