快速分离镜检松材线虫技术

总结了贝尔曼漏斗法分离镜检松材线虫实践经验,通过调高分离起始水温、室内气温和减少镜检液量、改变热杀死方式等措施,将常规分离镜检线虫时间从12h以上缩短到约6h.     

日本的抗松材线虫育种研究

经历20世纪六七十年代松树大面积枯死威胁之后,日本在不断探索对该病的防治方法的同时,寄希望于培育抗松材线虫的松树苗木。始于1973年的抗松材线虫育种,从松树造林材料的遗传改良、国内外松树对松材线虫的抗性、抗性检测方法以及抗性育种的可行性等方面进行了大量的研究。文中从抗松材线虫育种的历史背景、抗性判定方法、树种变异、选择育种、杂交育种等方面叙述了日本抗松材线虫育种的情况。     

松属树种对松材线虫的抗性

本文就国外开展的松属种类对松材线虫抗性的研究结果作一简介,以供我国的造林及培育抗性品种工作参考。     

松细枝+培养皿法分离镜检松材线虫试验

将松树上的1，2，3龄枯枝或萎枝条切成薄片，置培养皿分离线虫，镜检表明，枯萎松枝条上松材线虫检出率为52．4％，其中马尾松枝条检出率为75.0％，黑松枝条检出率为30．8％；1年生枝条检出率为37．5％，2年生枝条检出率为45．0％；针叶灰色样本检出率为33．3％，针叶枯黄样本检出率为57．1％。检出含有松材线虫的样本共重30．98g，共检出松材线虫39条，平均1．259条／g，其中马尾松样本平均1．093条／g，黑松样本平均1．508条／g。该法可用于松材线虫病的早期诊断和防治。     

松材线虫在罹病木中种群动态的初步研究

本文对松材线虫的种群动态特别是感病树枯死以后的种群动态进行了初步研究。枯死初期树干上部种群数量高于中、下部,枯死一段时间后树干下部种群数量高于中、上部;在同一部位内材线虫数量高于外材;化蛹期间89.3%—96.7%的线虫聚集在蛹室周围;羽化期间蛹室周围线虫的66.7%—84.2%被羽化出孔的松褐天牛成虫携带,携带率100%。     

广东省与江苏省松材线虫种群遗传结构差异分析

【目的】研究广东省和江苏省松材线虫的遗传变异,为我国松材线虫病的疫源追溯研究奠定基础,并为松材线虫病防控工作提供有力支持。【方法】使用Illumina全基因组重测序的方法,对所有松材线虫样本进行测序深度>40×的高通量测序。测序结果经过FastQC质量检测后,利用Cutaadpt软件去除接头序列。利用BWA软件将重测序结果与松材线虫基因组进行比对,使用Samtools和Picard将比对结果进行排序和去冗余,利用Freebayes进行SNP位点挖掘。而后使用VCFtools筛选统计松材线虫SNP位点信息以及突变基因型种类,并用SNPRelate构建所有虫株的系统发育树,最后进行焦磷酸测序验证。【结果】在广东省和江苏省疫木中共分离得到24株松材线虫,两省各12株。在所有松材线虫样本中共发现15 100 281个SNP位点,其中广东省虫株共发现12 990 503个SNP位点,江苏省虫株共发现2 109 778个SNP位点。对所有SNP位点统计分析后发现,广东省虫株的SNP数量和纯合子数量比江苏省虫株多,且差异性显著。此外,广东省大部分虫株出现频率最高的突变基因型为A→G、C→T、G...     

安徽省松材线虫抗性育种研究概述

1982年，中国首次发现松材线虫病危害，当时从南京市中山陵地区的枯死黑松(Pinus thunberugii)中分离到松材线虫。现在该病害已扩散到安徽、浙江等省，并且由原来的黑松转移危害马尾松(Pinus massoniana)，这种危害形势对中国有相同树种分布的南方各省，形成了极大的威胁。     

松材线虫致病性最佳接种量的研究

松材线虫是引起松树死亡的一种毁灭性病害的病原。为了研究松材线虫的致病性,该文对松材线虫的接种量进行研究,对3年生黑松苗接种松材线虫后的发病程度进行了等级划分以及发病等级的描述。3年生黑松苗,接种松材线虫LN001后,每株接种量为10000条时,发病率、感病指数、死亡率3个指标均达到最大值。接种松材线虫LN002后,每株接种量为8000条的松苗,在接种第47d时,感病指数达到100。3年生黑松苗接种松材线虫8000~10000条,为适合进行松材线虫接种试验的接种量。     

