红花木AFLP指纹图谱的构建

为了获得红花檵木的清晰AFLP指纹图谱,以进一步研究红花橙木种质资源的鉴别与分类问题, 、以红花檵木的嫩叶、成熟叶、果实为材料,采用改进后的CTAB+Tris-HCI洗涤法、CTAB法、SDS+Tris-HCI洗涤法、SDS法,获得了HMW基因组DNA,其中以CTAB+Tris-HCI洗涤法提取的成熟叶片的DNA的纯度和浓度都很高,且获得了清晰的AFLP指纹图谱,这为AFLP技术在红花橙木种质资源的研究与应用奠定了基础.     

北方地区黑杨派栽培品种的AFLP指纹分析

以我国北方地区杨树人工林广泛种植的10个黑杨派品种(36杨、50杨、107杨、108杨、111杨、加杨、沙兰杨、I-214杨、109杨和110杨)为实验材料,先进行了苗期形态特征分析,并利用AFLP标记技术,选用E-TA/M-CAG和E-TC/M-CAG两对选择性扩增引物组合,获得了12条特异性条带,建立了这10个杨树品种的DNA指纹图谱,每个品种的扩增带型互不相同,可为杨树品种或无性系鉴定提供独特的特征.结果表明:利用AFLP DNA指纹图谱可以灵敏地鉴别相近无性系并与形态学鉴别分类结论相吻合,表明DNA指纹鉴定配合形态学鉴定方法具有较高的准确性和有效性.     

柳树新品种指纹图谱构建

该研究利用荧光SSR标记构建了9个柳树新品种的指纹图谱。11对SSR标记共检测到56条等位片段,每个位点等位基因数3—8不等,平均为5.1个。观测杂合度(Ho)变化范围为0.333 3—1.000 0,平均为0.687 5;期望杂合度(He)变化范围为0.477 1—0.882 4,平均为0.626 3;多态信息量(PIC)变化范围为0.421 2—0.813 4,平均为0.605 9。优选的3对核心引物中,SALeSSR0086与SALeSSR0733组合、SALeSSR0086与SALeSSR0920组合可完全区分9个柳树新品种。聚类结果显示,9个柳树新品种遗传相似系数在0.605 9与0.910 7之间。该研究建立的荧光SSR基因分型体系高效、准确,不仅能为柳树品种鉴定和新品种保护提供科学理论依据,也能为柳树进一步育种工作奠定坚实的基础。     

绿竹等30个竹种ISSR遗传多样性分析及指纹图谱构建

为了研究30个竹种的遗传多样性和亲缘关系,建立其DNA指纹图谱,为竹亚科部分植物的分类及种质鉴定提供参考,利用优化的ISSR-PCR体系,筛选出18个多态性较好的的引物,对30个竹种的DNA进行PCR扩增。结果显示,18条引物扩增出的多态性位点占100%,平均每个引物扩增出14个位点,且DNA片段长度在200—3 000bp之间;30个竹种间的平均遗传距离为0.441 4,平均遗传相似度为0.644 44;在遗传距离0.51处进行ISSR聚类分析,可以将竹种分成6组,这与传统的分类大多比较吻合。说明30个竹种具有相当丰富的遗传多样性和基因库,各竹种间有一定的遗传差异和亲缘关系;ISSR技术分析竹种间亲缘关系和遗传多样性具有较高的精确性,可作为竹种分类的参考技术。     

药用忍冬多种质DNA指纹图谱构建

基于ISSR标记技术,构建了忍冬属20个药用种质的DNA指纹图谱。PopGen32软件分析显示:20个种质的平均有效等位位点数为1.543 7,Nei's基因多样性为0.313 7,Shonnon's信息指数为0.470 2,遗传一致度介于0.456 5～1.000 0之间;UPGMA聚类在0.735处将20个种质分成灰毡毛忍冬、忍冬和华南忍冬等3个类群。     

