苜蓿愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以改良SH为基本培养基,研究了不同激素配比和不同外植体对苜蓿愈伤组织诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织的最佳外植体是下胚轴、最佳培养基为SH+2,4-D 2mg/L+KT 0.2mg/L;继代增殖后对愈伤组织进行分化再生培养,研究了附加不同浓度外源激素的MS和改良SH培养基对愈伤组织分化的影响,确定最佳分化培养基为改良SH+NAA0.1mg/L+KT 0.5mg/L。     

6个紫花苜蓿栽培品种高效再生体系的建立

建立高频的紫花苜蓿再生体系,为采用基因工程技术定向改良紫花苜蓿品种奠定基础。以中国6个紫花苜蓿栽培品种的子叶、下胚轴、叶片为外植体,研究不同外源激素、基因型对紫花苜蓿胚性愈伤组织诱导培养及再生的影响。结果表明:新疆大叶苜蓿品种叶片胚性愈伤组织诱导率、分化率及出苗率最佳,分别为95.0%、72.7%和40.0%。最佳诱导培养基为改良SH培养基+2.0mg.L-1 2,4-D+0.25mg.L-1 KT;最佳分化培养基及出苗培养基为MS。此外,还确定生根培养基中以茎段基部蘸取100mg.L-1 IBA以及添加7.5g.L-1蔗糖可提高生根率。     

紫花苜蓿NFF2高效组织培养再生体系的建立

生物技术是紫花苜蓿等牧草产量和品质遗传改良的重要途径之—.高效、稳定的再生体系是苜蓿基因工程技术利用的关键,而紫花苜蓿的再生受基因型和环境条件等影响很大,苜蓿不能稳定的高频再生始终是苜蓿基因工程跨越发展的瓶颈.本试验以易于被农杆菌转染的紫花苜蓿品种NFF2无菌苗的叶柄为外植体,研究了不同激素种类和配比等不同培养条件对其愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基对愈伤组织分化的影响,以期建立一套紫花苜蓿NFF2的高频、稳定的再生体系.结果表明:以叶柄为外植体,最佳愈伤组织诱导培养基为改良SH (SH2K)+1.0mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT;最佳愈伤组织继代培养基为BOi2Y;最佳愈伤组织分化培养基为MSO;成苗培养基可以用1/2MS.     

紫花苜蓿子叶的高频离体再生体系的建立与优化

以东北地区农艺性状优良的不同品种紫花苜蓿的子叶为材料,研究了不同培养基和不同配比对紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,最佳胚型愈伤组织诱导培养基为MS+2 mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT;最佳分化培养基为UM+1.2 mg/L KT;不同基因型在愈伤诱导率上差异显著,其中公农5号表现最佳。紫花苜蓿的高频再生体系的建立,为下一步紫花苜蓿的遗传转化工作打下了坚实的基础。     

紫花苜蓿下胚轴再生条件的优化

[目的]优化紫花苜蓿下胚轴的再生条件。[方法]选用不同的培养基和激素,对公农1号、公农2号、美国苜蓿王、草原1号4个苜蓿品种的下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化。[结果]经筛选,获得了诱导愈伤组织的基本培养基为改良SH＋MS有机＋MS微量及铁盐＋2,4-D2．0mg/L＋KT0．05mg／L＋蔗糖30g／L,诱导再生植株分化的培养基为MS＋NAA1．0mg／L＋KT0．1mg／L＋水解酪蛋白25mg／L＋蔗糖20g／L。[结论]得到公农1号、公农2号、草原1号3个易于诱导和分化的基因型。     

苜蓿愈伤组织细胞学观察及芽分化的研究

以龙牧801苜蓿叶片诱导产生的愈伤组织为材料,将其接种在诱导和胚性发生培养基上,采用形态学、涂片法和石蜡切片法对愈伤组织的形态和内部细胞结构进行观察。此外,研究了NAA和KT对愈伤组织芽分化的影响。结果表明:胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织在形态和细胞学特性方面均存在明显差异,苜蓿愈伤组织芽分化最佳激素配比为0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L KT,研究结果将为苜蓿组培快繁奠定理论基础。     

