绵羊水肿病的研究——溶血性大肠杆菌的病原性试验

从10只自然发病的水肿病羊体内分离到78株溶血性大肠杆菌。该菌对某些动物红细胞具有溶血性,对小白鼠、豚鼠、绵羊均有致病力。少数菌株能产肠毒素。经菌型鉴定为O_8、O_(26)、O_(120)、O_(157)四个血清群。用O_8、O_(120)、O_(137),三个不同O群的菌株(142-5、144-15、144-16)人工感染绵羊发病,并从试验羊中分离出与原注射物同一菌型的菌株,从而证实绵羊水肿病的病原菌为一些特定的O抗原型致病性大肠杆菌。     

利用MLST技术探讨不同地区致病性耐药鸡源大肠杆菌的遗传进化关系

选取来自山东等10省698株鸡源大肠杆菌为研究对象,分别利用PCR、微量肉汤稀释法、MLST技术方法进行系统进化群分群、耐药表型检测、分子分型,并采用Bio Numerics v4.0软件和SPSS20.0软件进行数据处理分析。结果显示,低致病群B_1群为48.85%(341/698)和非致病群A群24.64%(172/698)分布较多,高致病群D群20.20%(141/698)和B_2群为6.31%(44/698)。鸡源大肠杆菌耐药严重,12种药物的耐药率约在50%以上。B_2和D群菌株对8种抗菌药的耐药率高于A和B_1群菌株,其中对庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、氨苄西林和奥格门丁5种药物极显著性差异(P<0.01),对氟苯尼考和复方新诺明显著性差异(P<0.05)。135株高致病菌株经MLST分型得到48个ST型,ST117(12株)和ST354(12株)最多,其次是ST115(8株),ST2309(8株),ST10型(7株),ST69(6株),ST1011(5株),ST1158(5株)。有29个ST型各1株,18株菌株未分出序列型。不同地区大肠杆菌ST型分布存在差异,ST69和ST354型分布最为广泛(4个省),其次是ST115、ST117和ST2309型(3个省),ST10、ST48、ST57、ST362、ST371、ST1011和ST1158(2个省),其余36个ST型菌株仅在1个省市有检出。135株菌株分为35个聚类簇,其中23个聚类簇的遗传相似性在40%以下,但有6个聚类簇菌株间的遗传相似性均在80%以上。48个ST型菌株共获得了76种耐药谱。我国各地健康鸡群隐性携带相对较高比例的高致病菌株,且耐药程度相对严重,耐药谱较广。鸡源大肠杆菌菌株分布具有多态性和地域性,ST型与耐药谱之间无相关性。     

辽宁地区猪源大肠埃希菌血清型调查分析

为了解辽宁地区猪群中大肠埃希菌流行的血清型,对来源于辽宁省9个不同地区的病料进行了大肠埃希菌的分离培养、生化鉴定,并采用平板凝集法与试管凝集法测定了这些大肠埃希菌的血清型。结果表明:分离鉴定的70株大肠埃希菌中有63株能够定型,分别属于28种血清型,O_(14)、O_(65)、O_(101)为优势血清型,占已定型菌株的44.44%;其次为O_8、O_(92)、O_(153),占已定型菌株的19.05%;4株自凝,3株未能定型。     

产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）乳牛乳腺炎大肠杆菌的检测及其基因型分布

为了解采自内蒙古和上海地区的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）乳牛乳腺炎大肠杆菌的流行特点、耐药性和基因型分布,采用美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2005年推荐的初筛及纸片确认方法对内蒙古地区的58株和上海地区的22株乳牛乳腺炎大肠杆菌进行了ESBLs的检测及耐药性分析,并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果显示,内蒙古地区检出6株产ESBLs菌株,阳性率为10.34%,其中,有1株菌携带TEM-1基因,有1株携带CTX-M-14型基因,而有3株同时携带TEM-1型和CTX-M-14型2种基因,只有1株菌未检出上述基因。上海地区未检出产ESBLs菌株。结果表明,产ESBLs菌株多表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株。     

鸡胚源致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定

在江苏五个种鸡场,从孵化后期死亡的186枚鸡胚及84羽出壳弱雏中分离出99株大肠埃希氏菌,死胚分离率为36.81％,出壳弱雏分离率为46.43％。分离菌中有50株对昆明(KM)小鼠具有强毒力,对其进行大肠杆菌O群抗原鉴定,共有15种血清型,O_(11)、O_(81)、O_(88)及O_(115)为优势血清型,其余为O_3、O_4、O_(18)、O_(26)、O_(36)、O_(60)、O_(75)、O_(93)、O_(103)、O_(1l4)、O_(113)其中O_3、O_(18)、O_(36)、O_(81)、O_(114)为国内外首次发现,未定型菌9株,占待检菌株的18％。本文还对所分离大肠埃希氏菌的培养特性,形态特征,生化特性,致病性及抗生素敏感性进行了研究。     