用SRAP标记构建松树良种指纹图谱方法的研究

利用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记对三种松树各16个样本进行检测,旨在构建三个树种的指纹图谱,为松树品种鉴定提供依据。采用5个引物组合对样本进行了SRAP扩增,在湿加松、火加松和马尾松上分别检测到46、53和44个多态性位点,平均每对引物多态性位点分别为9.2、10.6和8.6个。根据扩增产物的电泳条带进行赋值,把SRAP图谱转换为由1和0组成的数字指纹图谱,仅用2个或3个引物组合就可以把同一树种的不同单株完全鉴别出来,为松树优良品系的鉴定提供了一种可行的方法。     

薄壳山核桃品种亲缘关系分析与指纹图谱构建

目的 基于荧光SSR标记结合高通量毛细管电泳技术,建立一种快速、高效、稳定、准确的薄壳山核桃基因分型体系,用以分析各品种间亲缘关系并构建指纹图谱,旨在为薄壳山核桃品种鉴定与新品种保护提供理论依据,也为薄壳山核桃种质资源评价、品种选育与推广提供有益参考。 方法 选取薄壳山核桃及其近缘种54对SSR引物进行初筛,最终确定10对标记合成荧光引物用于后续分析。基于毛细管电泳技术对25个薄壳山核桃品种进行基因分型,利用软件统计位点数据并计算各个位点的等位基因数（A）和多态信息含量（PIC）。利用SSR标记间的相互组合构建薄壳山核桃不同品种的指纹图谱。通过等位片段的转化对薄壳山核桃品种进行聚类,并分析其亲缘关系。 结果 10对荧光SSR标记共扩增出68条等位片段,平均为6.8个;位点Cc19最多,有12个等位基因,位点BFU-Jr19最少,有3个等位基因。多态信息含量（PIC）变化范围为0.2910～0.8435（平均为0.5883）。优选的4对核心引物Cc19、PM-GA31、PM-CIN4和PM-GA41组合能完全区分25个薄壳山核桃品种。25个品种遗传相似系数在0.62~0.99之间,并聚类成2个大的类群,部分亲缘关系较近的品种聚类在一起,部分品种聚类不能与遗传背景完全对应。 结论 与传统的显性标记及聚丙烯酰胺凝胶电泳分型技术相比,荧光SSR标记结合毛细管电泳技术构建薄壳山核桃品种指纹图谱切实可行,通量大且速度快,结果稳定可靠,通过标记组合可有效的对不同品种进行区分。在品种亲缘关系分析中,建议增加杂交亲本数量,并在全基因组范围内选取一定数量效率更高的标记,以便最大程度地揭示薄壳山核桃品种间亲缘关系的真实水平。     

肉桂挥发油GC-MS指纹图谱研究

应用GC-MS法对肉桂药材的挥发油进行指纹图谱研究。采用超临界CO2流体萃取法提取肉桂挥发油,进一步用GC-MS技术对其进行指纹图谱测定,并采用国家药品监督管理局推荐的中药指纹图谱计算软件进行计算,建立肉桂挥发油的共有指纹图谱。其方法有较好的重现性、精密度和稳定性(RSD均小于3%),得到较好的肉桂挥发油GC-MS指纹图谱。为肉桂药材的质量控制提供有效手段。     