甘农2号杂花苜蓿愈伤组织诱导及体细胞胚和芽分化的研究

以甘农2号杂花苜蓿下胚轴为材料,MS为基本培养基,研究了不同浓度的2,4-D、NAA、KT、BA、蔗糖及2,4-D作用时间对甘农2号杂花苜蓿愈伤组织的诱导、体细胞胚和芽分化的影响.结果表明,3 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L NAA为愈伤组织诱导阶段最佳激素组合;2,4-D作用时间以15 d为宜;最佳的芽分化培养基为MS+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L NAA+7 g/L琼脂+20 g/L蔗糖.     

紫花苜蓿下胚轴高频离体再生体系的建立

【目的】以北极星、阿尔刚金、皇后2000及国产紫花苜蓿4个苜蓿品种下胚轴为外植体,建立其稳定、高效的离体培养再生体系,为基因转化改良苜蓿性状奠定基础。【方法】研究了种子预处理方法、培养基、基因型以及蔗糖质量浓度对苜蓿下胚轴分化特性的影响。【结果】低温4℃预处理有利于提高苜蓿下胚轴愈伤组织的出愈率和绿苗分化率;其最佳诱导激素组合为"MS+1.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖"和"MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖";愈伤组织分化的最佳培养基为"MS+0.3 mg/L6-BA+3.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA+5.5 g/L琼脂+50 g/L蔗糖";最佳蔗糖质量浓度为50 g/L;4个紫花苜蓿品种愈伤组织诱导率的差异不大,但分化特性有较大差异,分化率由高到低依次为北极星、阿尔刚金、皇后2000和国产紫花。【结论】不同的种子预处理方法对4种紫花苜蓿品种的分化率均有一定影响,3种处理中以4℃下浸泡2 h处理的分化率最高,与其他处理间的差异达显著水平(P<0.05)。不同激素组合是影响紫花苜蓿下胚轴愈伤组织诱导率和分化率的主要原因,不同激素组合处理间的差异均达到显著水平(P<0.05),2,4-D与6-BA配合对紫花苜蓿下胚轴愈伤组织的诱导效果较好,分化培养基中高质量浓度的NAA,不利于愈伤组织的分化;不同基因型对分化率有显著影响(P<0.05),而不同蔗糖质量浓度对分化率的影响不显著(P>0.05)。说明其对离体培养再生体系的影响作用与处理方法、培养基、基因型相比是次要的。     

直播稻金粳818成熟胚遗传转化体系的建立

[目的]建立高效的金粳818成熟胚遗传转化体系。[方法]以直播稻品种金粳818成熟胚为外植体,设计4种诱导培养基,筛选适合金粳818的诱导条件;设计5种分化培养基,筛选适合金粳818的分化条件;获得的愈伤组织用农杆菌介导法进行转基因再生。[结果]最佳诱导培养基为4.10 g/L NB+2 mg/L 2,4-D,诱导率为89.3%;最佳分化培养基为MS+5.0 mg/L KT+0.5 mg/L NAA,分化率为81.1%,成苗率为52.1%;经PCR分子检测,再生幼苗100%为转基因阳性植株。[结论]该研究建立了金粳818成熟胚遗传转化体系,为品种定向改良奠定了技术基础。     

