应用间接荧光抗体法检测鱼类嗜水气单胞菌的试验研究

作者制备了鱼类嗜水气单胞菌（AH）－77株兔抗血清,建立了应用间接荧光抗体试验（IFA）检测鱼类嗜水气单胞菌病原的方法。该法能有效地检测人工感染鳟鱼体内的嗜水气单胞菌病原体,对杀鲑气单胞菌、荧光假单胞菌、爱德华氏菌不发生交叉反应。整个过程可在2．5h内完成,是一种有前途的鱼类嗜水气单胞菌快速诊断方法。     

蒲公英内生真菌对2种鱼类病原菌抑菌效果研究

试验旨在研究蒲公英内生菌对由嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌引起鱼类疾病的作用效果,分为2部分:体外抑菌试验和攻毒试验.试验所用的嗜水气单胞菌菌液质量浓度为890万CFU/mL,迟缓爱德华氏菌菌液质量浓度为780万CFU/mL.体外抑菌试验结果显示,蒲公英内生菌对体外培养的2种细菌均有显著抑制效果,嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为24.50 mm,对迟缓爱德华氏菌的抑菌圈直径为30.53 mm.攻毒试验以黄河鲤鱼为试验鱼,注射量为0.2 mL/尾.攻毒试验设5个处理组,即对照组、注射嗜水气单胞菌攻毒组、嗜水气单胞菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组、迟缓爱德华氏菌攻毒组和迟缓爱德华氏菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组.攻毒试验显示,迟缓爱德华氏菌攻毒后投喂含有蒲公英内生菌饲料组累积病死率显著高于未注射致病菌的对照组,低于注射致病菌投喂普通饲料的试验组.嗜水气单胞菌攻毒组与嗜水气单胞菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组试验鱼累计病死率无显著性差异.     

嗜水气单胞菌Lamp检测方法的建立及应用

基于嗜水气单胞菌气溶素（aerolysin）基因的序列，设计了1套引物，通过条件优化，成功建立了针对致病性嗜水气单胞菌的环媒恒温基因扩增（Lamp）检测法。采用Lamp法对病原菌进行了扩增，并对病鱼血样进行了检测。结果表明，该法只检出致病性嗜水气单胞菌。对不同浓度的细菌悬液扩增结果表明，Lamp检测嗜水气单胞菌的最低菌液浓度为1．4～14／μL。     

天然植物复合提取物对罗非鱼的影响

为研究在饲料中添加天然植物复合提取物对罗非鱼感染嗜水气单胞菌后成活率及头肾组织酶活力的影响，试验设计了5个天然植物复合提取物浓度梯度的等氮等能饲料。饲料中天然植物复合提取物的添加量分别为0、0．05％、0．10％、0．15％和0．20％，饲喂8周后，每组取15尾鱼注射嗜水气单胞菌液。试验结果表明，饲料中添加天然植物复合提取物有助于提高感染嗜水气单胞菌后罗非鱼的成活率，并能显著提高头肾溶菌酶、超氧化物歧化酶和酸性磷酸酶的活力。以感染嗜水气单胞菌后的成活率和头肾组织酶活力为指标，罗非鱼饲料中天然植物复合提取物的适宜添加量为0．10％～0．15％。     

改良DHL培养基分离嗜温有动力气单胞菌的实验研究与评价

嗜温有动力气单胞菌是指嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、豚鼠气单胞菌（Ａ．ｃａｖｉａｅ）和温和气单胞菌（Ａ．ｓｏｂｒｉａ）,后两种的性状与嗜水气单胞菌基本相同。该菌对水产养殖业的危害主要是引起各种鱼类及鳖等的败血症,给水产养殖业带...     

