天名精内酯酮多克隆抗体的制备

【目的】合成并鉴定天名精内酯酮人工抗原,制备天名精内酯酮多克隆抗体,为天名精内酯酮作用靶标的免疫化学定位奠定基础。【方法】通过天名精内酯酮4位羰基和盐酸氨基脲氨基的亲核加成反应制备半抗原天名精内酯酮缩氨基脲(CN),使用MS和NMR对其结构进行鉴定;采用戊二醛法将半抗原和载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,合成天名精内酯酮免疫原(CN-BSA)和包被原(CN-OVA),采用紫外吸收扫描法、红外光谱法对免疫原及包被原进行鉴定;用制备好的免疫原免疫健康BALB/c小鼠获得天名精内酯酮多克隆抗体,通过间接非竞争ELISA法测定其效价。【结果】成功制备了天名精内酯酮免疫原(CN-BSA)和包被原(CN-OVA),获得了效价为128 000的天名精内酯酮多克隆抗体。【结论】成功制备了天名精内酯酮多克隆抗体。     

呋喃它酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备

【目的】建立高灵敏度的呋喃它酮酶联免疫检测方法.【方法】以戊二醛法将呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,再由NaBH4还原西佛碱得到结构稳定的免疫原AMOZ-BSA和AMOZ-OVA;用对醛基苯甲酸(CPA)对AMOZ进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,由质谱鉴定,经N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法将CPAMOZ与BSA和OVA偶联得到免疫原CPAMOZ-BSA和包被原CPAMOZ-OVA.经紫外扫描鉴定表明人工抗原合成成功.免疫Balb/c小鼠,ic-ELISA方法测定鼠血清多克隆抗体对AMOZ和NPAMOZ的特异性.【结果和结论】结果显示CPAMOZ-BSA免疫制备的抗体对NPAMOZ有良好的特异性.抗体效价为1∶32×104,对NPAMOZ的半抑制质量浓度为4.53 ng·mL-1;抗血清与CPAMOZ、AMOZ及呋喃它酮的交叉反应率为78.6%、1.5%及4.6%;与其他3种硝基呋喃类原药及其代谢物对硝基苯甲醛、对醛基苯甲酸等结构相似物的交叉反应均小于0.01%.     

一种新的沙丁胺醇人工抗原的合成及单克隆抗体的制备

【目的】为证明采用4-溴丁酸乙酯半抗原合成人工抗原可制备灵敏度高、特异性好的单克隆抗体.【方法】将硫酸沙丁胺醇(SAL)与4-溴丁酸乙酯反应制备半抗原(SAL-HS);通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成免疫原与包被原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和质谱方法对沙丁胺醇免疫原及包被原进行鉴定.免疫原免疫Balb/c小鼠,采用融合技术产生杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.【结果和结论】筛选出1株杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价达1∶128 000,腹水效价达1∶2 560 000,免疫球蛋白亚型鉴定为IGg1;抗体对沙丁胺醇的半数抑制浓度(IC50)为:0.746 ng/mL;与其他同类结构药物的交叉反应率均小于0.015%.     

改良重氮法合成米诺环素人工抗原及结果鉴定

分别采用重氮法、戊二醛法及改良重氮法将米诺环素半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原,3种方法的偶联比分别为5∶1,10∶1和15∶1;紫外光谱、红外光谱、凝胶电泳对改良重氮法合成的人工抗原进行鉴定,成功合成了人工抗原;将改良重氮法合成的人工抗原MNC-BSA免疫BALB/C小鼠,用间接ELJSA法测定抗体效价及其特异性.结果表明:小鼠血清抗体效价均在1∶12800以上,为研究制备米诺环素单克隆抗体奠定了基础.     