三个苜蓿品种植株高频再生体系的研究

以适宜于西北地区生长的‘甘农1号’杂花苜蓿、‘甘农3号’紫花苜蓿,‘新疆和田大叶’紫花苜蓿3个品种的不同部位外植体为供试材料,进行了植株体外再生的研究.结果表明,苜蓿基因型、外植体来源、外源激素种类及浓度、激素处理时间、培养基蔗糖浓度等因素均影响细胞的生长发育和植株再生.‘甘农1号’苜蓿下胚轴愈伤组织诱导率和体细胞胚形成率最高,可达97.2%和70.9%,‘新疆和田大叶’苜蓿下胚轴次之,‘甘农3号’出愈率和体细胞胚形成率均最低;苜蓿愈伤组织诱导以2.0mg/L 2,4-D单独处理或2.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT组合处理为最佳,在此激素组合处理下,下胚轴愈伤组织诱导率最高可达97.2%,激素处理时间以20d为宜;体细胞胚的发育则以2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA的激素组合处理为宜,在此激素组合处理下,体细胞胚形成率最高可达70.9%.适宜的生根培养基为1/2MS+1.0mg/L IBA+1%蔗糖+0.7%琼脂.体细胞胚形成阶段培养基添加25~30g/L的蔗糖有利于愈伤组织分化.     

3个烟草品种愈伤组织诱导的比较

[目的]研究不同品种烟草在不同培养基上愈伤组织的诱导情况。[方法]以烟草HY-9-7、云烟97和K326的幼嫩叶片为材料,分别在MS＋2,4-D 2.0 mg/L＋KT 0.2 mg/L和MS＋NAA 2.0 mg/L＋6-BA 2.0 mg/L培养基上诱导愈伤组织,选出愈伤组织诱导率最高的烟草品种和最优培养基。[结果]MS＋2,4-D 2.0 mg/L＋KT 0.2 mg/L是诱导烟草愈伤组织的理想培养基;K326在最优培养基上诱导率最高,愈伤组织生长状态最好。[结论]为烟草基因工程的研究和种质资源的创新提供理论支撑。     

苜蓿植株再生和农杆菌遗传转化条件的研究

[目的]建立苜蓿植株再生体系和农杆菌遗传转化体系。[方法]以"猎人河"苜蓿品种为受体材料,对影响苜蓿植株再生和遗传转化的相关因素进行了研究。[结果]最佳愈伤诱导培养基为改良SH+4.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA,最佳继代培养基为MSO+0.5mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L AgNO3,而最佳分化培养基为MS,苜蓿植株再生的最佳外植体是下胚轴。苜蓿农杆菌遗传转化的选择压确定为60 mg/L卡那霉素(Kan),最适宜的抗菌素为350 mg/L羧苄青霉素(Carb),农杆菌菌液的最适OD600为0.6,最佳侵染时间为10 min。[结论]该研究为今后苜蓿的基因工程研究奠定了基础。     

不同激素配比对大豆子叶愈伤组织诱导的影响

[目的]研究不同激素配比对大豆子叶形成愈伤组织的影响。[方法]以高蛋白大豆东农42号子叶为供试外植体,以6-BA2.0mg/L＋NAA0.2 mg/L和2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L的激素对其进行诱导,研究不同激素对大豆子叶愈伤组织的诱导效果。[结果]以添加6-BA2.0 mg/L＋NAA0.2 mg/L培养基培养的材料诱导率为71.4%;以添加2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L培养基培养的材料诱导率为78.6%,诱导产生的愈伤组织大部分呈绿色、质密;未添加激素组诱导率为85.7%,但无生长迹象。所加激素均能诱导大豆子叶形成愈伤组织,但不同激素种类诱导愈伤组织能力有差异,以添加2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L的效果最好。[结论]不同种类的外源激素对外植体的诱导作用不同,大豆子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L。     

宁夏玉米高效再生体系的建立及其影响因素

以4个宁夏玉米品种幼胚为材料,采用组织培养法,研究培养基类型、基因型、外源激素、头孢霉素(Cef)对玉米幼胚培养及再生的影响。结果表明,在愈伤组织诱导过程中,Ⅰ号和Ⅱ号培养基诱导率较高,宁玉12号和宁0816的胚性愈伤组织诱导率相对较高,达到85.3%和82.1%;6-BA对不同基因型愈伤组织分化率的影响不同,添加6-BA对愈伤组织的分化均有促进作用;此外,当Cef质量浓度高于500 mg/L时,愈伤组织分化明显受到抑制。最佳诱导培养基为基本元素N6+水解酪蛋白200 mg/L+脯氨酸690 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+肌醇100 mg/L+AgNO310 mg/L,最佳分化培养基为基本培养基N6+6-BA1.0 mg/L+蔗糖50 g/L。     

