基因型和供体条件对油菜小孢子培养成胚率影响

利用正交设计对影响油菜小孢子培养的基因型、低温预处理时间、取材时期及小孢子发育时期（用花蕾花瓣花药比表示）等供体材料条件进行系统研究。结果显示,对小孢子培养成胚率影响最大的为基因型,其次依次为小孢子发育时期,取材时期和低温预处理时间。最佳处理以51039为材料,开花前5天取样并于4℃低温预处理2d,取花瓣花药比为0.5至1的花蕾培养成胚率最高,达10.33枚/蕾。     

大白菜内因对小孢子胚胎发生能力的影响

以15个大白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究基因型、花蕾长度对小孢子胚发生的影响。结果表明:不同试材的小孢子胚发生频率有明显差异,有11个品种诱导出胚状体,最高出胚率为每蕾54.17胚;诱导胚状体发生的最佳花蕾长度不同品种略有不同,多数品种在2.5～3.5mm时胚发生频率较高,其次是蕾长2.0～2.5mm时有较高发生频率。     

提高大白菜游离小孢子胚诱导率的研究

采用游离小孢子培养方法,对提高大白菜小孢子胚诱导和形成的因素进行了研究。结果表明,24个大白菜品种（品系）在NLN-13液体培养基中有21个品种诱导出胚。各品种间小孢子胚产量差别极大,每花蕾产胚在0．1-14．66个之间。比较添加不同浓度蔗糖和激素的NLN培养基的培养效果,以NLN＋13％蔗糖的效果较好。接种后,小孢子在33℃高温预处理24—48h,产胚量较高。B5＋6．BA0．2mg／L＋3％蔗糖＋1％琼脂培养基有利于小孢子胚长成植株。     

提高油菜游离小孢子胚诱导频率的研究

以11个甘蓝型油菜基因型为材料,采用NLN培养基进行游离小孢子培养,对如何提高可培养的基因型范围和产胚率进行了研究。结果表明,11个油菜基因型中有10个基因型可以诱导出胚,培养成功率达90.9%,表明采用NLN培养基进行游离小孢子培养油菜基因型范围比较宽,但各基因型间小孢子胚产量差别很大,每花蕾产胚量为0.08~3.53个,TR4和TR9两个基因型每花蕾产胚可达3.23,3.53个。以TR4和TR9两个基因型为试材,进一步改进培养基和培养方法,采用NLN培养基中添加激素和活性炭方法,可大大提高产胚率,产胚量分别达到7.11和10.05个/蕾;接种后,小孢子经33℃高温预处理可显著影响产胚量。子叶形小孢子胚在光下适当培养后转入B5 BA 0.2 mg/L NAA 0.02 mg/L继代培养基上,大多数胚能长成绿芽,B5 6-BA 0.2 mg/L 3%蔗糖 1%琼脂培养基有利于小孢子胚长成植株。     

浅析几个因子对甘蓝型油菜游离小孢子胚胎发生的影响

为了快速纯舍杂交后代材料,提高重组基因型的选择几率,对40个杂交F1代组合进行小孢子分离培养。其中,有9个材料产生小孢子胚（占22.5％）,仅4个材料（10.0％）获得了再生植株并种植大田,表明基因型是影响小孢子胚胎发生的一个主要因素。4个杂交组合材料的胚胎发生率为0.08～0.86胚／蕾,平均为0.25胚／蕾。细胞学检测表明,本试验杂交组合材料的最适取样花蕾长度为3.5mm。大田取样采取切取花序,然后在4℃冰箱中插水加散射光保存4～5d不影响胚胎发生。热激培养2d后小孢子的膨大率是衡量小孢子胚胎能否发生的一个有效指标。     

