暗纹东方鲀组织内TTX含量与钠离子通道基因表达特征分析

为了探究暗纹东方鲀（Takifugu obscurus）组织内TTX含量与含毒组织电压门控钠离子通道基因表达特征。分别采用酶联免疫法（ELISA）测定暗纹东方鲀肝脏、心脏等8个组织 TTX含量,实时荧光定量(RT-qPCR)方法检测电压门控钠离子通道α亚基基因家族成员scn1aa,scn1ab,scn4aa,scn4ab,scn5aa,scn5ab,scn8aa,scn8ab（以下简称“电压门控钠离子通道基因”）在各组织中的相对表达特征。结果显示：各组织中TTX含量由高到低为脑(9.521±2.816μg/g)、心脏(4.271±1.129μg/g)、鳃(1.586±0.527μg/g)、肌肉(1.494±0.938μg/g)、肝脏(0.913±0.206μg/g)、皮肤(0.902±0.235μg/g)、肠道(0.894±0.215μg/g)和眼(0.864±0.287μg/g),脑、心脏组织为弱毒性,肝脏、皮肤、肌肉、眼、肠道、鳃组织为微毒性。RT-qPCR结果显示scn1aa、scn1ab、scn4ab、scn5aa、scn8aa、scn8ab基因均在肝脏组织的相对表达量最高,scn4aa基因仅在肌肉组织表达,皮肤组织仅有scn4ab基因表达,且scn4ab基因在所有检测组织种均有表达,表达具有广泛性。钠离子通道基因在斑马鱼和暗纹东方鲀组织表达特征存在差异。scn4ab基因可能在东方鲀属鱼类耐受TTX分子基础中发挥重要作用。     

星点东方鲀及共生细菌河鲀毒素的提取与检测

从福建东山县附近海域捕获3尾野生星点东方鲀(Takifugu niphobles),采用液相色谱-串联质谱法检测了其组织及从组织分离到的细菌发酵产物的河鲀毒素(Tetrodotoxin,TTX)含量,结果显示星点东方鲀卵巢、肝脏和肌肉组织的TTX含量分别是56.247、0.380和0.118μg/g。根据16S r DNA测序的结果,从星点东方鲀的肠道中分离到一株鳗利斯顿氏菌属(Listonella sp.)细菌,从肝脏中分离到两种不动杆菌属(Acinetobacter sp.)细菌,从肌肉中分离到一株肠杆菌属(Enterobacter sp.)细菌,从卵巢组织中分离到一株牡蛎弧菌(Vibrio crassostreae),其中,除牡蛎弧菌和一株不动杆菌属细菌外,其他细菌的发酵液提取物中均检测到TTX。这是首次在河鲀鱼类组织中分离到产TTX的鳗利斯顿氏菌属细菌和不动杆菌属细菌。     

河鲀毒素诱导菊黄东方鲀膜转运蛋白基因的表达

为探究参与河鲀肝脏和皮肤累积河鲀毒素(Tetrodotoxin, TTX)的过程及相关调控基因,按每克体质量河鲀0.25μg TTX剂量尾部肌肉注射人工繁育的菊黄东方鲀(Takifugu flavidus),发现肝脏中TTX含量在注射后4 h时最高(19.12 ng/g),24 h下降到8.92 ng/g, TTX主要在肝实质细胞中累积;皮肤中TTX含量一直处于上升趋势,4 h为13.70 ng/g, 24 h为22.91 ng/g; TTX主要在皮肤表皮层、基底层细胞中累积。比较对照组和注射24 h后肝脏和皮肤转录组发现：TTX注射导致肝脏组织338个基因上调、350个基因下调;而皮肤组织有598个基因上调,同时有595个基因下调;RT-qPCR验证slc2a12、slc5a7、slc25a22、slc25a15、slc35a3、arap1、ugt2a2、ggt5、psbp2等膜转运蛋白相关基因在注射TTX后在肝脏和皮肤中的表达水平显著上调,可能与TTX累积过程有关。     

东海区黄鳍东方鲀寄生异尖线虫的鉴定及河鲀毒素检测

通过检查东海区283尾野生黄鳍东方鲀(Takifugu xanthopterus)样本,发现具有河鲀毒素的黄鳍东方鲀也受到线虫的感染。11月份黄鳍东方鲀体内异尖线虫感染情况最严重。通过形态学特征和线粒体DNA鉴定,黄鳍东方鲀组织内寄生的线虫为派氏异尖线虫(Anisakis pegreffii)。免疫组学分析发现异尖线虫体内含有河鲀毒素,进一步的高效液相色谱-质谱检测结果显示异尖线虫体内河鲀毒素含量为425 ng/g,这是首次发现寄生在东方鲀体内的线虫具有河鲀毒素。     

