甘蓝CMS下胚轴和子叶的离体培养与植株再生研究

【目的】探索一种利用甘蓝胞质雄性不育系(CMS)下胚轴和子叶进行快速扩繁的技术,为利用CMS大量繁制甘蓝杂交种提供一条新途径。【方法】以甘蓝CMS 05-2-10为试材,将苗龄5~7 d无菌苗的下胚轴和子叶切下,接种于MS培养基上,45~50 d后统计再生芽数,比较6-BA与NAA不同质量浓度配比对不定芽的诱导情况;将诱导出的不定芽接种于添加不同质量浓度(0,0.1,0.3,0.5 mg/L)NAA的MS生根培养基上,20 d后比较生根率和根的长势。【结果】在对下胚轴和子叶进行不定芽诱导时,MS培养基中分别添加1.0和4.0 mg/L的6-BA对下胚轴、子叶的诱导效果较好,其芽再生频率和分化系数分别为83.3%,53.0%和3.6,3.0。在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,其对下胚轴不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为80.7%,分化系数为3.4,褐化率为1.5%;在MS培养基中添加4.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,其对子叶不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为50.0%,分化系数为3.2,褐化率为3.4%;二者的褐化率均明显低于仅添加6-BA的处理。在MS生根培养基中添加0.3 mg/L NAA时,不定芽的生根效果较好,生根率达100%,且根系生长健壮。【结论】利用甘蓝胞质雄性不育系CMS 05-2-10的下胚轴和子叶作为外植体进行不定芽的诱导,对于下胚轴,其适宜培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂;对于子叶,其适宜培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。不定芽诱导生根的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。     

芝麻菜愈伤组织诱导及植株再生*

 以芝麻菜(Eruca sativa Mill)无菌苗的下胚轴、子叶和子叶柄作为外植体,研究了不同的激素浓度和组合对其愈伤组织诱导和植株再生的影响。结果表明,分别以MS+0.8mg／L 2,4-D,MS+0.8mg／L 2,4-D+0.1mg／L 6-BA,MS+0.8mg／L 2,4-D+0.2mg／L 6-BA为下胚轴、子叶柄和子叶的愈伤组织诱导培养基时,效果较好,出愈率依次为86.3%,78.2%,97.6%;将下胚轴、子叶柄和子叶的愈伤组织分别转移到分化培养基MS+3.0mg／L 6-BA+0.1mg／L　NAA,MS+3.0 mg／L 6-BA+0.2mg／L NAA上再生不定芽,效果最佳,不定芽再生频率分别为72.7%,63.6%,69.2%。将不定芽切下转移至1／2 MS+0.5mg／L IBA培养基上诱导生根,生根率达81％以上。     

西葫芦双单倍体自交一代离体再生研究

以西葫芦DH12-11409双单倍体植株自交后代种子为试材,研究不同激素组合、外植体类型和苗龄对诱导西葫芦不定芽再生以及不定芽生根的影响。结果表明,取5d龄西葫芦双单倍体黄绿色子叶的子叶节为外植体,在MS+30g/L Suc+8g/L Agar+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上诱导不定芽效果最好,诱导率高达90.0%,分化系数为8.5;生根培养基则以MS培养基中添加0.05或0.1mg/L NAA为宜;5~6片真叶再生植株经驯化移栽成活率高达90.0%,为再生植株驯化移栽的最佳时期。     

美丽胡枝子再生体系的研究

以美丽胡枝子为材料,研究了6-BA、2,4-D、NAA和苗龄等因素对其子叶节再生、节段扩繁和试管苗生根的影响,目的是要建立其高效再生体系.试验结果表明,6-BA、2,4-D对美丽胡枝子子叶节再生有显著作用,再生最佳培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L;不同苗龄的子叶节再生能力差别不大,但随着苗龄延长,子叶节对6-BA的敏感性增强; 6-BA对美丽胡枝子节段不定芽的形成影响也很明显,MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L为其最佳增殖培养基;6-BA对美丽胡枝子试管苗的生根作用不大,而NAA对生根的影响显著,最佳生根培养基为MS+6-BA 0.15 mg/L+NAA 0.5 mg/L.      

