小麦HMW-GS毛细管电泳高效分离体系研究

小麦高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）与小麦品质密切相关。为构建高效HMW-GS分离体系,以中国春为标准样,通过HPCE(毛细管电泳）方式,在亚氨基二乙酸（Iminodiacetic acid,IDA）缓冲液基础上,系统分析了不同组分浓度、pH以及毛细管电泳参数对HMW-GS分离效果的影响。结果表明,以15% 乙腈（Acetonitrile,ACN）+75 mmol·L^-1 IDA+0.05% 羟丙基甲基纤维素（Hydroxypropyl methylcellulose,HPMC）（pH=2.5）为缓冲液,采用内径25 μm、检测长度27 cm毛细管,PDA检测波长200 nm,分离电压20 kV,运行温度30 ℃,样品10.0 kV进样5 s时,亚基分离效果最好,连续多次、多天重复电泳,均可获得稳定图谱。相比传统的Phos-gly体系,图谱分辨率更好,分离重现性更高（亚基出峰时间RSD值小于0.2%）。     

毛细管电泳法测定大豆籽粒中异黄酮含量

大豆异黄酮是一种具有重要生理活性的物质.本研究采用未涂层熔融石英毛细管柱(50 cm×75 μm,有效长度为42 cm),对电泳条件进行优化,拟建立快速检测大豆籽粒中异黄酮含量的毛细管电泳法.结果表明优化的最佳电泳条件为:以5%甲醇与95%硼砂(40 mmol/L,pH=10.0)溶液为电泳缓冲液,压力进样20 s,温度25℃,分离电压16.5 kV,检测波长为254 nm.在此条件下,大豆籽粒中6种异黄酮组分可在21 min内完全分离并具有良好的线性关系;6种异黄酮组分的峰面积和保留时间的相对标准偏差(RSD)分别在0.5%～2.4%之间和1.8%～3.8%之间,加样回收率在97.2%～103.3%之间,以鹰嘴豆芽素A作为内标可提高电泳的重现性.表明建立的方法灵敏、准确、经济、重现性好,适用于大豆籽粒中异黄酮含量的测定.     

小麦旗叶中甜菜碱的提取及其含量的比色测定

小麦旗叶中的甜菜碱经加热回流提取,并用比色法测定,其回收率在９１％￣１０５％之间,变异系数为５．４４％,相对偏差在０．２４％￣２．２２％之间。说明本方法具有较高的精密度、准确度和重现性。     

高效毛细管电泳（HPCE）对优质小麦HMW-GS的分离鉴定

为了解应用高效毛细管电泳(HPCE)技术定量分析优质小麦高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)的效果,利用HPCE技术对13个小麦品种的HMW-GS进行亚基识别和定量分析,并与传统的SDS-PAGE电泳图进行了比较.结果表明,在HPCE电泳图中HMW-GS的亚基出现顺序与SDS-PAGE略有不同,亚基1Ax1早于1Bx7出峰,并且在主亚基之后还有小的亚基出现,尤其是1Dx2主亚基后面有3个小亚基.定量分析表明,优质小麦品种陕627的HMW-GS,不论单个亚基、亚基组合还是亚基总和的含量都高于其他小麦品种,且均达极显著水平.优质小麦品种陕715的HMW-GS含量除亚基1Ax1与陕627接近外,其余亚基和亚基组合都显著低于陕627.西农5211的HMW-GS因为不舍有亚基1Ax1,尽管其他亚基、亚基组合含量接近于陕627,但HMW-GS的总含量显著低于陕627.优质小麦的优质亚基含量较高.HPCE具有高效、灵敏、再现性高等特点,能够快速识别和定量分析小麦HMW-GS,可以为小麦品质育种或组合选择提供参考.     

毛细管电泳法间接检测茶水中金属离子

本实验采用毛细管电泳间接紫外检测技术测定了西湖龙井茶中金属离子的质量浓度.实验研究了电解质组成,如络合剂、pH、间接紫外检测试剂和最佳测试条件.结果表明:最佳实验条件是采用压力进样(30mbar×5s),未涂层石英毛细管柱60um(id)×50cm,运行电压12KV,紫外检测波长21 0nm,柱温25℃,缓冲液为pH=4.82、含有浓度为6.0 mmol/L咪唑的乙酸溶液.在实验条件下6分钟内实现K 、Ca2 、Na 、Mg2 、Zn2 五种五种离子的分离和测定.迁移时间的相对标准偏差(RSD)＜0.5%,峰面积RSD＜5%(n=5),最低检测限依次为0.002mg/L、0.001mg/L、0.001mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L.该方法用于茶水中金属离子的含量测定,回收率95.59%-102.93%%,实验得到了满意的结果.     