湖南省部分发病猪猪链球菌血清型的调查

为了解猪链球菌病在湖南病猪群中不同血清型的流行情况,实验室于2015—2017年从湖南省部分病猪群中收集到疑似链球菌感染病料142份,分别进行细菌分离,并采用猪链球菌GDH特异性引物鉴定到106株猪链球菌,阳性率为74.65%(106/142)。然后采用猪链球菌33个血清型的特异性引物对这106个菌株进行PCR鉴定,结果86.79%的菌株被鉴定到具体血清型,其中优势血清型为2型(1/2型)30.19%,其次是7型(11.32%)、8型(9.43%)和3型(6.60%)。     

陕西省关中地区鸡大肠杆菌血清分型及防治研究

从陕西省关中17个县鸡场分离出532株大肠杆菌,对其中136株进行血清分型,共分出11个血清型,主要血清型是:O_2、O_(78)、O_(26)、O_(22)、O_(53)、O_1。药敏试验利高霉素、丁胺卡那霉素等10种药物对大肠杆菌敏感。选大肠杆菌分型代表菌株和重点菌株制备多价苗,用于易感鸡群,效果理想。     

鸡杆菌中国分离株RAPD分型方法的建立与应用

对9株鸡杆菌进行了血清分型,并应用8条随机引物对该9株鸡杆菌和3个参考菌株(1株巴氏杆菌、1株大肠杆菌和1株链球菌)共12株细菌做随机扩增多态性DNA(RAPD)分型研究。结果显示,9株鸡杆菌分别属于血清Ⅰ型(1/9)、血清Ⅱ型(3/9)和血清Ⅳ型(5/9)。所用8条随机引物中有3条呈现良好的多态性和稳定性,可产生差异显著的指纹图谱。采用SPSS13.0软件分析了不同菌株间的遗传距离,并依此绘制出菌株间的亲缘关系树状图。12株细菌共分为4个聚类群,其中9株鸡杆菌位于同一聚类群中,且又可分为4个聚类亚群。3个参考菌株各自形成一个独立的聚类群。不同血清型的鸡杆菌菌株具有相似的指纹图,同一血清型的菌株指纹图存在差异。结果表明,RAPD基因分型是目前鸡杆菌分子流行病学调查及病原分离鉴定比较理想的方法之一。     

昆明地区猪源链球菌分离株血清群检测及致病病型分析

从昆明地区可疑病料中分离出12株猪源致病性链球菌,对其进行了血清群鉴定。结果表明分离菌株中以兰氏D群为主,其次为C群。其中D群4株(33.3%),C群3株(25%),A群1株(8.3%),E群1株(占8.3%),未能定群3株(25%)。分离株cg1为猪链球菌2型。通过对临床病例血清型检测显示,猪链球菌病在昆明地区广泛存在,尤以寒冷季节多发,主要病型包括败血型、脑膜炎型和关节炎型。     

河北某农场仔猪腹泻大肠杆菌K_(88)抗原菌株的分离与鉴定

自河北某农场分离的21株仔猪腹泻大肠杆菌K_(88)抗原菌株全部有致溶血作用,并对小鼠显示不同的致病性。其血清分布在8个O抗原组,其中O_8菌株占优势,并在省内首次分离到具有K_(88)抗原的O_8菌株3株。O_8菌株对氟哌酸、卡那霉素、新霉素很敏感,对喹乙醇不敏感。     

天津地区部分猪源大肠杆菌的OMP型

从天津各区主要养猪场分离的16株(7种血清型O20、O21、O139、O141、O93、O108、O147)大肠杆菌中提取外膜蛋白(OMP),经SDS-PAGE分析表明,5株O21菌株有2个OMP型(OMP-1和OMP-3型).3株O1s9菌株和3株O20菌株各出现2个OMP型(OMP-1和OMP-2型).2株O141菌株共出现2个OMP型(OMP-2和OMP-3).1株O93菌株、1株O108菌株和1株O147菌株均为OMP-1型.结果表明,相同血清型的菌株可以有不同的OMP型,不同血清型的菌株可以有相同的OMP型.     

规模化养猪场大肠杆菌病流行病学调查

我们对近年以来我省规模化养猪场发生的6次猪大肠杆菌病,进行了临床、病理学和实验室诊断调查,其中仔猪黄痢4次,仔猪白痢2次;总发病猪4135头,病死760头,发病率为34.22%,病死率为18.11%;对采自上述猪场分离获得的76株大肠杆菌,采用大肠杆菌标准抗O型血清凝集试验进行血清型鉴定,其中,仔猪黄痢病料分离菌株血清型分别为O_8、O_9、O_(60)、O_(64)、O_(115)、O_(149)、O_(157),仔猪白痢病料分离菌株血清型分别为O_8、O_9、O_(139)、O_(157)。     

乳牛乳腺炎多联疫苗的研制及其临床应用效果

从全国各地奶牛场采集的256份临床型乳腺炎病乳中分离鉴定出了13株金黄色葡萄球菌、32株无乳链球茵和27株停乳链球菌；采用血清学交叉免疫试验，筛选出了毒力及交叉免疫原性强的3种茵的优势菌株。采用这些菌株和一系列新工艺和新方法，研制出了乳牛乳腺炎灭活多联疫苗。建立了用奶山羊进行制苗菌株毒力复壮及用ELISA进行抗体检测的方法，进行了免疫剂量及注射部位的筛选试验以及疫苗安全性、免疫持续期、效力及田间扩大试验。结果表明，该灭活多联疫苗对乳牛具有安全高效的特点，经肌肉或后海穴免疫1次，每次5mL，免疫持续期可达4个月；且后海穴的免疫效果优于肌肉注射，可使临床型乳腺炎发病率降低49．22％～59．86%。     