油菜小孢子培养和双单倍体育种研究 Ⅰ.供体植株和小孢子密度对小孢子培养的影响

在油菜小孢子培养中,通过对供体植株两种生长状况和在NLN液体培养基中三种小孢子密度的研究表明,来自生长室的供体植株,每天摘除将开放的花朵,使其停留在蕾期阶段,油菜花蕾中处于单核期至双核期的小孢子同步化程度高,单核期小孢子核质比大,增长速度快,小孢子成胚的百分率高。平均每毫升NLN液体培养基中接种1个花蕾的小孢子的处理,成胚率最高,而且胚的分化较快。     

小麦游离小孢子培养的研究

在游离小孢子培养过程中认为子房共培养可显著地提高游离小孢子胚状体愈伤率和再生率 ,子房共培养以 2 0个子房为宜。低温子房共培养胚状体发生和愈伤率低 ,但绿苗分化率较高 ,施加PAA、谷氨酰胺对游离小孢子形成的胚状体有促进作用。麦芽糖是游离小孢子培养最好的碳源 ,以蔗糖、葡萄糖以及葡萄糖和果糖搭配作碳源均未获得胚状体。检查培养 3d后的小孢子活力发现 ,唯有麦芽糖作碳源培养的小孢子有活力 ;认为高浓度的蔗糖、葡萄糖以及葡萄糖加果糖对小孢子有毒害作用。当葡萄糖浓度达到 2 0mmol/L时就对小孢子有毒害作用且致死。当在麦芽糖培养基中培养 1d后加入高浓度的葡萄糖发现小孢子存有活力 ,而且随着起始培养天数的增加活力也增加。对Y77品系来讲 ,适宜小孢子培养的麦芽糖浓度为 0 12mol/L。饥饿和热激 (33℃ )预处理对游离小孢子培养有促进胚状体和愈伤形成的作用     

甘蓝型油菜小孢子培养中基因型及处理条件对成苗的影响

为进一步提高甘蓝型油菜小孢子培养效率,研究了基因型对甘蓝型油菜小孢子胚产量和再生植株自然加倍率的影响,以及小孢子振荡培养过程中光照与后期低温处理对胚状体一次成苗率和再生植株自然加倍率的影响。结果表明,基因型对小孢子培养胚产量和再生植株自然加倍率影响较大,D 393的胚产量和自然加倍率很高,分别高达119.87胚·蕾~(-1)和79.87%,D 393的自然加倍率是D 524的2～3倍;光照对一次成苗率和再生植株自然加倍率没有影响,4℃低温处理15 d能提高小孢子一次成苗率0.8～3倍。本研究获得了一个胚产量和自然加倍率都很高的甘蓝型油菜DH系D 393;综合考虑一次成苗率和加倍效率,在甘蓝型油菜小孢子培养进程中振荡培养阶段可能不需要光照,而在转入B 5固体培养基前应该对胚状体进行适当低温和时长的处理,可提高小孢子培养效率。     

小白菜小孢子胚状体诱导影响因素研究

以10个小白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响小孢子胚状体形成因素的结果表明,不同品种胚状体的诱导率不同;NLN培养基中大量元素减半有利于小孢子胚诱导,其诱导率达到100%;培养基中添加0.05 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA可以提高胚状体诱导率;活性炭和琼脂糖对诱导胚状体发生和发育有促进作用,可使子叶胚的比例达90%以上;花蕾经4℃低温预处理24 h后的成胚率显著提高.     

基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响

１７个用于大白菜常规育种的基因型在ＮＬＮ－１３液体培养基中进行游离小孢子培养，结果有１６个基因型经由小孢子胚胎发生途径获得小孢子胚。这些基因型包括从早熟晚熟的各种类型。各基因之间在小孢子胚胎发生频率方面存在很大差异，产量最高的两个基因型Ｔ１１和ＣＣ１１，平均每百花蕾分别达３５９２８和３４１３２个胚。供体植株生长环境对小孢子胚胎发生具有明显影响；在１０／２０℃（液／昼）的部分控温温室生长的供体植株，     

Response of different genotypes of Brassica carinata to microspore culture

Sixteen lines of Brassica carinata were evaluated for microspore culture and plant regeneration. The highest values of cell division and embryo yield resulted from buds between 2.5 and 3.5 mm long with 3 days of pretreatment at 32°C and plating densities of 100 000-150 000 microspores/ml. Ten out of 16 lines tested (63%) responded positively to microspore culture. In all breeding and F₁ lines, both cell division and embryo yield varied over a wide range, but embryogenic response was higher in F₁ lines than in the breeding lines.     

