乳铁蛋白调节肠道菌群功能研究

试验旨在研究给小鼠饲喂不同倍数人体推荐量的人乳铁蛋白(hLF)和牛乳铁蛋白(bLF),评价其对肠道菌群的调节功能。将120只小鼠随机分为12组,每组10只,分别饲喂不同剂量(0、5、10、30倍人体推荐量)的hLF、bLF和酪蛋白(对照组)。试验前和饲喂14 d后,无菌收集粪便,检测小鼠体重和肠道菌群变化。结果表明:(1)5、10、30倍剂量的hLF和bLF对小鼠体重增长无显著性影响;(2)10、30倍剂量的hLF和bLF显著增加了肠道双歧杆菌的数量(P0.05),30倍剂量的hLF和bLF显著增加了肠道乳杆菌的数量(P0.05);(3)同等剂量水平的hLF和bLF对双歧杆菌和乳杆菌的促进作用无显著性差异。试验结果显示,饲喂hLF和bLF均能促进动物肠道有益菌的增长,且两者间具有相同的促进功效。     

乳铁蛋白在动物防御系统中的作用

<正>乳铁蛋白(LF)最初在牛乳中发现,后来发现这种蛋白质也广泛地存在于猪、鼠、人及其它哺乳动物的唾液、泪液、支气管粘液、胆汁、胰液等外分泌液以及嗜中性粒细胞次级颗粒和血浆中。正常生理条件下LF在血浆中含量很低,而富含于各种外分泌液和嗜中性粒细胞的次级颗粒中。     

人乳中乳铁蛋白ELISA检测方法的研究

建立了一种ELISA检测人乳铁蛋白的方法.主要摸索了ELISA的工作条件,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度和一抗稀释浓度,进而确定了二抗工作浓度,一抗以200 000倍稀释,二抗以100 000倍稀释,工作条件限制范围为1.56～100 ng/mL,用指数曲线拟合计算,所得回归方程为=1.2770×(1.0415-e-0.0388x)(R2=0.9992).通过重复性试验和交叉性试验验证了该法的重现性和特异性.本研究为研制人乳铁蛋白检测试剂盒奠定了基础.     

乳铁蛋白的研究进展

乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)1960年首先由Groves从牛乳中分离获得,因与铁结合而呈红色,故称之为“红蛋白”。在发现之初,LF被认为是一种与铁的转运和存储有关的蛋白质,所以又称乳转铁蛋白。进一步研究表明,LF是一种分子量为70-80kD的糖蛋白,广泛存在于乳汁、唾液、泪液等外     

牛乳铁蛋白稳定性的研究

探讨牛乳铁蛋白在不同温度下的热稳定性，并研究其蛋白酶解稳定性性质。使牛乳铁蛋白在不同温度下处理一定时间，然后通过SDS—PAGE法检测其降解情况，并模拟胃液环境研究不同浓度胃蛋白酶对牛乳铁蛋白酶解的变化，根据电泳结果的灰度扫描计算不同时间消化后牛乳铁蛋白的残存率。结果表明，牛乳铁蛋白在一定时间内提高温度不会发生明显的降解，不同浓度的胃蛋白酶对牛乳铁蛋白的消化作用不同，牛乳铁蛋白对1μg／mL胃蛋白酶的抵抗能力最强，但是在被消化120min后牛乳铁蛋白残存率下降到1％左右。     

免疫牛乳中乳铁蛋白的水平研究

应用ELISA法测定免疫牛乳中乳铁蛋白的水平,探讨除特异性抗体外,免疫乳治疗和预防感染性疾病的机制。结果表明,与非免疫牛比较,免疫牛的初乳中乳铁蛋白含量明显增高(P<0.05),提示特异性疫苗的接种对宿主合成乳铁蛋白等抗感染物质有促进作用。     