表达K_88K_99双纤毛抗原及K_99纤毛抗原的产肠毒素大肠杆菌的构建

应用转化法:将带有K_99纤毛抗原的重组质粒PHK_99分别转化到具有K_88纤毛抗原的产肠毒素菌株B_6(O_149K_91K_(68)ac)“和不具K_88抗原的产肠毒素菌株(O_14K_85),获得了35株抗氨苄青霉素的转化子。在这35个转化子中,有32个能同时表达K_(88)、K_(99)两种纤毛抗原,有3株能表达K_(99)纤毛抗原。这些转化子仍具有产肠毒素的特性。     

鸡大肠杆菌病病原分离和灭活苗的研制

从广东六市县25个鸡场分离出大肠埃希氏杆菌96株,以其中血清型O_(78)、O_(111)、O_2、O_5、O_(15)为代表菌株制成灭活铝胶苗和油乳剂菌,对鸡的免疫效果良好。     

新疆阿拉尔垦区鸡致病性大肠杆菌的分离与鉴定

从新疆阿拉尔垦区的不同鸡场和屠宰点收集典型病变的病料100份,从中分离出大肠杆菌26株,并进行血清型鉴定,其主要血清型主要有O_(127)、O_(111)、O_(55)、O_(26)、O_(126)、O_(128)、O_(125)、O_(4),动物回归试验显示所分离的6种血清型的菌株对3～5日龄内雏鸡具有很强的致病作用,多数菌株可使接种雏鸡94.4%死亡。通过药敏试验结果表明,所分离26株大肠杆菌对头孢唑林钠最敏感,为该垦区鸡的大肠杆菌病诊断和预防提供技术支持。     

禽优势血清型大肠杆菌部分相关毒力基因的检测

为研究禽大肠杆菌的致病性及相关生物特性,试验对湖北省各地方养殖场送检的病料,通过分离培养及生化鉴定,分离得到232株禽大肠杆菌。18个O因子血清鉴定结果显示,优势血清型为O_(20)(19)、O_(78)(27),这两种血清型菌株合计46株,占血清型定型菌株的25.99%(未定型菌株为55株)。对优势血清型禽大肠杆菌菌株进行毒力基因检测,结果表明fimH、iroD、iucD、estA和ibeA基因携带率分别为87.88%、57.58%、48.49%、36.37%、0%。研究结果为湖北地区大肠杆菌防控和疫苗的研制提供数据支撑,并为阐明大肠杆菌的致病机理奠定基础。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因多态性分型试验

利用随机引物AP-7,建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对71株引起内蒙古和贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,71株金黄色葡萄球菌均得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物为2～9条带,产物大小为240～4 500bp。菌株共分为6个基因型,其中Ⅰ型17株(占23.9%)、Ⅱ型3株(占4.2%)、Ⅲ型33株(占46.5%)、Ⅳ型15株(占21.1%)、Ⅴ型2株(占2.8%)、Ⅵ型2株(占2.8%)。Ⅰ型为内蒙古地区的流行优势菌群,Ⅲ型为贵州地区的流行优势菌群。两地区各基因型菌株比例有明显差异,这可能与奶牛养殖业水平和环境差异有关。     

山东地区禽舍空气中大肠杆菌分离鉴定及血清型调查

为了解山东地区鸡舍内空气中大肠杆菌的血清型,用伊红美蓝培养基对山东地区大型养殖场空气中大肠杆菌进行分离,通过培养特性、染色镜检、生化特性、PCR试验对分离菌株进行鉴定;对鉴定的大肠杆菌用平板凝集试验进行血清型鉴定。结果表明:共分离到202株大肠杆菌,其中有89株未能定型,占分离株的44.06%;定型了113株,占分离株的55.94%。定型的大肠杆菌共分为24个血清型,优势血清型为O_2、O_(14)、O_1、O_(11)、O_(78)和O_(20),占已定型分离株的76.99%。     

青海省囊谦县鼠疫分离菌株病原学研究

对青海省囊谦县分离的36株鼠疫菌进行糖醇酵解实验、毒力因子、质粒谱和鼠疫菌差异区段(DFR)分型研究,结果表明,其中33株为青藏高原型菌株,1株为祁连山型,其余2株与青海省疫源地生态型菌株均不相同。21株鼠疫菌均含有4个毒力因子,占58.3%(21/36)。63.89%(23/36)的受试菌株Pgm阳性,22.22%(8/36)的受试菌株Pgm阴性,Pgm混合型菌株为13.89%(5/36)。5型和36型为该地区主要基因组型。囊谦县36株鼠疫菌共携带3种质粒,均为规范化质粒,组成1种质粒谱：6×10⁶、45×10⁶、65×10⁶。