饲料中T-2毒素直接竞争ELISA检测方法的建立

采用直接竞争ELISA方法建立了一种快速检测饲料样本中T-2毒素残留的方法,在0～81μg/L范围内,T-2毒素的Logit(B/B0)与T-2毒素质量浓度的对数呈显著的线性关系,并对该检测体系的检测限、准确度、精密度等性能进行了测定。结果显示,该方法的IC50(半数抑制质量浓度)为2.8μg/L,对饲料样本的检测限为10μg/kg,样本添加回收率为77.6%～98.2%,变异系数为5.1%～12.0%。该方法操作简便、准确,检测时间短(仅需15min),适用于饲料样本中T-2毒素的快速检测。     

小麦中呕吐毒素的ELISA和HPLC法检测

[目的]考察自主研制的呕吐毒素ELISA试剂盒检测结果的准确性。[方法]对小麦样品进行加标回收试验,样品经提取后直接过滤即可用于ELISA检测,过滤后再过免疫亲和柱的样液同时经HPLC和ELISA检测。[结果]提取后的样品直接过滤后进行ELISA检测的回收率较高,在75%以上,相对标准偏差(RSD)在4.7%～10.6%;而过柱后经HPLC法和ELISA法检测,在加标浓度较高的情况下,两者回收率相当,分别为49.8%和49.7%,相对标准偏差(RSD)分别为1.8%和5.6%。[结论]采用呕吐毒素试剂盒检测小麦样品的结果准确可靠,方法简便快捷,适合大量样品的快速筛选。     

基于核酸适配体检测赭曲霉毒素A方法与酶联免疫法的对比研究

[目的]比较基于核酸适配体检测赭曲霉毒素A(OTA)方法与酶联免疫法。[方法]建立核酸适配体检测OTA标准曲线,进行样品加标回收率试验,并与酶联免疫法进行比较。[结果]核酸适配体法检测OTA在0.05～10.00 ng/mL具有较好的线性,饲料样品中添加OTA的回收率为92.0%～93.5%,与酶联免疫法相比,2种方法之间具有较好的一致性。[结论]该研究建立的基于核酸适配体检测OTA方法灵敏度高、准确度好,为研究饲料中OTA的快速检测方法奠定基础。     

酶联免疫法检测中华鳖肌肉中己烯雌酚

根据酶标免疫法原理，用含有针对兔IgG（已烯雌酚抗体）的羊抗体与待测中华鳖肌肉中的已烯雌酚发生特异性的结合反应。洗涤后，加入的酶标底物连接未结合的已烯雌酚抗体，在酶基质的作用下与无色发色剂生成有色产物。反应后于450nm处理量吸光度，吸光强度与样品中的已烯雌酚浓度成反比。该检测方法平均最低检测下限为0.0125μg/kg，平均回收率74.8%，变异系数为1.763-3.084%。表明本方法快速、灵敏、可靠，适合对已烯雌酚残留限量检测的要求。     

酶联免疫法检测中华鳖肌肉中己烯雌酚

根据酶标免疫法原理，用含有针对兔IgG（已烯雌酚抗体）的羊抗体与待测中华鳖肌肉中的已烯雌酚发生特异性的结合反应。洗涤后，加入的酶标底物连接未结合的已烯雌酚抗体，在酶基质的作用下与无色发色剂生成有色产物。反应后于450nm处理量吸光度，吸光强度与样品中的已烯雌酚浓度成反比。该检测方法平均最低检测下限为0.0125μg/kg，平均回收率74.8%，变异系数为1.763-3.084%。表明本方法快速、灵敏、可靠，适合对已烯雌酚残留限量检测的要求。     

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的比较分析

用研发的克仑特罗化学发光酶联免疫（CLEIA）试剂盒与克仑特罗酶联免疫（ELISA）试剂盒进行检测效果比对,结果显示,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,CLEIA试剂盒方法要比ELISA试剂盒方法更节省时间;CLEIA试剂盒IC50为400 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为201 ng·L-1和907 ng·kg-1,而ELISA试剂盒IC50则为1252 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为235 ng·L-1和993 ng·kg-1,CLEIA试剂盒方法的灵敏度要高于ELISA试剂盒方法的灵敏度。综合分析得知：CLEIA法比ELISA法灵敏度更高、反应时间更短。     

