苹果属植物RAPD分析的影响因素及其稳定性研究

以富士苹果和山定子为试材对苹果属植物ＲＡＰＤ分析的最佳反应条件及其可重复性等进行了研究,结果表明,ＲＡＰＤ反应的的各个条件因子,包括模板ＤＮＡ浓度,引物浓度ｄＮＴＰ浓度,ＤＮＡ聚合酶的种类和浓度ＰＣＲ扩增循环数以及反应总体等都对ＲＡＰＤ结果有影响,都有其最适用量范围,各因子在低子最适值时会导致扩增带数的减少甚至无带,高于最适值则无出现带的弥散或缺失,苹果属植物ＲＡＰＤ分析最适反应条件为３５～５０μ     

桃属植物随机扩增多态性DNA分析的最适反应条件

以Ｙｕｕｚｏｒａ 桃为试材对桃属植物随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 分析的最佳反应条件进行了研究．结果表明桃属植物ＲＡＰＤ分析的最佳反应条件为：总反应混合溶液５ｕＬ 时,添加模板ＤＮＡ１０ ～３０ ｎｇ,Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶１ ～１ ．５ 个单位,随机引物１０ ～２０ ｐｍｏｌ,ｄＮＴＰ１００ ～２００ ｕＭ,ＭｇＣｌ２ ２ ．０ ～３ ．０ ｍ Ｍ 及５ ｕＬ１０ 倍反应缓冲液条件下扩增５０ ～５５ 个循环,能够获得具有良好的稳定性和重复性的ＤＮＡ扩增产物．ＰＣＲ反应溶液的各组成因素如低于最适浓度范围时会导致扩增带数的减少甚至无带,如高于最适反应浓度范围,则会出现带的弥散或缺失．     

家兔RAPD分析反应体系的优化

以家兔的基因组ＤＮＡ 为模板,研究影响家兔ＲＡＰＤ 扩增的因素。实验结果表明,Ｔａｑ酶、随机引物和Ｍｇ２ ＋ 浓度及模板ＤＮＡ 的纯度对ＲＡＰＤ 扩增影响较大。本实验建立了适于家兔ＲＡＰＤ 分析的反应体系：反应体积为２０μｌ,其中含有１ ×扩增缓冲液,２ ．０ｍ ｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２ ,０ ．１ｍ ｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０－２μｍｏｌ／Ｌ 随机引物,１ ．５ＵＴａｑ 酶,９０ｎｇ 模板ＤＮＡ     

菊属植物RAPD反应体系的建立

在ＲＡＰＤ反应中，有许多因素影响结果的稳定性和准确性．该文选取了菊属６种植物，对ＲＡＰＤ各种反应条件进行了摸索．结果表明：菊属植物较为理想的反应体系为：２０μｌ反应体积含１０ｍｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ为８．３），５０ｍｍｏｌ／ｌＫＣｌ，２ｍｍｏｌ／ｌＭｇＣｌ２，０．００１％ｇｅｌａｔｉｎ，２００μｍｏｌ／ｌｄＮＴＰ，５０～２００ｎｇ引物，０．７５～１．０单位（Ｕ）ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，２～１０ｎｇ基因组ＤＮＡ．在２０个核苷酸引物情况下，反应条件为：９２℃、３ｍｉｎ预变性；９２℃、４５ｓ，５０℃、１ｍｉｎ，７２℃、２ｍｉｎ，循环４０周；最后一次延伸为７２℃、１０ｍｉｎ．应用上述反应体系进行扩增反应，反应产物在２％琼脂糖凝胶上以５Ｖ／ｃｍ电场强度电泳２～４ｈ，获得了满意的ＲＡＰＤ图谱     

甜瓜种质RAPD体系的优化研究

研究了不同ＤＮＡ提取方法的护增效果。采用Ｌ９（３＾４）正交试验设计,快速、有铲地确定了适合甜瓜的最佳扩增条件（包括ｄＮＴＰ、引物、Ｍｇ＾２＋和ＴａｐＤＮＡ聚合酶等浓度的最佳组合）。并通过试验确定了省时的ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应程序。最终得到了一个重复性好、清晰度高、较理想的甜瓜ＲＡＰＤ技术体系。     

苹果PAPD反应体系的研究

对苹果基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ扩增体系各参数进行筛选比较,建立的最佳反应体系为：模板ＤＮＡ １．０ｍｇ／Ｌ,引物１．５ｍｇ／Ｌ,ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．１ｎｏｌ／Ｌ（Ｌ．ｎｉｎ）,Ｍｇ＾２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄＮＴＰｓ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ。     

巢式RT-PCR检测昆明小鼠早期胚胎中G6PD基因表达

根据小鼠肌肉的６－磷酸葡萄糖脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）的ｃＤＮＡ序列设计并合成内外２对引物,以巢式ＲＴ－ＰＣＲ方法检测昆明小鼠１－,２－,４－,８－细胞期早期胚盈是否转录出Ｇ６ＰＤ的ｍＲＮＡ,结果发现１￣８－细胞期早期胚胎的ｍＲＮＡ均能以外引物扩增产物为模板通过内引物扩增出一条３７８ｂｐ特异性条带。表明昆明小鼠１￣８－细胞期早期胚胎的Ｇ６ＰＤ基因已表达,磷酸戊糖途径已是其代谢葡萄糖的主要方式之一。     

草鱼和鲤RAPD引物筛选及鱼种特异性分子标记

以草鱼和鲤为材料,提取基因组ＤＮＡ,制备ＲＡＰＤ－ＰＣＲ模板,对３个随机引物盒共６０个１０－ｍｅｒ引物进行了ＰＣＲ扩增,共筛选出７个较理想的可用于鱼种内或鱼种间群体遗传分析的随机引物．用这７个引物所获得的草鱼和鲤的ＲＡＰＤ指纹图谱平均带纹总数分别为４．２８±１．８９和６．７１±４．１９,多态性带纹总数分别为１．７１±１．６０和５．１４±４．７４．ＲＡＰＤ指纹图谱特征反映出草鱼比鲤具有更高的遗传纯度．７个引物共扩增出草鱼特异性带纹１８条,鲤特异性带纹３２条．大量特异性带纹的检出表明,两个鱼种间存在较大的遗传差异,同时也为鱼种间基因转移（特别是全基因组ＤＮＡ导入）提供了分子检测的候选遗传标记     

RAPD标记在高粱基因组分析中的应用

本实验研究了ＲＡＰＤ标记在高粱基因组分析中的可用性。Ｍｇ＾２＋,酶及引物浓度是优化ＰＣＲ反应的重要参数。经２２个引物对高粱品系,ＩＳ３６２０ｃ和ＢＴＸ６２３及其杂交Ｆ８的１２０株后代个体的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,在获得的５５个ＲＡＰＤ标记中,有４２个标记定位于已存在的ＲＦＬＰ高粱遗传图谱中,实验结果表明,ＲＡＰＤ标记可以稳定遗传。     

IBV S1基因不对称PCR的研究

ＤＮＡ模板为ＩＢＶ广东地方株Ｄ４１经病毒ＲＮＡ提取后反转录而获得；两引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列；跨幅为１．７ｋｂ。当限制性引物（Ｏｌｉｇｏ ３’）终浓度为０．８ｍｇ／Ｌ、两引物比例为１∶１０时，即得到不对称ＰＣＲ的预计单链和双链ＤＮＡ产物。此研究结果及不对称ＰＣＲ反应条件为国内首次报道。