松材线虫与其伴生细菌在寄主内的种群动态

利用马尾松水培离体松枝作接种材料 ,分别接种消毒后的松材线虫、松材线虫伴生细菌坚强芽孢杆菌和松材线虫与坚强芽孢杆菌的混合液 ,以研究松材线虫与其伴生细菌在松枝中的种群动态。结果表明 :松材线虫和坚强芽孢杆菌混合接种 ,松枝发病 ,松枝髓部发生褐变 ,褐变的过程是由接种枝发展到主枝 ,再由主枝下部向上部发展 ,而单独接种松材线虫或坚强芽孢杆菌 ,松枝不发病 ;松材线虫和坚强芽孢杆菌混合接种较单独接种松材线虫 ,松枝中的松材线虫繁殖量大、扩散速度快 ;松材线虫在松枝中扩散的过程是 :接种枝→主枝→侧枝→新梢 ,在主枝中由下部向上部扩散 ;松枝髓部褐变过程和松材线虫在松枝中扩散过程相一致 ,松材线虫扩散分布先行于髓部褐变 ;松材线虫和坚强芽孢杆菌混合接种较单独接种松材线虫或坚强芽孢杆菌初期 ,松枝中致病细菌的检测量大 ,从而提出细菌和松材线虫均是松材线虫病不可缺少的致病因素。文后指出寄主主干下部髓部褐变可用作病害的早期诊断。     

松材线虫发病条件的研究概况

研究和综述了寄生松科植物的伞滑刃属(Bursaphelenchus)的线虫23种,松材线虫的寄主松科植物108种、携带昆虫40种及发病的环境条件。     

日本松材线虫病研究的最新动向

该文重点对近2a日本松材线虫病的研究文献进行整理分析。目前松材线虫病的研究仍是日本国森林病虫害的主要研究课题。在松树的抗（感）病机理、线虫在树体内的活动与增殖规律、线虫与天牛的关系、生物防治以及新技术在研究中的应用等方面取得较大进展。     

松材线虫入侵的黑松内栖真菌区系初步研究

松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus（Steiner ＆ Buhrer）Nickle）是毁灭性森林病害——松材线虫病的病原物,主要危害针叶树种,尤其是松属（Pinus spp．）树种。黑松（Pinus thunbergii Pad．）原产日本及朝鲜半岛东部沿海地区,因其耐海雾、抗海风、可在海滩上生长等特性,在我国辽宁、山东、河北、江苏、安徽、浙江、福建、湖北、广东等省大量栽植,总面积约159300hm^2。研究证明,黑松是松材线虫病的高度感病树种,一旦松材线虫入侵,后果是毁灭性的,将给森林造成严重的、不可挽回的损失。     

1.2%阿维菌素微囊悬浮剂防治松材线虫试验

松材线虫病是松树的一种流行性病害。此病1982年中国在南京市中山陵首次发现,在短短的30多年里,在我国南方很多省市相继发生并流行成灾。通过选用黑龙江省平山林业制药厂生产的1.2%阿维菌素微囊悬浮剂对松材线虫进行防治试验,结果表明:使用该药剂,最佳施药量为每cm胸径施药1.2mL,施药60d后,防治效果达91.67%。     

松材线虫扩散型四龄幼虫向成虫转型发育阶段研究

通过光学显微镜观察松材线虫Bursaphelenchus xylophilus扩散型四龄幼虫(DL4)转型的形态结构变化过程以及油红染色后脂肪的特征变化,分析了不同植物对于转型过程的影响。结果表明:松材线虫由扩散型四龄幼虫向成虫转型分为5个阶段,定义为DL4,转型前期(TP),转型中期(TM),转型后期(TA)和转型末期(TT)。DL4阶段,头部钝圆,无溢缩,尾部较尖,无性别特征;TP阶段,线虫呈现竖直状态,可见头部蜕皮,出现口溢缩,尾部膨大;TM阶段,蜕皮明显,线虫开始弯曲,出现不显著的性别特征;TA阶段,进一步完成蜕皮,成虫状态表现明显,雌虫出现阴门盖,雄虫出现交合刺;TT阶段完成蜕皮。DL4时期脂肪含量最高,占据线虫全部身体;而转型前期则脂肪含量迅速下降,仅有头、尾和体表内侧较高;转型中期、后期和末期脂肪含量较少,脂肪颗粒化明显。松科植物红豆杉Taxus chinensis、圆柏Sabina chinensis、侧柏Platycladus orientalis、雪松Cedrus atlantica、油松Pinus tabuliformis、黑松Pinus thunbergii和马尾松Pinus massoniana促进转型效果明显,以黑松和马尾松木块刺激下松材线虫转型效率最高,而非松科植物银杏Ginkgo biloba无转型促进效果。     