乳及乳制品中牛乳铁蛋白含量测定方法比较研究

目的 探讨两种不同检测方法测定乳与乳制品中牛乳铁蛋白的含量及应用研究。方法 对比高效液相色谱（HPLC）法和超高效液相色谱串联质谱（UPLC- MS/MS）法测定生鲜乳、调制乳、超高温瞬时灭菌乳、含乳饮料和奶粉样品等乳及乳制品中牛乳铁蛋白的含量,并对测定结果进一步比较和分析原因。结果 两种测定方法均具有较高回收率和较优的重现性,但两者方法对实际样品的测定结果具有一定差异性。结论 HPLC法测定牛乳铁蛋白是通过肝素亲和柱纯化富集乳铁蛋白,测定的是非热变性牛乳铁蛋白的含量;而UPLC-MS/MS法测定的是热变性和非热变性牛乳铁蛋白的含量,不受热处理加工工艺的影响。实验室可针对不同检测目的选择不同方法进行定量研究。     

牛乳铁蛋白稳定性的研究

通过对牛乳铁蛋白在不同温度下处理一定的时间,研究牛乳铁蛋白热的稳定性,并模拟胃液环境研究不同胃蛋白酶浓度下,牛乳铁蛋白对胃蛋白酶消化的抵抗作用,研究其蛋白酶解稳定性。结果表明,牛乳铁蛋白在一定时间内,提高温度不会发生明显的降解,不同浓度的胃蛋白酶对牛乳铁蛋白的消化作用不同,牛乳铁蛋白对1μg／mL胃蛋白酶的抵抗能力最强。     

牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的合成及真核表达载体的构建

根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamH I和Xho I位点粘性末端的双链DNA.真核表达载体pcDNA3.1(+)经Bam H I和Xho I限制性内切酶双酶切处理后与合成的LfcinB基因进行连接,连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒DNA进行测序.测序结果显示,牛乳铁蛋白肽LfcinB基因成功克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,为进一步表达和抗菌活性研究奠定物质基础.     

双峰驼乳中乳铁蛋白的体外抗菌活性及影响因素

采用试管二倍稀释法测定了双峰乳中驼乳铁蛋白(CLF)的抗菌活性.结果表明,CLF对大肠埃希菌的最小抑菌浓度(MIC)为3 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为2 mg/mL,与溶菌酶联合应用,则能明显增强其抗菌作用.CLF的抗菌活性还与其铁饱和度密切相关,随着铁饱和度的增加其抗菌活性明显下降.葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、尿素和硫酸铵在0 mg/mL～10 mg/mL的质量浓度范围内,对CLF的抗菌活性影响不大.而NaCl或KCl的浓度为25 mmol/L～100 mmol/L,MgCl2或CaCl2的浓度为1.0 mmol/L～5.0 mmol/L时,CLF的抗菌活性则会明显降低.经较低温度加热处理后CLF能很好的保持其活性;而经较高温度加热处理会使CLF变性并失去抗菌活性.不同pH条件下的抗菌试验结果表明,当pH在7.5～8.0时CLF的抑菌效果最好.     

乳铁蛋白及其活性多肽的研究进展

从动植物的天然产品中寻找耐热活性因子,是饲料科学的一个新的研究方向。家畜乳中含有多种具抗菌作用的蛋白质分子,对母畜的自身免疫及维持初生仔畜的胃肠道的健康起重要作用。乳铁蛋白(1actoferrin,简写为LF)是Groves于1960首先从牛乳中分离获得,由于LF与铁结合形成红色的复合物,故始称为红蛋白。1961年Blanc和Isliker将他们从人乳中分离出来的此种蛋白正式命名为乳铁蛋白。另有学者据乳铁蛋白转运铁的功能将其称     

乳铁蛋白及乳铁蛋白肽的基因工程研究进展

近年来,随着对乳铁蛋白和乳铁蛋白肽作用机制和空间结构的研究趋于成熟,国内外研究者逐渐将研究重点倾向于乳铁蛋白和乳铁蛋白肽的开发应用.主要介绍了乳铁蛋白和乳铁蛋白肽基因工程的研究进展,尤其是对原核表达系统和真核表达系统进行了综述.     

