基于响应面分析法的甲胺磷降解条件优化

[目的]提高假单胞菌MAP-3对甲胺磷的降解率。[方法]在基础培养基中加入800mg/L甲胺磷,接入假单胞菌MAP-3,采用Plackett-Burman试验设计对7个影响假单胞菌MAP-3降解甲胺磷的因素进行筛选,在此基础上采用Box-Behnken设计对影响甲胺磷降解的关键因素进行优化。[结果]pH值、温度和摇床转速是影响甲胺磷降解的关键因素。采用Box-Behnken设计对3个关键因素进行优化,得3个因素的最优水平为：pH值7.1,培养温度30.57℃,摇床转速164.9r/min,此条件下甲胺磷最大降解率预测值为78.1%。[结论]根据实际条件,优化后假单胞菌MAP-3对甲胺磷的最佳降解条件为：pH值7.1,培养温度30.60℃,摇床转速165.0r/min,接种量10%,250ml摇瓶装液量80ml,培养基中MnSO40.05%、FeSO40.06%。此条件下甲胺磷降解率达77.8%。     

降解六六六低温单菌的选育研究

[目的]为低温条件下应用微生物降解六六六提供技术资料。[方法]以从某农药厂筛选的抗农药菌株1号菌、2号菌、3号菌为供试菌种,以六六六为唯一碳源对其进行培养,筛选降解六六六的优势菌株;通过正交试验确定优势菌株对六六六降解的最佳pH值、接菌量和NH4Cl、KH2PO4、MgSO4添加量条件,并在最佳降解条件下对其进行驯化培养。[结果]2号菌对六六六4种异构体的降解率均高于其他菌株;六六六的最佳降解条件为：2号菌株为降解菌,接菌量8%,NH4Cl、KH2PO4、MgSO41.2、0.3、0.1 g/L,此条件下,六六六的降解率为45.23%;驯化30 d后,2号菌株对六六六的降解率由45.23%提高到54.68%。[结论]2号菌为降解六六六的最佳菌株,驯化培养可提高其对六六六的降解能力。     

农村生活污水高效降解菌的筛选·鉴定及工艺优化

[目的]筛选并优化能够降解农村生活污水中有机物的高效降解菌。[方法]利用普遍适用性培养基和选择性培养基进行菌株的分离筛选,以化学需氧量为评判指标进行复筛、鉴定及高效复合菌的初步构建,通过单因素及正交试验优化高效降解菌的发酵条件。[结果]从35株初筛菌株中复筛出5株有机物降解率在40%以上的菌株,最优发酵条件为:接种量0.3%、发酵时间5 d、复合菌的配比B_2(假单胞菌)∶N_1(棒状杆菌)为4∶1时,有机物降解率可达84.46%。[结论]该研究可为农村生活污水的治理提供参考。     

高效氨氮降解菌的筛选·鉴定及降解能力测定

[目的]研究微生物降解氨氮的能力,为解决城市生活污水氨氮污染现象提供参考。[方法]在以(NH4)2SO4为唯一氮源的培养基中,从生活污水处理污泥中分离、筛选氨氮降解菌株,并运用生物量测试其最适生长条件并进行鉴定,研究在最适条件下的降解能力。[结果]分离、筛选出1株高效氨氮降解菌株DX3,经形态学和生理特性鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas)。通过生物量测试得出菌株最适生长条件为30℃,摇床转速为110 r/min,pH值8.0,接种量1.0%。在最适生长条件下,DX3对氨氮降解能力显著,当初始氨氮浓度为45mg/L时,24 h降解率达98.73%。[结论]该微生物降解污水中氨氮能力显著,可用于生活污水中的氨氮治理。     

聚乙烯醇降解菌HK1菌株鉴定与降解特性

[目的]鉴定聚乙烯醇降解菌HK1并研究其降解特性。[方法]以一株能以聚乙烯醇为唯一碳源生长的细菌HK1为出发菌株,通过形态观察和生理生化试验对其进行鉴定,研究其对几种实验室常用抗生素的抗性,并通过摇瓶试验研究其降解特性。[结果]经鉴定,该菌确定为解淀粉芽孢杆菌属细菌,30℃、180 r/min摇床培养后,对培养基中PVA(1 g/L)的降解率达36.26%。HK1降解PVA的环境最优条件如下:温度为30℃,底物浓度为1 g/L,pH 8.0,酵母粉添加量为2 g/L。[结论]研究结果为系统研究该菌株提供了参考。     