低温预处理对甘蓝型油菜小孢子胚胎发生的影响

研究了大田环境下栽培的甘蓝型油菜小孢子胚状体诱导过程中低温预处理的作用,结果表明:两个供试材料经过低温预处理,小孢子胚胎发生能力明显提高,同时,不同基因型要求的预处理时间不同。G369的胚产量在低温3d时达到最高,是对照的27.2倍,而Topas的胚产量在低温2d时达到最高,是对照的15.4倍。试验还统计了子叶型胚状体发生频率,发现与对照相比,处理后子叶型胚状体的频率呈下降趋势,表明低温预处理使小孢子胚发育同步性降低。     

不结球白菜游离小孢子培养成胚影响因素的研究

以17个不同基因型的不结球白菜为供试材料,对影响小孢子胚胎发生频率的若干因素进行了研究。结果表明:在秋冬季日光温室内,供试植株主花序第一朵花开后第7~14天取样,即初花期是最佳取样时期;不同基因型间小孢子胚胎发生能力差异很大,在接种的17个基因型中,有12个诱导出胚,诱导成功率71%;其中102号产胚量最高,达到32.78个/蕾;在已产胚材料中,产胚量最高的基因型是产胚量最低的基因型的546倍;较易抽薹型材料的产胚能力大于易抽薹型和不易抽薹型。以B5有机成分代替NLN有机成分,能够提高产胚量,尤其是对难成胚基因型的小孢子胚胎发生有较好的促进作用,甘露醇对小孢子分裂无促进作用。     

辣椒花药培养研究进展

归纳了辣椒花药培养过程中影响雄性胚胎发生的诸多因素,包括供试材料、小孢子发育时期、基本培养基、植物生长调节剂、培养基添加物质和温度胁迫处理,总结了小孢子胚胎发生的细胞学观察、再生株的倍性水平和单倍体基因组加倍研究,指出尽管人类已从细胞和分子方面对辣椒花药培养中诱导小孢子胚胎发生和形成胚状体有了进一步的认识,但尚未完全了解小孢子是如何被激发进入孢子体发育途径。当小孢子胚胎发生之谜完全揭开后,辣椒花药培养技术将会应用于更加广泛的领域。     

油菜小孢子培养和双单倍体育种研究Ⅱ. 影响甘蓝型油菜和芥菜型油菜种间杂种胚产量的因素

对甘蓝型油菜与芥菜型油菜种间杂交F1代杂种进行离体小孢子培养研究.结果表明:(1)F1杂种胚产量受亲本基因型的影响；(2)在F1杂种花粉可育率为30%～43%的范围内，F1杂种花粉可育率对有效胚产量无明显影响；(3)供体植株年龄对高胚产量的材料无明显影响，对低胚产量的材料有明显影响.(4)提出用花药颜色来选择适合的小孢子培养的     

Effect of donor plant age and inflorescence age on microspore culture of Brassica napus L.

Summary Effect of age of donor plants and age of inflorescence on embryogenesis in microspore culture of B. napus was examined. Microspores isolated from buds of older plants had a higher embryo yield than those of younger ones. The effect of the age of inflorescence showed a different pattern. In older plants, a higher embryogenesis response was observed in microspores isolated from buds of new inflorescences, while in young plants, microspores isolated from buds of old inflorescences showed high embryo yield. These different responses were considered to be attributable to a difference in the developmental stage of pollen at the time of microspore isolation. Our results indicated that microspores collected from older inflorescences and older plants have sufficient embryogenic potential when the optimum developmental stage of pollen was used. Frequency of embryo to plant conversion was influenced by the size of embryos subcultured, but not by donor plant age or the age of the inflorescence.     