短枝木麻黄无性系鉴定及其指纹图谱构建

[目的]构建木麻黄无性系的DNA指纹图谱鉴定体系,为今后短枝木麻黄的品种鉴定、品种权保护、新品种的选育提供依据。[方法]从71对EST-SSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性好、扩增稳定的12对引物,采用降落PCR和毛细管电泳的基因分型方法,以采集的9个短枝木麻黄标准无性系的基因分型结果为参照,对华南沿海地区采集的109个短枝木麻黄无性系单株进行鉴定,并结合引物组合法构建基于EST-SSR分子标记的短枝木麻黄无性系鉴定体系。[结果]12对EST-SSR引物对109个短枝木麻黄无性系单株进行PCR扩增,共检测到50个等位基因,每个位点的等位基因数为3～6个,平均为4.2个,每对引物可区分2～5个短枝木麻黄无性系。根据鉴定结果,最终所有样品被划分为22个无性系,除已知的9个标准无性系外,另有13个无性系为不知名无性系,说明不同地区的无性系存在重复命名现象;利用引物组合法进一步优化后,发现只需7对引物就可将22个短枝木麻黄无性系完全区分,并依此建立了基于7对EST-SSR引物的22个短枝木麻黄无性系的指纹图谱,每个无性系都获得了一个7位数的指纹图谱编码。[结论]利用7对EST-SSR引物构建的22个短枝木麻黄无性系的DNA指纹图谱可用于短枝木麻黄无性系的鉴别,研究表明,华南沿海地区部分短枝木麻黄无性系存在命名混乱、同物异名、无性系数量少的现象,新品种选育工作亟待开展和加强。     

金丝楸优良无性系遗传多样性和亲缘关系的AFLP分析

目的 为了加深对金丝楸(Catalpa bungei C. A. Mey.)优良无性系资源遗传背景的认识, 方法 本研究运用荧光扩增片段长度多态性(AFLP)技术,筛选10 对EcoRⅠ+3/MseⅠ+3引物组合,以梓树属的梓树(C. ovata G. Don)、灰楸(C. fargesii Bur.)、光叶楸和‘豫楸1号’良种为对照,在基因组水平上检测定植于河南省洛宁县的75个金丝楸无性系的遗传变异。 结果 总体水平上,在获得的1 177条可统计条带中,1 130条呈多态性,多态性带百分率（PPBs）达96.01%;不同位点的有效等位基因数为1.00~1.99,平均为1.48±0.03;基因多样度为0.00~0.49,平均为0.28±0.01;Shannon信息指数为0.00~0.69,平均为0.43±0.02。当遗传相似系数为0.827 7时可将供试样品分为8组,其中,71个无性系聚为一组,显示出金丝楸无性系遗传背景较狭窄。各无性系的遗传距离和地理距离呈极显著正相关,表明地理隔离对楸树遗传多样性有明显的影响。结合聚类分析结果,金丝楸无性系当中的63号与其他遗传距离最远,值得重点保护和推广。 结论 形态学性状观察和AFLP分子标记分析显示：金丝楸与普通楸树存在较显著的差异,因此,认为金丝楸的分类地位宜做更加深入的探讨。     

非洲菊的组织培养

非洲菊(Gerbera jamesonji Bolus)别名扶郎花、灯盏花.属菊科,大丁草属.多年生温室花卉,草本.原产非洲,我国各地均有栽培,多作盆花及切花.近年来,研究并引进不少远缘杂交品种,秆粗壮、花大、色彩丰富艳丽,因此十分适合于切花需要,目前已成为重要的切花材料.但由于新品种用种子繁殖易产生变异,而用分株法繁殖增殖率又太低.为解决非洲菊新品种繁殖慢和保持其优良的遗传特性,采用组织培养法进行繁殖获得了大量的组培苗,以满足花卉市场的大量需求.     

枣叶片DNA的提取以及AFLP反应体系的建立

扩增片断长度多态性(AFLP)实验过程中,DNA提取质量和适合的PCR扩增反应体系是2个关键因素.利用CTAB法对枣树叶片DNA的提取方法进行探讨.结果表明:改良CTAB法抽提到了较高质量的枣基因组DNA,可用于AFLP实验分析;通过对酶切-连接体系和PCR扩增体系中的关键因素实验分析,建立了适合枣AFLP荧光反应体系,并得到清晰的DNA指纹图谱.     

