棉花组织总RNA的快速提取方法

棉花组织富含多糖、棉酚等次生代谢物质，较难提取高质量的RNA。本研究在前人方法的基础上对快速提取棉花组织总RNA的方法进行了探讨。利用改进的CTAB异硫氰酸胍裂解缓冲液，获得的RNA完整性好，无DNA污染，含量高，每克鲜组织能提取0．5mg总RNA，OD260／OD280比值均在1．7～2．0之间。该方法不但适用于叶片提取总RNA，而且在根、花冠、种子、发育的纤维中均能提取出高质量的RNA，同时节约成本，相对于试剂盒提取RNA，成本大为降低。     

棉花高质量总RNA提取的一种有效方法

棉花抗病虫基因工程和纤维品质改良一直是国内外研究的热点之一,近年来许多实验室又开展了棉花功能基因组学研究,在这些研究中都需要提取高质量的RNA,但目前广为使用的TriZol reagent kit和异硫氰酸胍-酚-氯仿一步提取法从棉花中难以纯化出完整的RNA,尽管许多学者针对棉花也发展出了几种有效的方法,但是这些方法一般都费工、     

适用于转录组测序的棉花幼根总RNA提取方法筛选

棉花幼根中含有大量酚类物质、多糖和单宁等多种次生代谢物,且根部取样时会带有少量的泥土和有机质等污染物,因此棉花幼根RNA提取难度较大.本文采用两种试剂盒法和改良的异硫氰酸胍法,筛选适合转录组测序的提取棉花幼根RNA的方法.与试剂盒法相比,改良的异硫氰酸胍法具有浓度高、质量好等特点,能够满足转录组测序的要求.     

一种适宜棉花microRNA实时定量分析的总RNA提取方法

为满足棉花组织micro RNA结构与功能研究的需要,建立了棉花高质量的总RNA提取方法.以陆地棉纤维和胚珠为供试材料,采用改良的异硫氰酸胍-硫氰酸铵-酸酚法提取总RNA,利用stem-loop RT-qPCR法鉴定成熟的miRNA.结果表明此方法能得到高质量的总RNA,并且miRNA的回收率较高,足以满足mi-croRNA水平的实时定量分析.     

一种棉花DNA快速提取方法

本研究以棉花子叶为材料,探索一种适用棉花批量SSR-PCR分析的DNA快速提取方法。本方法只需要两次加液,两次高温水煮即可完成。紫外检测结果表明,所得DNA浓度较好,纯度较差,含有较多蛋白质。但SSR分析结果显示,可以扩增出相应的带型,且清晰易辨,准确可靠。相比常规CTAB法,具有操作简便,成本低,效率高,且无毒,无污染的优点,适用于大量棉花样品的SSR-PCR分析。     

甜瓜总RNA快速提取

采用改良的Trizol法对甜瓜叶片的总RNA进行了提取,利用琼脂糖凝胶电泳及Quantity One软件分析、紫外分光光度法、RT-PCR及PCR法进行纯度、浓度、RNA完整性检测.结果表明:所提取的RNA完整性好,纯度高,不含DNA污染,为进行RT-PCR及其他分子生物学实验奠定了良好的基础;新鲜叶片比冷冻叶片的总RNA提取容易,结果更稳定;幼叶比老叶的总RNA含量高.     

利用CTAB/酸酚法提取棉花组织总RNA

通过借鉴植物DNA的CTAB提取方法,结合总RNA的LiCl沉淀法,摸索出一套适合于棉花组织总RNA提取和纯化的技术—CTAB 酸酚法。该方法与异硫氰酸胍法或冷酚法等相比具有更简便、得到的棉花组织总RNA完整性好和纯度高等优点。     

高质量的小麦种子总RNA的快速提取方法

提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究小麦种子发育的必要条件。现有提取方法难以快速得到高纯度的小麦种子总RNA。本试验将冷酚法和Trizol一步法相结合,在5h左右就可得到高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,OD260/DO280比值在1．90-2．00之间。将提取的总RNA用于反转录,可获得高质量的cDNA,在cDNA—AFLP分析上可得到清晰的条带。说明这种方法获得的总RNA纯度和完整度非常高,完全满足分子生物学研究的要求。     

单粒棉花种子DNA快速提取方法

本研究以棉花干种子为材料,探索一种适用棉花品种SSR分析的DNA快速提取方法。先采用SDS提取液进行一步裂解,并将RNA的去除操作融入抽提过程,从而简单快速的获得高质量棉种基因组DNA。紫外检测与琼脂糖凝胶电泳检测结果均表明,所得DNA纯度高,完整性好。另外,SSR分析结果也显示,扩增带型清晰易辨,重复性与稳定性好。相比常规的以棉花幼苗叶片为材料的DNA提取法,本方法在降低实验成本的同时大大提高了工作效率。     

一种高效提取棉花不同组织总RNA的热硼酸改良法

针对棉花组织中酚类化合物、多糖、次级代谢产物的含量较多,以及内源RNase活性高等特点,将硼酸缓冲体系、蛋白酶K消化蛋白和氯化锂选择性沉淀RNA步骤偶联在一起,发展成一种有效提取棉花不同组织特别是棉纤维组织总RNA的热硼酸改良法。在提取RNA过程中,不需用酚/氯仿/异戊醇进行抽提,简化了RNA提取的操作步骤。从不同棉花组织提取的RNA质量均能满足cDNA文库的构建、差异显示、cDNA末端的快速扩增(RACE)以及Northern杂交等分子实验。     

一种适合葡萄多种组织的总RNA提取方法

为了解决葡萄组织中总RNA提取难度大的问题,以感染葡萄卷叶病毒-3的葡萄品种‘蛇龙珠’为试验材料,采用CTAB结合SDS法对总RNA提取方法进行了研究,建立了一套适合葡萄叶片、叶柄及韧皮部等多种组织总RNA提取的方法。结果表明,该方法在多种组织中均能获得高质量的RNA,OD260/OD280=1.8~1.9,电泳结果表明,所得RNA完整性好,无降解。同时用所得RNA进行了GLRaV-3的检测,电泳结果表明该法所得RNA可满足葡萄病毒病RT-PCR检测的质量要求。该方法操作简单,结果稳定,对其他富含多酚、多糖类植物组织总RNA的提取具有借鉴意义。     

棉花高质量RNA的提取及MADS-box基因保守区段的克隆

研究和探讨了一种可用于高质量棉花总RNA提取的热硼酸法,并用于棉花MADS box基因的RT PCR分析,结果表明,该方法制备的RNA质量较高,克隆得到的基因片段序列与已知MADS box基因序列之间具有较高同源性。     

制备棉花幼蕾高质量总RNA的方法比较

 以棉花和烟草的叶片及幼蕾为材料,分别用Trizol法和热硼酸/蛋白酶K法提取总RNA,对获得总RNA的量和纯度测定。结果表明,热硼酸/蛋白酶K法提取棉花幼蕾总RNA效果最好,得到的RNA具有质量高、完整性好等优点     

棉叶总蛋白提取及SDS-PAGE电泳的改良

对棉花叶片总蛋白的几种提取方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较,确立了一套适用于棉花蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、脱色以及干胶制备的方法。发现利用25mmol·L1,pH8.0Tris-HCl缓冲液提取的棉花叶片总蛋白,提取效率高,蛋白齐全。采用改良后的棉花SDS-PAGE电泳方法—改良丙酮沉降法,电泳结果显示,条带清晰、数量多、分辨率高。