一株降解木聚糖真菌的筛选及其发酵条件优化

[目的]从自然界中筛选出具有木聚糖酶活力的菌株,为今后降解农作物秸秆提供材料。[方法]以木聚糖为唯一碳源,从土壤中筛选能够降解木聚糖的菌株,并对其进行鉴定和发酵条件优化。[结果]从土壤中筛选出一株能够降解木聚糖的菌株,综合菌落、菌体形态特征和18S rRNA序列分析,初步鉴定该菌株为土曲霉(Aspergillus terreus thom.)GY-1。单因素试验研究表明,菌株GY-1最佳碳源为蔗糖,Mg2+能提高其木聚糖酶活力,最佳氮源为硝酸铵,最适温度为30℃,最适pH为6.0,该菌在培养52 h时木聚糖酶活力最高,为880.11 U/ml。L16(45)正交试验结果表明,GY-1的接种量以及培养基中蔗糖、Mg2+和硝酸铵的添加量对其木聚糖酶活力均有显著影响,GY-1菌株的最优发酵条件为:50 ml基础发酵培养基中,接种量2%,蔗糖1 g,硝酸铵0.03 g,Mg2+0.004 mol。[结论]该研究首次报道了土曲霉具有木聚糖酶活力,为研究土曲霉降解木聚糖提供了一定的试验依据。     

一株阿特拉津降解菌株L-1的鉴定和降解特性研究

[目的]鉴定1株阿特拉津(ATZ)降解菌株,并对其降解特性进行研究。[方法]通过对取自城市污水处理厂的污泥进行驯化培养,分离能够降解除草剂ATZ的菌株;通过16S rDNA基因序列分析及生理生化试验对菌株进行鉴定,并对其室内降解效果进行优化。[结果]试验分离到1株能降解ATZ的菌株L-1,该菌株与Arthrobacter菌株基因相似,同源性达99%以上,结合生理生化方法,确定该菌株为节杆菌(Arthrobacter sp.);L-1降解ATZ时培养基的最佳碳源为葡萄糖,最佳加入量为3 g/L。在此条件下,将L-1接种于阿特拉津无机盐培养基(ATZ浓度为500 mg/L)96 h后降解率达94.8%。[结论]该研究为进一步研究ATZ降解菌株及其在ATZ微污染水体生物修复中的应用奠定了基础。     

三唑磷降解菌的筛选及降解特性研究

[目的]为三唑磷的微生物降解提供参考。[方法]通过初筛和复筛试验,从某农药厂污水中分离得到1株降解三唑磷的菌株TF413,用Biolog微生物自动分析系统对该菌株进行鉴定,并研究培养基组成、初始pH值、培养温度、装液量、接种量等对菌株降解三唑磷特性的影响。[结果]经鉴定,TF413菌株为粪产碱杆菌（Alcaligeizes faecalis）,其降解三唑磷的最适温度为32℃、最适初始pH值为7．0,最适装液量为100ml三角瓶中装50m1培养基,最佳培养基为营养肉汤,接种量对TF413降解三唑磷的效果无明显影响。[结论]TF413以共代谢的方式降解三唑磷,培养72h对三唑磷的降解率为70．83％。     

苯胺降解菌的分离及降解特性研究

[目的]筛选高效苯胺降解菌并研究其降解特性。[方法]通过驯化富集培养,从河南某化工厂活性污泥中分离出1株以苯胺为唯一碳、氮源的高效苯胺降解菌DA-K,并对该菌株进行了生理生化鉴定和生物学降解特性研究。[结果]DA-K菌株呈革兰氏阴性,细胞为杆状,菌落颜色呈灰白色,初步确定为不动细菌属。通过测定,DA-K菌株生长的最适pH为6.0,最适温度为30℃,可在苯胺质量浓度为2 500 mg/L的无机盐培养基上生长良好。DA-K菌株在苯胺浓度为1 000 mg/L,pH 6.0,30℃,180 r/min的条件下振荡培养96 h,苯胺降解率接近80%。[结论]DA-K菌株苯胺降解效率较高,具有实际处理苯胺废水的能力,为构建基因工程菌奠定了基础。     