洋葱胚性愈伤组织的诱导及增殖条件的研究

[目的]探讨洋葱离体培养的最佳条件,为建立其高频再生体系及转基因研究奠定技术基础。[方法]以洋葱(Allium cepa L.)种子为外植体,对洋葱愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织获得及增殖的培养条件进行了初步研究。[结果]不同培养基种类对愈伤组织的诱导有影响,BDS优于MS和B5培养基;当培养基中24,-D浓度为0.5 mg/L时种子出愈率最高;适当降低生长素浓度,添加分裂素BA能够促进胚性愈伤组织的发生,且无分化现象产生,胚性愈伤组织诱导最佳培养基为BDS+24,-D 0.25 mg/L+BA 2.0 mg/L,增殖最佳培养基为BDS+24,-D 0.25 mg/L+BA 1.0 mg/L。[结论]该试验建立的基因转化受体系统为洋葱基因转化奠定了良好基础。     

甘蓝型油菜花药培养技术研究

[目的]筛选甘蓝型油菜愈伤组织的最佳分化培养基,探讨甘蓝型油菜花药培养技术。[方法]在油菜始花期,取其主茎顶端蕾盘的中圈花蕾,将花药接种于B5+2,4 D 1.0mg/L+KT 1.5mg/L的培养基进行诱导,将诱导出的愈伤组织接种于不同配方的12种培养基进行分化培养。[结果]甘蓝型油菜花药培养取花粉处于单核后期至双核初期,对应于外部特征是蕾盘中圈10～15个花蕾,所产生的愈伤组织百分率最高(16%);12种不同配方的培养基中以B5+KT 2.0mg/L+BA 2.0mg/L+IAA 0.1mg/L或MS+KT 2.0mg/L+BA 2.0mg/L+IAA 0.1mg/L培养基上分化成苗最好,分化率分别为75%和70%,将分化的小苗置于1/2MS培养基上诱导生根,可长成完整幼苗。[结论]花药培养可以加速油菜育种进程。     

灯盏花组培快繁与植株再生

[目的]建立较为系统的灯盏花组培体系,培育、壮大和发展灯盏花这一独具特色和优势的产业。[方法]以灯盏花（Erigeron breviscapus）的叶片为外植体,用不同浓度的激素6-BA、2,4-D、KT和NAA对其进行愈伤组织的诱导和再生植株的研究。[结果]诱导愈伤组织最佳的培养基是MS＋KT0．5mg／L＋2,4-D10mg／L和MS＋2,4-D0．5mg／L＋6-BA0．5mg／L,诱导率为100％;二者相比,前者长出的愈伤组织较为紧密,而后者松散性好;MS＋6-BA0．5mg／L＋10％香蕉汁是诱导芽最佳的培养基,达87％;加入0．3mg／L NAA的1／2MS培养基对生根最有利,生根率达83％。[结论]生长素与细胞分裂素的合理配比有利于快速构建灯盏花培养体系。     

黄芩愈伤组织培养与快速繁殖条件的优化研究

[目的]培养黄芩优良品种并进行克隆化快速繁育。[方法]用黄芩(Scutellaria baicalensisGeorgi)无菌根作为外植体进行愈伤组织的诱导、分化,黄芩试管苗的继代扩大繁殖、生根等一系列优化试验。[结果]MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基进行愈伤组织的分化培养效果最好;MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA进行试管苗的复壮效果较好;最有效的生根培养基为1/2 MS+0.3mg/L NAA,生根率可达96.7%。[结论]采用单节培养的方法,可以大幅度提高黄芩繁殖速度。     

激素、培养基、添加物对苜蓿子叶再生体系建立影响

.00 mg/L AgNO3,可使新疆大叶杂花苜蓿的分化率从41.1; 增加到63.3;.