红掌叶片愈伤组织诱导与植株再生的优化

以亚丽桑娜红掌(Anthurium andraeanum cv.Arizona)为研究对象,研究了不同激素配比对愈伤组织诱导、不定芽分化、芽增殖培养、生根培养等方面的影响。结果表明,培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L为愈伤组织诱导的最适培养基;培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+6-KT 1.5 mg/L为不定芽分化的最适培养基;培养基MS+6-BA 0.8 mg/L为继代培养的最佳培养基;培养基MS+NAA 0.3 mg/L+IBA0.2 mg/L为诱导生根的最佳培养基。     

茖葱不定芽分化的再生体系

以茖葱鳞茎为外植体进行离体培养,研究不同植物生长调节剂组合及培养基对茖葱不定芽诱导、生长、增殖及生根的影响。结果表明:培养基成分为MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.1 mg/L适合不定芽诱导,诱导率为90.90%,培养基成分为MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L+KT 1.0 mg/L适合不定芽生长,生长率为25.17%,培养基成分为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L适合不定芽增殖,增殖系数为6.33,最佳生根培养基成分为1/2MS+NAA 0.5 mg/L,生根率为100%。     

扭果花旗杆组织培养与再生体系的建立

【目的】以扭果花旗杆(Dontostemon elegans)根和下胚轴为外植体,建立扭果花旗杆组织培养体系,为后续遗传转化体系的建立提供技术基础。【方法】以MS培养基为基础培养基,利用萘乙酸(NAA)探究根和下胚轴直接诱导不定芽情况,利用2,4 二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、NAA、苯基噻二唑基脲(TDZ)、吲哚丁酸(IBA)进行愈伤组织诱导及分化和不定芽生根试验,统计愈伤组织诱导及分化和不定芽生根情况,确定扭果花旗杆组培体系最佳培养基类型。【结果】（1）由根和下胚轴直接诱导不定芽的最适培养基分别为MS+0.3 mg/L NAA和MS+0.6 mg/L NAA,直接诱导不定芽的最佳外植体为根。（2）扭果花旗杆根和下胚轴都能诱导愈伤组织,其中根系诱导愈伤组织速度最快且状态最佳,其次为下胚轴。根系愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,诱导率可达100.00%;下胚轴愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+0.3 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA,诱导率可达100.00%。（3）根系和下胚轴的最佳愈伤组织分化培养基均为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,分化率分别为100.00%和86.66%。（4）最佳生根培养基为MS+0.5 mg/L IBA,生根率可达50%以上。（5）将组培苗移至土壤后,在光照培养室培养15 d,其存活率可达83.33%。【结论】建立的扭果花旗杆组培体系可获得与实生苗形态一致的组培苗,为扭果花旗杆遗传转化体系的建立奠定了技术基础。     

白背三七组织培养技术

【目的】探讨不同激素配比对白背三七离体繁殖的影响,建立白背三七种苗再生繁殖体系。【方法】以当年生枝条为外植体,采用不同激素组合（0～0.1 mg/L 6-BA、0～0.2 mg/L KT、0～0.2 mg/L 2,4-D以及0～0.4 mg/L IBA、0～0.4 mg/L NAA）对带芽茎段进行不定芽诱导和增殖、壮苗和生根培养。【结果】在添加相同KT、2,4-D条件下,添加过高的6-BA（1.0 mg/L）会降低丛生芽增殖系数;而在相同6-BA、KT的条件下,添加2,4-D可提高芽的增殖,以在培养基MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L KT+0.2 mg/L 2,4-D中茎段丛芽增殖系数最高,为15.4,丛生苗较壮、生长良好。不同IBA、NAA组合均可诱导丛生芽生根,但以培养基MS+0.2 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA的生根效果最好,接种10 d开始生根,15 d时生根率为85.3%,每株平均生根数为4~9条,移栽成活率可达82.3%。【结论】建立了白背三七种苗再生繁殖体系,可为白背三七的产业化生产提供技术支撑。     

香叶天竺葵组培快繁体系的研究

以香叶天竺葵无菌苗叶片为外植体,MS为基本培养基进行组培快繁研究,结果表明:愈伤组织诱导最佳培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L;不定芽诱导最佳培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.5 mg/L;不定芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L;最佳生根培养基为MS+NAA 0.1 mg/L,生根率达100%,且根系长势良好.     