磺胺母核抗原合成及多克隆抗体的制备

制备磺胺类药物母核结构的半抗原(H),通过免疫家兔得到多克隆抗体,为制备针对多种磺胺类药物的单抗和磺胺药检测免疫胶体金试纸条研制奠定基础。以对乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)和对氨基苯甲酸甲酯(PA-BA)合成磺胺母核的半抗原(H);以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用混合酸酐法,合成了免疫原H-BSA和包被原H-OVA通过紫外光谱定性证明偶联物偶联成功与否,以H-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,ELISA法对其特异性及效价进行检测。成功合成了磺胺母核人工抗原即免疫原H-BSA和包被原H-OVA,二者的蛋白浓度分别为8.46 mg/mL和10.53 mg/mL,结合比分别为13∶1和9∶1;制备的多克隆抗体特异性良好,血清效价为1∶256 000。     

培氟沙星人工抗原的合成与鉴定

试验采用碳二亚胺(EDC)法将培氟沙星(PEFX)与载体蛋白进行偶联,用于制备免疫抗原PEFX-BSA与包被抗原PEFX-OVA,通过紫外扫描和SDS-PAGE对人工抗原进行鉴定,免疫原免疫Balb/c小鼠,获得抗体。试验结果表明,间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价达到1∶6 400。为进一步制备抗PEFX单克隆抗体提供了良好的免疫原。     

丙烯酰胺单克隆抗体的制备

丙烯酰胺分子量小,结构简单,因此制备其特异性抗体比较困难.试验将丙烯酰胺与间巯基苯甲酸反应合成丙烯酰胺半抗原,半抗原偶联KLH载体蛋白合成抗原,通过免疫制备单克隆抗体,并对其进行了抗血清的效价、半抑制率、交叉反应测定.结果表明:免疫原为AM-KLH,包被原为AM-OVA测定的抗血清效价最高为1:32000倍,其半抑制率(IC50)为120.323 ng·mL-1,该抗体与丙烯酰胺近似物的交叉反应率均<1.48.探索了丙烯酰胺单克隆抗体的制备方法,为丙烯酰胺快速检测方法的建立提供了新的思路.     

M13噬菌体肽库扩增及兔抗血清制备

为制备M13噬菌体多克隆抗体,将噬菌体十二肽原始文库进行大量扩增,作为免疫原制备兔抗M13的多克隆抗体血清并进行间接ELISA鉴定。结果表明,该多抗效价达1 1 048 576,说明此多抗可与扩增噬菌体文库发生很好的抗原抗体反应。将制备的噬菌体M13多克隆抗体与商业化M13抗体水平比较,制备多抗与商业化M13抗体效果相当。本研究成功制备兔抗M13噬菌体多克隆抗体,为深入研究噬菌体展示技术提供了材料。     

八种氟喹诺酮类药物人工抗原的合成及鉴定

建立诺氟沙星(Enrofl oxacin,NOR)、环丙沙星(Ciprofl oxacin,CIF)、恩诺沙星(Enrofl oxacin,ENR)、沙拉沙星(Sarafl oxacin,SAR)、氧氟沙星(Ofl oxacin,OFL)、双氟沙星(Difl oxacin,DIF)、培氟沙星(Pefl oxacin,pef)和氟罗沙星(Fleroxacin,FLX,)8种氟喹诺酮类药物人工抗原的合成及鉴定方法。采用碳二亚胺(EDC)法将8种氟喹诺酮类药物与载体蛋白进行偶联,用于制备免疫抗原与包被抗原,通过紫外扫描和SDS-PAGE对人工抗原进行鉴定,免疫原免疫Balb/c小鼠,获得抗体。试验结果表明,采用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价均达到1:8000以上。为进一步制备抗氟喹诺酮类药物单克隆抗体提供了良好的免疫原。     

克百威人工抗原合成及其免疫应用

研究克百威半抗原4-[[(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)的新合成方法,以避免传统三光气合成法的危害。以呋喃酚为起始物,通过酯化反应和还原反应最终合成半抗原BFNB,利用质谱和核磁进行表征,结果证明半抗原BFNB合成成功。利用活性酯法将BFNB分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联得到免疫原和包被原,紫外扫描计算偶联比分别为17∶1和8∶1;将免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,间接竞争酶免疫检测方法(icELISA)表明其半数抑制质量浓度(IC_(50))为0.096μg/mL,定量检测线性(IC_(20)~IC_(80))为0.023~0.403μg/mL。该研究所制备的抗原为进一步研制抗克百威单克隆抗体奠定基础。     

猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备及特性分析

为制备猪流行性腹泻病毒(PDEV)的单克隆抗体,并鉴定单克隆抗体特性。本试验采用差速和蔗糖梯度离心纯化PEDV抗原,免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经ELISA方法筛选和细胞克隆,得到能分泌鼠抗PEDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备出相应的单克隆抗体,并分析其特性。试验结果:获得2株能稳定分泌抗PEDV的单克隆抗体,命名为E1和H6株,其中E1单隆抗体为IgG2a亚型,H6单隆抗体为IgM亚型,2株单克隆抗体均具有IFA、ELISA和Western bloting特性。E1杂交瘤细胞株的细胞上清液和腹水的ELISA抗体效价分别26和105,H6杂交瘤细胞株的细胞上清液和腹水的ELISA抗体效价分别24和104。2株单克隆抗体与Vero细胞、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均无交叉反应。Western bloting测定结果表明,E1株单克隆抗体能识别PEDV的M蛋白,H6单克隆抗体能识别PEDV的N蛋白。PEDV单克隆抗体的成功研制,为PEDV免疫诊断、表位识别及蛋白研究奠定了良好基础。     

大豆种间的核型分析

通过对大豆3个种的核型分析,结果表明:(1)大豆体细胞染色体数均为2n=40;(2)3个种都只有1对位于最长染色体上的随体,而且随体染色体形态相近,都是近中部或近端部着丝粒染色体;(3)种间染色体长度及着丝粒位置呈规律性变化;(4)野生大豆的核型较不对称,其次为半野生大豆,而栽培大豆核型比较对称.     

家禽饲料代谢能的研究 Ⅵ鸡和水禽的消化道排空和内源能排量

1.消化道残留干物量随家禽饥饿期延长而减少,并因禽别和采食量而异。就残留干物量占采食干物量的百分率来看,鸭最低,鸡次之,鹅最高。2.影响消化道残留干物量的各种因素中,除饥饿排空期外,家禽的个体差异和某些应激因素(如强饲)是很重要的。3.消化道内容物的残留率,无论总的残留率或分部的残留率,饥饿排空期长24小时和32小时之间并无显著差异(P>0.05)。4.家禽的内源能排量(千卡/公斤体重)无明显规律性。就现有资料分析,其趋势是:体重和年龄大者内源能排量相对较低,水禽则低于鸡。富纤维和富蛋白饲料有增大内源能排量的后遗影响。     

耐冬山茶孢粉学研究

对耐冬山茶花粉形态进行比较研究,可以为探索山茶属植物的演化、系统分类以及耐冬山茶的品种分类提供孢粉学依据。通过用扫描电镜对耐冬山茶18个品种及3个南方山茶品种的花粉形态进行观察分析,结果如下:耐冬山茶花粉粒为腰鼓形或长球形,极面观为近三角形或三裂圆形,具三孔沟,从表面看内孔不显著。外壁两层,外层厚于内层。花粉粒表面纹饰大多为蠕虫状,亦有拟蠕虫状或拟网状。脊间或网纹间具穿孔和穴,有的脊上有较明显横向波状纹,穿孔和穴的形态及数量品种间有差异。花粉粒形态可以做为耐冬山茶品种分类的依据之一,耐冬山茶和南方山茶品种花粉形态存在较大的差异。     

皮肤角质形成细胞肿瘤中PCNA的表达及其与肿瘤转移的关系

目的：探讨皮肤角质形成细胞肿瘤中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及其与肿瘤转移的关系。方法：用ADC免疫组化技术观察48例皮肤鳞状细胞癌(SCC)、41例基底细胞癌(BCC)及15例角化棘皮瘤(KA)手术切除标本。结果：PCNA在SCC中的表达明显高于DCC及KA(P＜0．01)。但其在BCC与KA中的表达差异无显著性(P＞0．05)。PCNA在低分化SCC中的表达明显高于高分化者(P＜O．01)。但其表达在淋巴结转移组与无转移组之间的差异无显著性(P＞0．05)。结论：PCNA在SCC、DCC及KA中的表达差异有非常显著性：其表达与SCC的分化程度有关。但与淋巴结转移似无关。     