大熊猫嗜水气单胞菌和克雷白氏菌的分离鉴定

从腹泻的大熊猫粪便中分离到2株细菌，用Biolog MicroStation细菌自动生化鉴定工作系统鉴定为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）DNA1群和肺炎克雷白氏菌肺炎亚种（Klebsiella pneumoniae SS pneumoniae）。试验表明，2菌对小白鼠有极强的致病性，对菌必治和百菌除敏感。     

鱼源气单胞菌的主要特性研究

对分离于草鱼肠炎、白鲢鱼打印病、鲢鱼白皮病、草鱼烂鳃、鲤鱼体表出血感染及甲鱼败血症等病例的80株细胞进行了主要特性研究。结果表明均为气单胞菌属（Aeromonas)的细菌，其中嗜水气单胞菌（A.hydrophila)29株（占36．25％）、豚鼠气单胞菌（A.caviae)38株（占47．5％）、温和气单胞菌A.sobria）13株（占16．25％）。在被检验的病例中，或为其中一种气单胞菌的单独感染，或为两种、三种气单胞菌的混合感染。经做人工感染试验检查，表明这些分离菌均为相应感染症的致病菌。     

鱼源嗜水气单胞菌对氟苯尼考的耐药性分析

为阐明淡水鱼的主要致病菌嗜水气单胞菌对氟苯尼考的耐药现状,本试验采用纸片扩散法和浓度稀释法分别定性、定量检测了2010年9月至2013年5月期间收集的26株鱼源嗜水气单胞菌对氟苯尼考的耐药性,利用PCR法检测菌株携带氟苯尼考耐药基因的情况。结果显示,北京地区的鱼源嗜水气单胞菌对氟苯尼考的耐药率为15.38%,氟苯尼考对其最小抑菌浓度（MIC）主要集中在2～4 μg/mL,5株菌对氟苯尼考的MIC超过8 μg/mL,1株分离菌具有氟苯尼考耐药基因floR。结合以往数据及其他省市的相关数据,结果表明鱼源嗜水气单胞菌对氟苯尼考已呈较高的耐药率和耐药浓度,且位于质粒上的floR基因阳性菌株有传递该基因给其他种属鱼类致病菌的风险。因此,有必要科学规范氟苯尼考在水产养殖中的应用。     

自制“鱼病康—Ⅱ”对美蛙膨气红腿病的防治试验研究

新研制的中西药“鱼病康－Ⅱ”对美国青蛙膨气红腿病病原菌嗜水气单胞菌和假单胞菌有强烈的杀灭作用。其最小抑菌浓度（ＭＩＣ）为０．００２ｍｇ／ｍＬ,最小杀菌浓度（ＭＢＣ）为０．００４ｍｇ／ｍＬ,中药Ａ剂和西药Ｂ剂的ＦＩＣ指数为０．６２２,杀菌时呈显著协同作用效应。给蝌蚪和蛙以１０倍高剂量连续投服“鱼病康－Ⅱ”７ｄ无明显毒副作用。     

致病性嗜水气单胞菌耐喹诺酮类药物菌株的分离鉴定

对吉林省内12个水域采集和送检的66尾病鱼进行了细菌分离鉴定，共检出46株嗜水气单胞菌疑似菌，通过生化试验结合PCR扩增气溶素基因Aer，确定其中22株为致病性嗜水气单胞菌。进一步采用纸片扩散法和双倍稀释法测定嗜水气单胞菌分离株对多种抗生素的耐药性，其中有4株对喹诺酮类药物耐药，并且为交叉耐药，耐药菌检出率为18．2％，纸片扩散法检测其对喹诺酮类药物的抑菌圈均小于19mm。将病料中分离的8株嗜水气单胞菌负染后电镜观察，耐药菌表面有许多大小不同的球形结构，而敏感菌表面则为细丝状菌毛结构。     

疑似草鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

试验对疑似嗜水气单胞菌草鱼的肝脏、脾脏、肾脏组织进行嗜水气单胞菌的分离鉴定。通过普通营养琼脂、胰蛋白大豆琼脂及生化试剂等的分离培养与生化鉴定后,获得3株细菌;16S rRNA通用引物检测3株细菌的基因序列比对确定菌株后,对确定的草鱼嗜水气单胞菌进行回归试验确认其致病性,然后采用临床上常用的阿奇霉素、阿米卡星、链霉素等10种抗生素进行药敏试验。结果表明,经过分离培养、生化鉴定及16S rRNA通用引物鉴定后确定3种菌株分别为嗜水气单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和腐败斯瓦尼菌,确定的嗜水气单胞菌回归试验证明其具有致病性;药敏试验显示阿奇霉素对腐败斯瓦尼菌和嗜麦芽窄食单胞菌敏感,其抑菌直径分别为105、95 mm,阿米卡星对嗜麦芽窄食单胞菌、嗜水气单胞菌和腐败斯瓦尼菌这3种菌都较敏感,抑菌直径分别为105、95和93 mm。结果表明,疑似为嗜水气单胞菌病的草鱼有3种细菌感染,其中鉴定的嗜水气单胞菌是致病菌,常用抗生素阿米卡星对3种菌都有抑制作用,而仅对腐败斯瓦尼菌和嗜麦芽窄食单胞菌敏感的是阿奇霉素。     