小麦旗叶中甜菜碱的提取及其含量的比色测定

小麦旗叶中的甜菜碱经加热回流提取,并用比色法测定,其回收率在 ９１％ ～１０５％ 之间,变异系数为 ５．４４％ ,相对偏差在 ０．２４％ ～２．２２％ 之间。说明本方法具有较高的精密度、准确度和重现性。     

小麦Waxy蛋白亚基毛细管电泳分离体系的构建

为构建Waxy蛋白亚基的快速、高效、高通量毛细管电泳分离鉴定体系,为该亚基理化特性的分析、功能的发掘及含Waxy蛋白亚基种质的快速筛选提供参考依据,以小麦中国春为材料,采用逐一优化毛细管电泳体系参数的方法,系统研究了毛细管电泳中缓冲液各成分以及pH值对中国春中Waxy蛋白亚基出峰效果的影响,初步构建了普通小麦Waxy蛋白亚基的最佳分离体系。结果表明,在检测波长为214 nm、以0.05 mol·L^-1硼砂+8% 乙腈+0.8% SDS 溶液（pH 9.5）为缓冲液、分离电压20 kV、温度25 ℃、进样压力0.5 psi×5 s时,在6~9 min处出现峰高约0.015 au的三个主峰,且图形清晰,基线水平,重复性好。本研究构建的毛细管电泳系统分离体系可有效分离普通小麦Waxy蛋白亚基。     

毛细管电泳法测定槟榔多酚的组分

建立同时测定槟榔壳中6种酚类物质的高效毛细管电泳方法,研究分析不同浓度和不同pH值缓冲液对10种标准品(即:表儿茶素、儿茶素、柚皮素、芦丁、山奈素、阿魏酸、绿原酸、香豆酸、咖啡酸和没食子酸)的分离效果。结果显示,最佳电解缓冲液为0.1 mol/L、pH 9.0硼酸缓冲液,紫外检测波长为280 nm,分离电压为20 kV。该方法简便快速,能在20 min之内将10种酚类物质完全分离开,具有良好的精密度、回收率和线性关系。检测限范围为0.587 5～4.415 2μg/mL。     

硫辛酸和甜菜碱在小麦组织培养中的作用

为了研究不同浓度的硫辛酸和甜菜碱对农杆菌侵染后小麦愈伤组织的影响,选取小偃22、Z50和郑麦366的幼胚为外植体,进行农杆菌介导的遗传转化。在抑菌培养基中分别添加2、4和8 mmol·L~(-1)的硫辛酸和10 mmol·L~(-1)的甜菜碱,于5、10和15 d分别观察统计小麦愈伤组织的褐化和水渍化程度。结果表明,添加硫辛酸可有效降低愈伤组织的褐化程度,Z50中添加4 mmol·L~(-1)硫辛酸可使褐化程度较CK降低89.50%,但会提高愈伤组织的水渍化程度;添加10 mmol·L~(-1)甜菜碱对愈伤组织的褐化程度和水渍化程度均无明显影响。     

毛细管电泳图谱在小麦品种鉴定中的应用及其与品质的关系

为了给种质资源和育种研究、种子管理及新品种保护提供理论依据,用优质面包小麦中优9507和中优9701的4个杂交组合CA9614/中优9507、CA9614/中优9701、中优16/津麦2号//中优9701和中优9507/CA9640的46份高代品系,研究了毛细管电泳在鉴别亲缘关系很近的小麦品种中的应用潜力及醇溶蛋白组成与加工品质的关系.结果表明,4个杂交组合醇溶蛋白毛细管电泳分离峰的聚类分析结果与其选择历史一致,说明毛细管电泳是小麦品种(系)鉴定的有效方法.来自于同一F3或F4株系的亲缘关系很近的杂交后代在6～8 min或10～12 min的分离峰中存在较大差异,说明毛细管电泳能够用于鉴定亲缘关系很近的品种.品质表现一致的材料其醇溶蛋白组成无明显共性,说明醇溶蛋白组成对小麦蛋白质含量、SDS沉淀值和揉面特性等品质性状影响不大.     