盆栽花卉专用植物杀虫气雾剂的研制

为解决室内盆栽花卉害虫防治问题,经试验研究,筛选出盆栽花卉专用植物杀虫气雾剂配方,成功研制出"盆栽花卉专用植物杀虫气雾剂"。杀虫气雾剂配方为:5%苦参碱母液1 000倍液+0.03%聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯+无离子水,其具有以下6个特点:(1)有效成分为天然植物杀虫素,对人畜毒副作用小;(2)对花卉上常见害虫蚜虫、红蜘蛛、褐软蚧和白粉虱的防治效果较好,分别为91.6%、89.3%、77.1%和93.6%;(3)以无离子水为溶剂,无臭、无异味,不会对花卉造成药害,且成本较低;(4)采用密封包装,以手动压缩空气为推进剂,代替目前气雾剂常用的氟里昂、丁烷气等抛射剂类物质,减少了对环境的污染;(5)该产品使用方便,可随时使用、直接使用、多次使用,特别适用于室内盆栽花卉害虫的防治;(6)稳定性良好,为均匀的乳液,有效期1a以上。     

一些十字花科植物组织的化感活性研究

采用琼脂混粉法对一些常见十字花科植物组织的化感活性进行了研究。首先以生菜为指示植物对油菜（苏州青、雪克青、矮脚黄）、球果焊菜、播娘蒿、荠菜以及独行菜的不同组织进行了测定,发现以独行菜果实组织的化感活性最高。进而以该组织为供试材料测定了其不同浓度对生菜、小麦、反枝苋和稗草4种指示植物幼苗生长的影响,发现在低浓度（0.1g/L）下对所有指示植物幼苗的生长均表现出一定的促进作用,而在5、10 g/L的高浓度下,各指示植物胚根（或种子根）和胚轴（或胚芽鞘）的生长均受到明显的抑制,计算对胚根或种子根的有效抑制浓度（EC50）分别为反枝苋（0.2373 g/L）、生菜（0.8172 g/L）、稗草（0.9901 g/L）和小麦（2.8918 g/L）;对胚轴或胚芽鞘的EC50分别为反枝苋（0.4869 g/L）、稗草（3.1657 g/L）、生菜（3.6663 g/L）和小麦（5.7276 g/L）。     

水稻"三控"施肥技术的生物学基础

水稻"三控"施肥技术是一项高产稳产、省肥省药、节本增效的施肥新技术,其主要生物学基础是:(1)氮肥利用率与总施氮量、基蘖肥施氮量呈显著负相关,穗粒肥的氮肥利用率高于基肥,后者又高于分蘖肥,因此应控制总施氮量和基蘖肥施氮量,实行氮肥后移;(2)分蘖速率由群体已有茎蘖数、叶片含氮量和叶面积指数共同决定,提高成穗率要从控制最高苗数和提高已有分蘖成活率两方而人手,群体成穗率与干物质积累动态密切相关,适当控制幼穗分化前生长速率和提高幼穗分化后生长速率,是提高群体成穗率的重要物质基础;(3)水稻纹枯病的发生主要由气候条件和植株群体指标决定,纹枯病病情指数与最高茎蘖数、抽穗期叶面积指数和叶绿素含量呈正相关,而与抽穗期群体透光率呈负相关,为通过群体调控减少纹枯病的发生提供了依据.     

一个枇杷(Eriobotrya japonica L.)不育突变植株的细胞学观察

观察了一个楷杷(Eriobotrya japonica L.)不育突变植株的花粉母细胞减数分裂行为与花粉的育性,有如下异常现象:(1)第一次分裂的终变期,见部分母细胞有2～4个不联会或联会不紧密的染色体,因而出现若干单价体;(2)中期Ⅰ常见一些染色体提早分离;(3)后期Ⅰ一些母细胞出现落后染色体,后期Ⅱ亦见到一些落后染色体或呈多极分离;(4)四分孢子期,小孢子的发育常不整齐,有的呈小枝状态,有少量异常多分体出现;(5)花粉粒的大小不一,有一些巨大型花粉和大量败育花粉,花粉发芽率低,且不甚正常。根据如上观察结果,认为是一个自然发生的不联会突变,作为育种的原始材料,具有一定价值。     

生脉制剂治疗慢性心力衰竭研究进展

[目的]阐述近年来不同剂型生脉制剂治疗慢性心力衰竭的研究进展,为其深入研究和开发提供参考。[方法]查阅近年来不同生脉制剂临床治疗慢性心力衰竭的文献资料进行综述。[结果]生脉制剂治疗慢性心力衰竭疗效显著。[结论]生脉制剂治疗慢性心力衰竭效果好且能减少西药用量,降低西药毒副作用,有广泛的应用前景。