致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法的建立

根据我国致病性嗜水气单胞菌分离株AH－78－2气溶素（Aer）基因保守区的测序结果，设计2对引物，建立了检测嗜水气单胸菌的PCR方法，通过对20株嗜水气单胞菌，12株相关菌株及157份送检病料的检测，并与SPA－CoA检测结果对照表明，PCR方法具有较高的敏感性和特异性，可检测最低100cfu的细菌，该方法的建立为致病性嗜水气单胸菌的检测提供了一种简便，快速的新途径，以我国分离株的序列设计引物使该法具有更强的针对性。     

嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的纯化及特性分析

为阐明嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的性质及其在致病过程中的作用，试验以我国分离的嗜水气单胞菌J-1株为研究对象．纯化了其弹性蛋白酶．并对该酶进行热稳定性、蛋白酶抑制剂抑制作用、金属离子影响和致病性等特性分析。结果表明．嗜水气单胞菌J-1株的培养上清经35％～60％硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析，可获得纯化的弹性蛋白酶．SDS-PAGE显示单条带．相对分子质量约38000。该酶对热稳定，EDTA可抑制其活性，PMSF对其无影响，金属离子铜、锌、钴等抑制其活性。说明此酶属于热稳定金属蛋白酶。腹腔注射纯化的弹性蛋白酶能致死小鼠．其对小鼠的LD50为6．4μg（0．2mL）．表明该酶是一种直接致病因子。     

罗非鱼出血病病原鉴定及疫苗的研究

从患出血病罗非鱼的血液、肝、脾分离出嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）,经动物回归和理化试验鉴定,确诊嗜水气单胞菌为罗非鱼出血病病原;用分离菌制成的饵料吸附型疫苗进行田间试验,免疫组罗非鱼保护率为８７．１％,未免疫组存活率为５９．９％,两组间差异极显著（Ｐ〈０．０１）。     

3种抗生素对3种常见鱼类病原菌的抑菌活性研究

为研究盐酸恩诺沙星、乳酸恩诺沙星和乳酸诺氟沙星对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)的体外抑菌活性,本实验通过测定抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和杀菌曲线,研究3种常用喹诺酮类抗生素药物对3种水产病原菌的体外药效学特性.结果表明:乳酸诺氟沙星对嗜水气单胞菌和哈维氏弧菌抑菌效果最好,MIC分别为0.244μg/mL和1.954μg/mL:盐酸恩诺沙星对鳗弧菌抑菌效果最好,MIC为0.122μg/mL;8 MIC的乳酸诺氟沙星药液在12 h内完全杀灭嗜水气单胞菌,在24 h内也能全部杀灭哈维氏弧菌,8 MIC的盐酸恩诺沙星药液在24 h内全部杀灭鳗弧菌.本研究为3种抗生素在水产养殖中的应用提供实验依据.     