多种小麦蛋白质酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究

研究了离子强度、缓冲液 p H、慢离子浓度、凝胶浓度等因素对小麦蛋白质 APAGE分离效果的影响 ,采用 L1 6 ( 41× 2 1 2 )正交试验进行了条件优化 ,所建立的甲酸盐 APAGE方法 ,具有分辩率高、重复性好的特点 ,可通过改变凝胶浓度实现不同蛋白的分离研究。因而此法在小麦蛋白分离、遗传研究、品种鉴定等方面具有广阔的应用前景     

毛细管电泳在UDPG-甜菊苷葡萄糖基转移酶活性测定中的应用

以Tris-硼酸作为毛细管电泳分离分析甜菊糖苷新体系,分离测定UDPG-甜菊糖苷葡萄糖基转移酶在适当条件下催化甜菊醇反应后的甜菊糖苷产物。结果表明,甜菊种子经能量75keV,剂量1014ions/cm2的碳、氮离子注入处理,UDPG-甜菊糖苷葡萄糖基转移酶活性比未进行离子注入的高;而且碳离子注入效果好于氮离子注入。因此,毛细管电泳可以作为离子注入处理植物种子检测的新方法,与文献报道的非Tris-硼酸体系相比,具有性能稳定、缓冲容量大、分离分析速度快、线性范围宽及分辨能力强等优点。     

毛细管电泳技术及其在作物贮藏蛋白研究中的应用

毛细管电泳 (Capillary Electrophoresis,CE)是近年发展起来的一种新的分离技术 ,已在蛋白质、氨基酸、核酸等的分离分析方面显示出极大的优越性。目前 ,国内外都开展了毛细管电泳技术用于作物贮藏蛋白分离分析的研究 ,并取得了很大的进展。本文介绍了毛细管电泳技术的发展概况、分离原理及其主要模式 ,总结了目前国内外在小麦、大麦、燕麦等麦类作物贮藏蛋白毛细管电泳分离中的研究进展 ,并展望了其应用前景。     

Tissue Localization of the Glycine Betaine Biosynthetic Enzymes in Barley Leaves

Abstract

Barley (Hordeum vulgare L.) plants accumulate glycine betaine (GB), a major compatible solute, in response to salt stress. In barley, GB is produced by a two-step oxidation of choline in a cooperative way in the cytosol and peroxisomes. In this study, we investigated the localization of two GB biosynthetic enzymes, choline monooxygenase (CMO) and betaine aldehyde dehydrogenase (BADH), in the tissues of barley plants (cv. Haruna-nijyo) grown under normal and saline conditions. Three-week-old barley plants grown hydroponically were treated with a hydroponic culture solution containing 200 mM NaCl for 72 h. Salt treatment resulted in increased expression of CMO and BADH proteins mainly in the leaves of barley but not in the roots. The expression of CMO protein was increased by the presence of NaCl in younger leaves but decreased in older leaves. The tissue localization of CMO and BADH proteins was analyzed by immunofluorescent labeling method using their primary antibodies and a fluorescein-conjugated secondary antibody. CMO and BADH proteins were constitutively co-localized in mesophyll and bundle sheath cells under both normal and saline conditions. A possible physiological function of GB in the salt tolerance of barley plants is discussed.     

渗透胁迫下水杨酸诱导的小桐子甜菜碱积累涉及Ca2+/CaM信号

本研究以小桐子幼苗为材料,在水培条件下,研究了外源水杨酸（SA）对PEG 6000胁迫下小桐子幼苗甘氨酸甜菜碱含量、代谢关键酶BADH活性和相关基因表达,以及Ca²⁺和CaM抑制剂对SA诱导甜菜碱积累的影响。结果表明:外源1.5 mmol/L SA处理可显著提高渗透胁迫下小桐子幼苗的甜菜碱含量、增加甜菜碱合成关键酶BADH的活性,以及上调JcCMO和JcBADH的表达水平。与单独用PEG处理的幼苗相比,SA处理也提高了渗透胁迫下小桐子幼苗的钙调素（CaM）活性。此外,CaCl₂处理能增强SA诱导的甜菜碱积累效应,提高BADH的活性和上调JcBADH的表达水平,而Ca²⁺通道阻断剂 LaCl₃、CaM抑制剂CPZ和TFP处理得到相反的结果。这些结果表明,外源SA处理可提高渗透胁迫下小桐子幼苗甜菜碱的生物合成能力,且SA诱导的甜菜碱积累过程可能受到Ca²⁺/CaM信号的调控。