山羊关节炎-脑炎ELISA方法的建立及其应用

 应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA），检测了山羊关节炎-脑炎病毒（CAEV）试验感染山羊和自然感染山羊的血清抗体，确定了最适宜的反应条件。CAEV感染山羊血清终点滴度结果表明：ELISA比琼脂扩散试验（ID）敏感性高，对自然感染山羊检出率比ID高3%左右。CAE标准阳性血清和自然感染阳性血清预先被特异性抗原中和后的ELISA反应均呈阴性，从而证实了本方法的特异性。因此，本方法适于CAE的流行病学调查和监测工作。     

酶联免疫吸附法检测鸡蛋中三聚氰胺的残留

将三聚氰胺与琥珀酸酐反应以合成半抗原,再采用混合酸酐法合成人工完全抗原,然后免疫新西兰白兔获得针对三聚氰胺的特异性抗体(IC50为42 ng/mL),以此抗体为核心建立了检测三聚氰胺的间接竞争酶联免疫吸附检测法,检测限为8.5 ng/mL。鸡蛋样品以氨化乙腈提取,正己烷去脂,微孔滤膜过滤后检测;在空白样品中添加不同浓度的三聚氰胺,回收率范围为88.9%～96.1%,变异系数小于11.6%。表明:酶联免疫吸附法,快速、简便且灵敏,可作为鸡蛋或其他动物性食品中三聚氰胺残留的常规筛选方法。     

噬菌体展示技术在农药等小分子检测中的应用

噬菌体展示技术是将外源蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面融合表达,用于筛选和改造功能性多肽的生物技术,具有库容量大,结合特异性强等特点,现已被广泛应用于生命科学的许多领域。本文在系统介绍了噬菌体展示技术及其载体系统发展的基础上,对该技术在农药等小分子化合物免疫检测中的应用进行了综述。     

动物饲料中玉米赤霉烯酮ELISA检测方法的建立

为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量,建立酯联免疫检测法(ELISA).结果显示:该方法检测回收率范围为67%～99%,其最低检出限为0.1 μg/kg;以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析,并以HPLC法对同一批样品进行检测,两种方法回收率相关系数为0.956 1.证明建立的ELISA检测方法适合动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测.     

基于免疫分析的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法研究

为建立基于竞争酶联免疫分析(ELISA)的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法,使用2-D电泳结合MALDI-TOF/MS鉴定了杏仁的高丰度蛋白,分离纯化了杏仁40 ku prunin蛋白α链,并以此作为抗原制备了抗杏仁蛋白单克隆抗体,使用该抗体建立了检测杏仁蛋白质的竞争酶联免疫分析方法。该方法以杏仁可溶全蛋白作为标准品,IC50为19.6μg/m L,线性范围为5.0~100μg/m L(R2=0.990)。该方法特异性良好,和其他可食种子蛋白质无交叉反应。检测植物蛋白饮料样品的检出限为0.6 mg/m L,相对标准偏差10%。使用巴氏杀菌、超高温瞬时灭菌和高压灭菌的蛋白质平均回收率分别为96%、92%和81%。     

仔猪血清猪瘟抗体动态的数学模型

作者对8窝104头仔猪血清的猪瘟抗体用酶联免疫吸附试验间接法进行测定,在获得大量数据的基础上,使用多项式回归分析方法,建立了仔猪血清猪瘟抗体酶联免疫吸附试验测定A值(y)关于日龄(x)的回归方程,本模型的意义在于对各日龄(3日龄～25日龄)仔猪血清猪瘟抗体A值的观察值能进行点预测及区间预测。另4窝45头仔猪血清猪瘟抗体A值作为考验样本,考验样本值都落在置信度:勾0.90的预测区间之内。模型提示,猪瘟抗体水平的最低点在20～21日龄;猪瘟母源抗体的半衰期为11.86天。     

莫能菌素人工抗原合成及其多克隆抗体的制备

通过莫能菌素羟基与琥珀酸酐反应,合成半抗原莫能菌素-琥珀酰半酯,采用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联制备人工抗原,以此人工抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体.试验结果表明,莫能菌素结合抗原免疫家兔制备的抗体对莫能菌素具有很高的特异性、亲合性和选择性.用此抗体建立的莫能菌素间接竞争酶联免疫吸附检测方法的标准工作曲线I50值为37.9 ng/ml,最低检测限(I10)为2.09 ng/ml.