牛乳铁蛋白ELISA检测方法的研究

本文建立了一种ELISA检测牛乳铁蛋白的方法。主要摸索了ELISA的工作条件,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度和一抗稀释浓度,进而确定了二抗工作浓度,通过重复性试验和交叉性试验验证了该法的重现性和特异性。结果表明一抗工作浓度为1∶200000稀释,二抗工作浓度为1∶100000稀释,在此条件下检测牛乳铁蛋白的限度为1.56～100ng/mL,在此范围内,牛乳铁蛋白浓度与OD值之间呈指数相关,其回归方程为y=1.2770×(1.0145-e-0.0338x)(R2=0.9992)。本研究为研制牛乳铁蛋白检测试剂盒奠定了基础。     

牛乳铁蛋白的研究与应用

乳铁蛋白广泛分布于哺乳动物具有分泌功能的组织及其分泌液中,其生物学功能广泛。本文通过介绍牛乳铁蛋白的结构、功能及其在生产、生活中的应用,分析讨论了其应用前景和利用基因工程技术方法生产的优势,以期为牛乳铁蛋白相关的理论研究和生产应用提供参考。     

牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的合成及真核表达载体的构建

根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamH I和Xho I位点粘性末端的双链DNA。真核表达载体pcDNA3.1（+）经BamH I 和Xho I限制性内切酶双酶切处理后与合成的LfcinB基因进行连接,连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒DNA进行测序。测序结果显示,牛乳铁蛋白肽LfcinB基因成功克隆到pcDNA3.1（+）真核表达载体中,为进一步表达和抗菌活性研究奠定物质基础。     

乳铁蛋白及乳铁蛋白肽结构抗菌功能及基因表达

乳铁蛋白 (LF)是一种天然的铁结合蛋白。乳铁蛋白肽 (Lfcin)是从LF上被胃蛋白酶水解下来的 2 5个氨基酸残基的小肽。本文综述了LF和Lfcin的结构、抗菌功能和基因表达调控的研究进展     

乳铁蛋白及其活性肽的营养生理作用及应用前景

乳铁蛋白(LF)是一种多功能的糖蛋白,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)是从LF上被胃蛋白酶水解下来的25个氨基酸残基的小肽。文中阐述了乳铁蛋白及其活性多肽的结构,介绍了乳铁蛋白及其活性多肽的主要生理作用:抗菌、抑菌、抗病毒、抗氧化,调节机体的免疫和提高肠道对铁离子的吸收等作用。根据乳铁蛋白制备的研究进展,讨论了乳铁蛋白及其活性多肽在乳、食品和动物生产中作为添加剂的应用前景。     

乳铁蛋白及其生理机能的研究进展

乳铁蛋白作为一种天然的具有免疫功能的糖蛋白,是转铁蛋白家族的一员。它存在于哺乳动物的各种外分泌物中,乳中的含量较高,因其广泛的生理功能,近年来越来越多地受到人们的关注。概括介绍乳铁蛋白的结构及其重要的生理功能以及乳铁蛋白的制备方法,并展望乳铁蛋白作为一种添加剂在畜牧业上的应用前景。     

两段牛乳铁蛋白肽基因在乳酸乳球菌中的共表达

根据乳酸乳球菌密码子的偏嗜性,优化设计并合成牛乳铁蛋白肽的两段基因序列LFcinB和LFampin,将其与乳酸乳球菌表达载体pAMJ399分别用SalⅠ和BglⅡ双酶切后进行连接,并电转化至乳酸乳球菌MG1363中,经酶切鉴定表明获得带有两段牛乳铁蛋白肽基因的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFcinBA/MG1363。结果表明,优化表达条件,在GM17培养基中添加3.8%的β-甘油磷酸二钠可以获得表达重组蛋白的适宜pH,West-ern-blot检测可见重组蛋白大小约13 ku,表明牛乳铁蛋白肽在重组乳酸乳球菌中获得了表达。     

人乳铁蛋白转基因小鼠杂交选育的研究

根据孟德尔遗传原理,对表达人乳铁蛋白转基因小鼠进行近交和远交,获得了纯合子小鼠(P品系1♀、Q品系1♀1♂)和双重杂合子小鼠(PQ杂合3♀3♂).催乳获得小鼠乳汁,ELISA检测乳汁中人乳铁蛋白的含量.通过比较发现,纯合子小鼠和单纯杂合子小鼠在表达量上没有明显差异,而双重杂合子小鼠的表达量则较前两者有明显提高.