非洲菊组织培养研究

利用非洲菊不同品种以及培养基进行研究。结果表明,在供试品种中以花托为外植体,非洲菊不同品种的成愈率为80%～90%,但诱导愈伤组织成芽率差异极明显,只有0号和1号再生能力较强,其诱芽率分别为38.0%和50.0%,而其他几个供试品种的愈伤组织只有成苗趋势。培养基对愈伤组织继代的影响为SH>B5>MS。不同激素种类及比例对愈伤组织继代的影响为BA+IAA>KT+NAA,BA10+IAA1>BA10+IAA0.5。不同附加成分对愈伤组织继代也有影响,其中附加Glu效果最好。在芽苗继代繁殖中,植物激素KT的继代效果好于BA。在最佳培养基上,非洲菊0号和1号的芽苗继代繁殖率为30d4.8株,完全能达到工厂化生产标准。     

不同保鲜剂对非洲菊切花保鲜效果的研究

研究报道了几种不同质量浓度硝酸银、柠檬酸、蔗糖组成的保鲜剂配方在非洲菊切花上的应用效果及其保鲜的最佳配方。通过各种指标综合评定,以50 mg/L硝酸银 150 mg/L柠檬酸 50 g/L蔗糖对切花保鲜效果最好。     

Methodological comparison of DNA extraction from Holcocerrus hippophaecolus (Lepidoptera: Cossidae) for AFLP analysis

Amplified fragment length polymorphism (AFLP) is a powerful DNA fingerprinting technique for studying genetic rela-tionships and genetic diversity in insects. However, the crucial prerequisite for AFLP analysis is to extract DNA of high quality. In this study, we evaluate four different protocols (SDS method, improved SDS method, CTAB method and a complex method with SDS and CTAB) for isolating DNA from the seabuckthorn carpenter moth (Holcocerrus hippophaecolus (Lepidoptera: Cossidae)). The results indicate that the CTAB method does not produce DNA suitable for AFLP analysis. The SDS method and the complex method with SDS and CTAB are comparatively time-consuming and resulted in low yields of DNA and were therefore not used for AFLP assay. The improved SDS method is recommended for preparing DNA templates from H. hippophaecolus for AFLP analysis.     

一种适合AFLP分析的油茶DNA提取方法

以油茶的成熟叶片为材料提取DNA,40个样品用改良的提取纯化方法成功提取出适用于AFLP分析的高质量DNA,OD260/OD280在1.7-2.0之间,可以用于AFLP反应。该方法打破了仅能用幼嫩叶片作为提取材料的限制,具有更广泛的适用性和重要的实用性。     

5种保鲜剂对非洲菊保鲜效果研究

以非洲菊红色系“大臣”品种为试验材料,用由蔗糖8、-HQ(8-羟基喹啉)、柠檬酸等配制的不同保鲜剂对非洲菊切花进行处理,观察对其外观品质的影响。结果表明:在5种保鲜剂处理中,以3%蔗糖 250 mg/L8-HQ 200 mg/L硫酸铝的保鲜效果最佳,能增大切花开放度,增加鲜重,花色鲜亮,花梗坚韧,可显著延长非洲菊切花瓶插寿命,提高其观赏价值。     

用秋水仙碱诱导非洲菊多倍体的研究

用秋水仙碱处理离体的非洲菊愈伤组织与丛生芽,研究了4种不同浓度的秋水仙碱对非洲菊芽增殖和染色体加倍的影响.结果表明:以0.05%的秋水仙碱溶液处理12 h效果较好,变异率达38.46%;叶片表皮细胞的气孔数量减少、体积增大以及植株叶大根粗等外部形态特征均可作为鉴别非洲菊多倍体的间接证据.     

非洲菊F1的组织培养

以非洲菊南燕F1种子无菌萌发的种子苗作外植体,在含不同植物激素的培养基上进行丛生芽的诱导、芽的继代增殖、芽生根与移栽,以快速获得再生植株.结果表明:丛生芽诱导培养基以MS+BA1.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1较好,诱导系数达到7;增殖培养基以MS+BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1较好,增殖系数高达10,且增殖芽生长好;生根培养基以1/2MS+IBA0.2mg·L-1最佳,生根率达100%,平均生根数量多,幼苗生长势旺.     

非洲菊组织培养技术体系研究进展

综述了近几年来非洲菊组织培养技术体系的研究进展,包括外植体的选择、培养基的筛选、移栽管理等方面,并提出了需要继续研究解决的问题。