松材线虫对湖南林业和生态环境影响的风险性分析

遵循国际植物保护公约（IPPC）制定的有害生物分析准则，结合森林植物检疫对象的特点，从地理和管理标准、传入、定殖、定殖后扩散的可能性、潜在的经济和环境重要性在对松材线虫传入湖南进行了风险分析。证明松材线虫完全符合检疫性有害生物地理和管理标准，随松类植物及产品的调运从国内外疫区传入的可能性极大，在湖南完全能够定殖，定殖后能迅速扩散并暴发成灾，不仅对全省林业生产影响极大，而且严重威胁世界自然遗产武陵源风景区的安全,提出了3种降低风险的管理措施。     

Responses of water-stressedPinus thunbergii to inoculation with avirulent pine wood nematode (Bursaphelenchus xylophilus): Water relations and xylem histology

The effect of water-stress conditioning on water relations and histological features ofPinus thunbergii Parl. inoculated with avirulent isolate ofBursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, pine wood nematode, were investigated. Pines were kept under 8 days cycle of severe water stress. One-half of the water-stressed pines died as a result of infection by avirulent pine wood nematode and water stress tended to induce increased susceptibility and/or decreased resistance of pines to avirulent pine wood nematode. In dead pines, the water conducting function of xylem was lost, and all of the parenchyma cells died. In surviving pines, the xylem hydraulic conductivity and the xylem water content were significantly reduced (12 to 23% and 77 to 83%, respectively) compared to controls. Safranin dye perfusion of excised axis stem segments indicated that the water conductance was limited to the very narrow peripheral area of xylem. Embolism caused by cavitation in the tracheids occurred in the central part of xylem and in that dysfunctional region of the xylem the axial parenchyma cells surrounding the epithelial cells, and ray parenchyma cells partly degenerated but the epithelial cells survived. The disruption of tracheid shape observed in surviving pines indicates that avirulent pine wood nematode temporarily disturbed cell division of the cambium. Considering the differences in responses between dead pines and surviving pines after inoculation with avirulent pine wood nematode, the death of water-stressed pines apparently resulted from death of cells, in particular the vascular cambium and the loss of xylem hydraulic function by cavitation.     

松材线虫病媒介种类研究综述

本文介绍了传播松材线虫的媒介种类、媒介天牛传播松材线虫的过程、线虫传播与媒介昆虫种类的关系等,以期为快速确定松材线虫的媒介提供理论依据。     

Mutual influences in growth and reproduction between pine wood nematode Bursaphelenchus xylophilus and bacteria it carries

The interactions between pine wood nematode and three bacterium strains isolated from the nematode, Bursaphelenchus xylophilus, which are two strong pathogenic bacterium strains, Pseudomonas fluorescens GcM5-1A and Pseudomonas putida ZpB1-2A and a weak-pathogenic bacterium strain, Pantoea sp. ZM2C, were studied. The result showed that the strong-pathogenic GcM5-1A strain and ZpB1-2A strain significantly increased fecundity, reproduction rate, and the body volume of the adult nematode. Meanwhile, pine wood nematodes significantly promoted reproduction of the two strong-pathogenic bacterium strains. However, the weak-pathogenic bacterium strain, ZM2C, completely inhibited reproduction of pine wood nematodes. Aseptic pine wood nematodes significantly inhibited reproduction of the strain ZM2C. The results indicated that mutualistic symbiosis exists between pine wood nematodes and the two pathogenic bacteria it carries. The phenomenon showed that the pathogenic bacteria carried by the nematode were not accidentally contaminated, but rather had existed as symbionts of the nematode with which it had coevoluted over a long period. The role of mutualistic symbiosis in the process of pine wilt disease was also discussed. __________ Translated from Journal of Nanjing Forestry University, 2005, 29(3): 1–4 [译自: 南京林业大学学报, 2005, 29(3): 1–4]