柠条木质素降解菌的筛选及其降解条件优化

[目的]将柠条转化为可被牲畜高效利用的优良饲料。[方法]采用柠条作为单一碳源的筛选培养基、苯胺蓝筛选培养基从牲畜粪便以及柠条腐质中分离筛选出对柠条木质素具有降解作用的菌株D-11。[结果]经微生物形态学和16S rDNA鉴定,D-11为地衣芽孢杆菌,同时对D-11降解条件进行优化。菌株D-11的最佳降解条件如下:最佳氮源为蛋白胨;温度为28～32℃;pH为7;添加诱导剂Mn~(2+)的浓度为0.6 mmol/L。在最优条件下,菌株D-11对柠条木质素降解率为18.21%,半纤维素的降解率为16.11%,纤维素的降解率为13.19%。[结论]采用菌株D-11对柠条进行发酵降解,使其转化为可被牲畜利用的优良饲料。     

腺嘌呤和GA3对满天星组培苗生长的影响

[目的]探讨满天星组培苗生长适宜的GA3浓度和腺嘌呤浓度.[方法]采用云南省农业科学院花卉研究所组培中心继代培养2代的满天星品种‘小仙女’组培苗为材料,切取1 cm左右的带芽茎段为外植体,在MS＋ BA 0.3 mg/L＋ NAA 0.1 mg/L培养基中分别加入0.3、0.5、1.0、1.5、2.Omg/L的腺嘌呤和赤霉素（GA3）进行研究.[结果]腺嘌呤、GA3具有促进满天星组培苗生长的作用,腺嘌呤适宜的使用浓度为1.5 mg/L; GA3适宜的使用浓度为1.0 mg/L.在同等条件下,腺嘌呤对满天星组培苗生长的促进作用比GA3效果好.[结论]为今后大力发展满天星组培苗奠定基础.     

菜心花粉萌发研究初报

[目的]为菜心的通过雄性不育系的遗传育种提供参考。[方法]以种植于花钵中的菜心为材料,采用TTC法测定其花粉活力;同时将花粉分别在3种培养基上培养,3种培养基即A1:15.00%蔗糖+0.01%硼酸+0.001%GA3,A2:15.00%蔗糖+0.40 mmol/L CaCl2+0.40 mmol/LH3BO3+1.00%琼脂,A3:5.00 mmol/LMES+1.00 mmol/L KCl+10.00 mmol/L CaCl2+0.80 mmol/LMgSO4+1.50 mmol/L硼酸+1.00%琼脂+16.60%蔗糖+3.65%山梨醇+10.00μg/ml肌醇,比较培养6 h和12 h后的花粉萌发率和花粉管长度。[结果]试验表明,菜心花粉活力很高,具有活力的花粉比例平均达98.18%;A1培养基培养效果最好,A2次之,A3最差;培养12 h的花粉萌发率高于培养6 h的,但培养12 h的花粉管长度却小于培养6 h后的。[结论]综合分析认为,菜心花粉在A1培养基即15.00%蔗糖+0.01%硼酸+0.001%GA3上培养6 h萌发效果最好。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌的发酵条件优化

[目的]优化耐酸性α-淀粉酶产生菌的发酵条件。[方法]在筛选出的耐酸性α-淀粉酶产生菌的基础上,对其培养基C、N含量、接种龄、接种量、初始pH值、摇瓶转速及温度等发酵条件进行优化。[结果]耐酸性α-淀粉酶产生菌最佳发酵条件为接种龄14 h,接种量8%,初始pH值5.5,发酵温度35℃,转速150 r/min,接种菌液量25 ml,培养基中C、N的含量分别为1.0%。[结论]在优化条件下,酶活力达到31.4 U/ml,比未优化时提高了65.3%。     