蒙古黄芪愈伤组织诱导及植株再生

以蒙古黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao]种子萌发后的上胚轴、下胚轴和子叶为材料,采用MS培养基附加不同浓度植物生长调节剂进行愈伤组织的诱导,并诱导不定芽的发生,生根后得到完整的再生植株。在该过程中,采用正交试验分析6-BA、NAA、2,4-D、固化剂等条件对蒙古黄芪愈伤组织诱导和不定芽分化的影响。结果表明,下胚轴为诱导愈伤组织的最佳外植体取材部位,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D,最佳的不定芽分化培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,而固化剂采用0.1%Gelrite为最佳。     

南瓜离体培养及植株再生的研究

研究了不同外植体、消毒方法、激素水平等对南瓜离体培养及植株再生的影响。结果表明:以子叶作为外植体可以通过愈伤组织途径之后形成再生植株;而以子叶节作为外植体可以直接诱导不定芽形成再生植株。诱导不定芽的最佳培养基组合为MS+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA;诱导愈伤组织的最佳培养基组合为MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D;诱导南瓜不定根的最佳培养基组合为MS+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LIAA。     

不同基因型甜高粱愈伤组织与丛生芽诱导条件优化

【目的】探讨不同培养基类型和激素配比对不同基因型甜高粱的愈伤组织和丛生芽诱导的影响,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。【方法】以不同基因型甜高粱辽甜三号和北甜三号的成熟种子为外植体,在MS培养基中添加不同浓度2,4-D及2,4-D与NAA、6-BA或KT配比组合,对愈伤组织和丛生芽进行诱导;分别在B5、N6、MS和1/2MS培养基中添加不同2,4-D、NAA、6-BA组合,对愈伤组织进行诱导。【结果】适宜北甜三号愈伤组织和胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA,辽甜三号为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA,可获得质量较好的愈伤组织,愈伤组织块大且色泽鲜艳。适于两个基因型甜高粱丛生芽诱导的最佳基本培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D,但不同基因型的诱导率有明显差异,以辽甜三号的诱导效果较好。【结论】不同浓度2,4-D与其他激素配比对两个基因型甜高粱的愈伤组织诱导有明显影响,以对辽甜三号的诱导效果较好;在MS、B5、N6、1/2MS基本培养基中,MS可作为愈伤组织诱导的最佳基本培养基。     

绿萝组织培养与快繁技术

[目的]研究绿萝组培快繁技术要点,为绿萝再生体系建立和工厂化生产提供技术支持.[方法]以绿萝叶片和无节茎段为外植体,以MS为基本培养基,探讨不同浓度的激素组合(1.0~3.0 mg/L 6-BA、0.1~0.3 mg/L NAA、0.1~0.3mg/L IBA)对愈伤组织诱导及其分化、不定芽诱导、生根培养等的影响.[结果]两种外植体均能产生愈伤组织,但茎段产生愈伤组织较快,产生不定芽也快.叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L.茎段诱导愈伤组织及其分化的最适培养基均为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2 mg/L,最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L.[结论]绿萝叶片和茎段可作为愈伤组织培养的较好外植体,茎段培养效果优于叶片.     

贵州花魔芋的组织培养及植株再生体系

为了建立魔芋的组织培养及植株再生体系,促进贵州魔芋产业的发展,以魔芋根状茎为外植体进行组织培养.结果表明:不同外源激素对愈伤组织和根诱导的影响不同,NAA比2,4-D和IBA更有利于愈伤组织的诱导;在改良后的1/2 MS培养基中,KT比6-BA和NAA更有利于根的诱导;愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L,不定芽诱导培养基为MS+6-BA 4.0mg/L+NAA1.0 mg/L,生根培养基为1/2 MS+KT 0.1mg/L.试验建立了魔芋从外植体到有根苗的组培体系,并移栽组培苗获得了魔芋的小球茎.     

无患子优选树茎段离体培养体系的建立

【目的】筛选无患子茎段离体快繁最佳培养基,建立无患子优良种苗快速繁育体系。【方法】以野外选优获得的无患子树带腋芽茎段为外植体,采用L9(33)正交试验对影响外植体灭菌的HgCl2浓度、HgCl2与酒精的作用时间,不定芽诱导萌发中的6-BA、NAA及蔗糖用量,继代增殖中6-BA与KT用量和芽苗生根中的MS培养基无机盐水平、6-BA和2,4-D用量进行优化。【结果】75%酒精浸泡1 min,再用0.2% HgCl2处理7 min是无患子茎段灭菌的最佳方法,其外植体成活率高达83.33%;MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+20.0 g/L蔗糖是无患子茎段腋芽萌发的适宜培养基,诱导率高达96.67%;MS+0.7 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT是无患子茎段腋芽增殖的适宜培养基,30 d可增殖4.13倍;1/3 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.7 mg/L 2,4-D是诱导芽苗生根的适宜培养基,平均生根率为41.50%。【结论】建立的无患子离体培养体系为:外植体茎段用75%酒精浸泡1 min,再用0.2% HgCl2灭菌7 min,在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+20.0 g/L蔗糖培养基中诱导腋芽萌发,在MS+0.7 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT培养基中进行增殖培养,在1/3MS+0.5 mg/L 6-BA+0.7 mg/L 2,4-D培养基中进行生根培养。     