蛙类病害的诊断及防治方法

病因 此病病因较复杂，在病蛙中己分离到数种病毒，其中包括嗜水气单胞菌、点状胞菌、减产菌、荧光假单胞菌以及变形菌等，以嗜水气单胞菌为主要病原菌。     

5种中药提取物及其组合对嗜水气单胞菌的体外抑制作用

试验旨在探讨大黄、诃子、五倍子、黄连、黄芩5种中药及其组合对嗜水气单胞菌的体外抑制作用。试验测定了5种中药的水提物和醇提物对3株嗜水气单胞菌的抑菌圈、最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）及对嗜水气单胞菌生长的影响，采用棋盘交叉法测定了5种中药联合抑菌作用。结果显示，大黄和黄芩醇提物的抑菌圈显著高于其水提物（P<0.05），诃子和黄连水提物的抑菌圈显著高于其醇提物（P<0.05），五倍子水提物和醇提物抑菌圈大小相近。五倍子抗菌作用最强，其水提物和醇提物MIC为7.81～15.63 g/L，大黄醇提物和诃子水提物抗菌作用次之，MIC均为15.63～31.25 g/L。选择抑菌作用更强的提取物两两组合，五倍子水提物与其他4种中药提取物组合、大黄醇提物与黄连水提物组合均为协同作用；黄连水提物与黄芩醇提物组合为相加作用；大黄醇提物与黄芩醇提物、诃子水提物与黄连水提物组合均为无关作用；诃子水提物与黄芩醇提物组合为拮抗作用。研究表明，5种中药对嗜水气单胞菌均具有抑制作用，五倍子作用最强，五倍子水提物与其他4种中药提取物两两组合、黄连水提物与黄芩醇提物组合均可增强抗菌活性。     

单宁酸对嗜水气单胞菌转录组影响的研究

嗜水气单胞菌作为水产养殖业中的主要病原菌，严重危害该产业的发展。为探究单宁酸对嗜水气单胞菌的抑菌作用及其转录组的影响，本实验将单宁酸2倍倍比稀释(8μg/mL～8 192μg/mL)后，测定单宁酸对嗜水气单胞菌ATCC 7966株的最小抑菌浓度(MIC)；将嗜水气单胞菌分别与不同浓度的单宁酸共培养，根据所测细菌OD600nm值(共测24 h)，绘制细菌的生长曲线。结果显示，单宁酸对嗜水气单胞菌的MIC为2 048μg/mL；浓度低于64μg/mL (临界值)单宁酸处理后不影响嗜水气单胞菌的生长。因此本实验采用64μg/mL的单宁酸与嗜水气单胞菌ATCC 7966株共培养，每组重复4次，12 h后提取各组嗜水气单胞菌总RNA，反转录为cDNA后构建cDNA文库，再利用随机引物，经PCR扩增、定量后，采用Illumina HiSeq测序平台进行转录组测序(RNA-Seq)。通过计算每个样品中r RNA的占比(rRNA%)及碱基的错误率对测序数据质控；采用Bowtie2将获得的各组嗜水气单胞菌测序数据与GenBank中嗜水气单胞菌ATCC 7966株参考基因组比对，分析它们之间的相似性。结果...     

鸭源致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定与生物学特性分析

为了解嗜水气单胞菌的肉鸭健康带毒、致病与耐药情况,对贵州省三穗县某肉鸭屠宰场临床健康肉鸭随机取样,进行嗜水气单胞菌的分离鉴定、毒力基因检测及耐药性分析。结果显示,分离菌具有嗜水气单胞菌典型的培养特征,菌落形态、菌体形态和生化特性均与嗜水气单胞菌相符;16 S rRNA基因序列系统进化树显示,该分离菌与嗜水气单胞菌聚为一支,同源性均>99%;动物回归试验显示,该分离菌对小鼠有较强的致病性;毒力基因PCR检测显示,该分离菌携带aer、hly、epa、act、alt和ahp等6种毒力基因;药敏试验结果显示,该分离菌对复方新诺明、磺胺嘧啶、环丙沙星和诺氟沙星等15种药物耐药;耐药基因PCR检测显示,该分离菌携带qnrB、Sul1和IntI1等3种耐药基因,与药敏试验表型相符。研究结果为嗜水气单胞菌的生物学特性研究及防控提供参考依据。     

罗非鱼出血病病原鉴定及疫苗

从惠出血病罗非鱼血液、肝脏、脾脏中分离到一株细菌,经理化鉴定,该菌为嗜水气单胞菌,动物回归试验阳性,认为该罗非鱼出血病是嗜水气单胞菌引起。用该分离菌制成的饵料及附型疫苗田间免疫罗非鱼成活率达87．1％,未免疫组成活率仅59．9％。