草甘膦降解菌A-F02的分离·鉴定及降解特性研究

[目的]筛选高效草甘膦降解菌株,并研究其降解特性。[方法]从草甘膦生产厂的曝气池活性污泥中分离到1株高效草甘膦降解真菌A-F02,并根据菌株形态特征和核糖体内源转录间隔区（ITS）全序列分析进行菌株鉴定。同时研究菌株对草甘膦的降解特性和影响因素。[结果]经鉴定,菌株A-F02为米曲霉属。在基础盐培养基中,以草甘膦（1000mg/L）为唯一碳源,30℃、150r/min培养7d,草甘膦降解率为86.82%。通过研究添加葡萄糖量、初始pH值、温度及草甘膦浓度对米曲霉A-F02降解能力和生物量的影响结果表明,在添加葡萄糖浓度0.5%,初始pH值7.5,温度30℃,草甘膦浓度1500mg/L的条件下,菌株A-F02的生长量最大,草甘膦的降解效果最佳。[结论]该研究可为草甘膦降解酶的分离纯化提供试验基础。     

药用真菌树舌液体深层培养研究

[目的]研究不同碳源、氮源和无机盐对树舌液体深层培养的影响。[方法]以树舌菌丝体的生物量为指标,采用单因子试验和正交试验对培养基进行优化。[结果]最适培养基为可溶性淀粉3%、黄豆粉1.5%、酵母膏0.3%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸锌0.002%、硫酸镁0.10%,在28℃、140 r/m in的恒温培养振荡器上振荡培养6 d,生物量可16.29 g/L。[结论]试验得出树舌发酵培养基的最佳配方,在此条件下,生物量大大提高,有利于大规模工业化生产。     

水果型番木瓜组织培养的研究

[目的]研究水果型番木瓜的组织培养。[方法]以经预处理的种子为试材,通过MS基本培养基附加不同浓度的6-BA和IBA,对水果型番木瓜组培快繁技术进行了研究。[结果]无菌条件下用75%酒精均匀擦拭水果型番木瓜果皮表面,取出种子,用无菌水冲洗3次是较好的灭菌方法,种子污染率仅为2.52%;水果型番木瓜种子经1000mg/LGA3＋1mg/L6-BA（等体积混合）浸泡18h后接种于MS培养基中培养,种子发芽率、胚芽长度、胚根长度和苗高达到较高值,分别为68.42%、2.25cm、0.80cm和1.52cm,幼苗整体生长较好;继代增殖培养基为MS＋0.5mg/L6-BA＋0.1mg/LIBA时增殖系数最高（7.92）,幼苗长势较好;组培苗玻璃化随着光照强度的增强而呈减弱趋势,3000lx处理下玻璃化苗比率最低（3.21%）。[结论]该研究为水果型番木瓜的组培快繁研究提供了参考。     

产纤维素酶辅助蛋白菌种筛选及蛋白增效作用条件研究

[目的]筛选产纤维素酶辅助蛋白的菌种,测定该辅助蛋白作用条件。[方法]从纤维素降解菌的生存环境中,寻找到产纤维素酶辅助蛋白的菌株,通过Sephadex-G75分子筛层析对产纤维素酶辅助蛋白菌株胞外培养液进行蛋白分离纯化,分析辅助蛋白的增效作用,并进一步探讨其增效作用适宜的温度及pH条件。[结果]从纤维素降解菌的生长环境中分离得到80余株菌株,经液体培养、胞外蛋白检测筛选出3株产纤维素酶辅助蛋白的菌株,分别命名为BAP1、BAP2、BAP3。经Sephadex-G75分子筛层析纯化,获得了最大增效率分别为35%,27%及47%的辅助蛋白。测定其中辅助增效作用最明显的BAP3峰2蛋白增效作用条件为温度40～60℃、pH 4.0～6.0。[结论]该研究为通过菌体诱变和培养条件优化等手段获得高效纤维素酶辅助蛋白提供了较好的原始菌株资源。     

一株产抗灰霉病菌株的发酵优化研究

[目的]对枯草芽孢杆菌a1发酵条件进行初步优化。[方法]以顺丁烯二酸酐为基础碳源,采用生长速率法测定发酵液对番茄灰霉菌的抑制率。[结果]该菌株较佳发酵条件为：酵母膏1%,含1%顺丁烯二酸酐的PDB培养基培养,温度30℃,接种量1%,装液量50 ml/500 ml,初始pH值5.5,摇床转速150 r/min,发酵时间120 h。[结论]为开发新型微生物源农药奠定基础。