Efficient doubled haploid production in microspore culture of loose-curd cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis)

We present an improved protocol for highly efficient production of doubled haploid loose-curd cauliflower plants (Brassica oleracea var. botrytis) via microspore culture. Our experiment explored factors such as donor plant treatment, flower bud pretreatment, embryo germination medium, and ploidy characterization of regenerated plants. Our technique efficiently produced embryos from both tight- and loose-curd donor plants, although the embryo yields were genotype dependent. We achieved a germination rate of around 30 % by employing a hormone combination of zeatin, indole-3-acetic acid, and 6-benzylaminopurine pretreatment culture. We also used 1–4 days of cold pretreatment of the flower buds, which were submerged into NLN-13 medium, to induce microspore embryogenesis. Analysis using an FCM Ploidy Analyzer showed that more than 50 % of regenerated plants were spontaneously doubled haploids, more than 25 % were tetraploids, and fewer than 7 % were haploid. Visual examination of plants in the field revealed that they had distinct phenotypic characteristics relating to their ploidy level. The efficient production of double haploids using our improved microspore culture technique is a promising approach that can be applied in loose-curd cauliflower breeding programmes and genetic research.     

诸葛菜小孢子培养及其单倍体减数分裂染色体配对观察

诸葛菜是一种极有价值的观赏、蔬菜、饲料和油料作物种质资源。为建立诸葛菜小孢子胚状体诱导再生植株技术,并为诸葛菜染色体组的起源与进化研究提供相关数据资料,本研究通过对诸葛菜游离小孢子的培养,研究了热激培养时间和活性炭浓度对胚状体产量的影响,并采用常规压片法对诸葛菜单倍体减数分裂染色体配对行为进行了观察。结果表明,添加活性炭和热激培养对胚状体诱导是必需的。在直径6 cm培养皿中培养4 mL密度为1花蕾花粉mL?1的小孢子NLN悬液时,每皿添加1mg活性炭和32℃热激3d的培养条件下子叶形胚状体和总胚状体产量最高,分别为每花蕾0.92±0.18个和1.32±0.25个。子叶形胚状体在1/2 MS培养基上萌发率为27.73%。花粉植株中自然加倍率为25%,加倍植株染色体数为24,单倍体植株染色体数为12。诸葛菜单倍体减数分裂染色体的平均配对构型为n=12=6.352I+2.008II+0.384III+0.12IV,具有二价体及三价体和四价体的细胞比例高达96%,少量细胞的12条染色体联会形成3个四价体,说明诸葛菜很可能是起源于染色体基数x=3的同源八倍体。本试验结果对于诸葛菜新材料新品种选育...     

甘蓝未受精子房离体培养体系的建立

利用供试的甘蓝CMS材料对影响甘蓝未受精子房离体培养诱导的主要因素（包括外植体的基因型、外植体发育时期、外源激素类型及浓度、高温预处理温度及时间、灭菌所用次氯酸钠浓度及时间等）进行研究,旨在对各种处理条件下诱导率情况进行分析。通过单因素、多因素等试验方法筛选出能够诱导成苗的未受精子房离体培养体系,明确甘蓝未受精子房离体培养发育途径。结果表明：基因型RM的诱导效果最好;当外植体处于花初期时最易诱导成功;诱导未受精子房产生愈伤组织的适宜培养基MS+0.5 mg/L 6-BA+ 2.0 mg/L 2,4-D+ 0.1 mg/L NAA,愈伤组织及雌核发育胚总诱导率可达28.57%;诱导愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为MS+ 0.1 mg/L NAA+ 0.2 mg/L 6-BA+ 0.05mg/L TDZ,不定芽分化频率可达57.12%;将不定芽转移至1/2MS+ 0.1 mg/L NAA培养基中可诱导生根,发育成完整植株;33℃高温诱导1 天的平均芽点数及芽点诱导率均最高,分别为2.85 和100%;次氯酸钠浓度为2%、处理时间为15 min时,平均芽点数和芽点诱导率均最高,分别为2.93和97%。