积雪草的组织培养与快速繁殖试验

以积雪草(Centella asiatica)的春芽作为外植体,以MS培养基为基本培养基,添加不同激素,分别组配成12种愈伤组织诱导培养基和丛芽增殖培养基进行组织培养,然后将诱导的积雪草丛芽切成单株后接入4种生根培养基,研究不同激素配比对愈伤组织的形成、丛芽的增殖及生根的影响.结果表明积雪草春芽在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.20 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L培养基上容易诱导愈伤组织,诱导率为86％.丛芽在MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+活性炭0.1 g/L培养基上的成活率为94％,增殖系数为5.9.以MS+6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭0.1 g/L为培养基较有利于生根培养.     

兰州百合快速繁殖研究

【目的】优化兰州百合组织培养体系,提高其植株再生率,建立高频植株再生体系。【方法】采用正交试验设计,以鳞片为外植体,以MS和1/2MS培养基为基本培养基, 附加不同浓度NAA（0.2~1.0 mg/L）、 6-BA（0.5～2.0 mg/L）、KT（0.1～1.0 mg/L）、IBA（0.2~1.0 mg/L）、IAA（0.2～1.0 mg/L）, 对兰州百合进行鳞茎诱导、增殖和生根培养,筛选最佳激素配比。【结果】6-BA浓度过低或过高均不利于小鳞茎形成,当1.0 mg/L 6-BA与0.2～1.0 mg/L NAA配比时,鳞茎诱导率和平均生成鳞茎数较高;随着NAA浓度的增加,平均生成鳞茎数不断增加,其中以1.0 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA组合的平均小鳞茎最多,为5.9个。与0.5～1.0 mg/L KT+0.2 NAA mg/L组合相比,添加0.5～1.5 mg/L 6-BA+0.5～1.0 mg/L KT或0.2 NAA mg/L组合的培养基更利于芽增殖,但其丛芽长势较弱,其中以添加0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基的丛芽长势和小鳞茎长势较好,平均分化鳞茎较多。在以MS、1/2MS为基本培养基、分别添加0.2～1.0 mg/L IAA或IBA的培养基中,随着IAA或IBA浓度的升高,鳞茎生根率不断降低,根质量不断下降,而平均根数和根长表现有所不同。从根的质量来看,MS培养基的根质量不如1/2MS培养基;而在1/2MS培养基中,1/2MS与IBA组合优于与IAA组合。【结论】鳞茎诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+NAA 0.5～1.0 mg/L,不定芽增殖的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L IBA,生根效果最好,生根率为100.0%,根中等长度、粗壮,质量最好。     

白玉蔗组织培养研究

[目的]以广西贵港市白玉蔗为材料,探讨影响白玉蔗离体培养的主要因素,建立其快速再生繁殖体系.[方法]以白玉蔗尾梢心叶为外植体,诱导愈伤组织并进行继代培养后,分别进行不同培养基和激素组合对白玉蔗愈伤组织芽分化培养、不定芽增殖和生根壮苗等影响试验.[结果]白玉蔗心叶切片供诱导愈伤组织是方便快捷的有效方法.心叶切片接人培养基(MS+2,4-D 3 mg/L,琼脂5g/L,糖30 g/L)30 d后,外植体迅速膨胀,边缘出现颗粒状、淡黄或黄色、质地均一的胚性愈伤组织或糊状的愈伤组织.诱导白玉蔗芽分化以培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA0.2 mg/L的效果最佳;培养不定芽增殖以MS+6-BA 3.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.6 mg/L+糖30.0 g/L培养基的效果最佳.PVP和活性炭对防止组培苗褐变的效果有差异,1%活性炭能有效抑制白玉蔗增殖培养基中丛生芽的褐化.在生根壮苗培养中,最优培养基为MS+ NAA 0.6 mg/L+糖50.0 g/L+活性炭0.1%.[结论]通过正交试验设计,建立了白玉蔗的再生繁殖体系,为加快白玉蔗繁殖速度、提高繁殖系数、节约种茎提供有效途径.