硅藻土和滑石粉作为荧光假单胞菌P13菌剂的载体研究

从菌体的吸附和释放两方面,研究了硅藻土和滑石粉在不同条件下作为生防菌荧光假单胞菌P13菌剂载体的可能性。结果表明,在温度为25℃,pH7时,两种材料对P13菌剂有良好的吸附效果,且吸附速率较快。扫描电镜分析表明,吸附过程可能与硅藻土表面和微孔结构,滑石粉片层结构以及菌体形态有关。在制备干粉状菌剂时,硅藻土和滑石粉与溶剂比例分别为100：50（m/v）和100：24（m/v）时,菌体释放率较高。表明硅藻土和滑石粉是良好的载体材料且具有应用前景。     

不同微生物菌剂对烟草根结线虫病控制效果研究

根结线虫病是一种重要的烟草土传病害,在局部烟区发生严重,为了筛选有效的微生物菌剂或药剂,本研究选取枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉、荧光假单胞杆菌、哈茨木霉等微生物菌剂和阿维菌素、阿维·丁硫等化学药剂,按照推荐使用方法提前处理土壤,调查病害发生情况和防治效果.结果表明,不同微生物菌剂处理对烤烟田间生育期影响不大,阿维菌素处理、荧光假单胞杆菌处理、阿维·丁硫微乳剂处理有效促进了烟草农艺性状,荧光假单胞杆菌处理后烤烟旺长期的各项农艺性状均显著高于对照处理.与对照处理相比,微生物菌剂处理后烤烟根结线虫病发生程度减轻,淡紫拟青霉处理对烟草根结线虫的防控效果最佳,达到79.45%;阿维菌素效果仅次之,相对防效为56.16%.     

浙江西兰花花球头腐病的病原鉴定

为明确近年来浙江省宁波市部分地区发生的西兰花花球头腐病的病原,通过田间症状观察、致病性测定、Biolog和脂肪酸(fatty acid methyl ester,FAME)分析将分离到的病原菌鉴定为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens.利用16S rDNA和核糖体DNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列构建的系统发育树也都显示分离的西兰花菌株与假单胞菌聚合成群,其中与荧光假单胞菌的亲缘关系最近,序列同源性分别为99%和98%.表明浙江省西兰花花球上发生的细菌性头腐病由荧光假单胞菌引起.     

荧光93菌体和代谢物对全蚀病菌和小麦生长影响的初步研究

对荧光假单胞菌工程菌剂“荧光93”菌体和代谢物的作用特性进行了比较。结果表明:该菌剂能保护小麦根系免遭全蚀病危害,对植株生长有促进作用。菌体的抑菌能力强于代谢物,浸种处理防效分别为44.8％和27.8％;代谢物具有更强的刺激植株生长作用,在无病条件下,代谢物灌根处理鲜重增加34.5％,菌体处理鲜重增加7.5％。培养基成份对代谢物的作用有一定影响:以马铃薯葡萄糖培养产生的代谢物,抑菌效果好;营养肉汁酵母粉培养产生的代谢物,促生作用好。据此推断,荧光93菌剂代谢产物中含有抑制全蚀病菌和刺激植株生长的物质。     

防治稻瘟病假单胞菌的筛选及效果评价

为筛选防治水稻稻瘟病的假单胞菌Pseudomonas,通过平板对峙试验从291株细菌中筛选获得对稻瘟病菌具有明显拮抗作用的菌株S149,对稻瘟病菌P131菌丝抑制率达到83.33%,发酵液和无菌上清液的抑制作用分别为67.39%和56.52%。16S rDNA序列分析显示,菌株S149与荧光假单胞菌P. fluorescens基因序列的同源性最高,结合形态观察,鉴定为荧光假单胞菌。对镰刀菌等10种植物病原菌有较明显拮抗作用,发酵液对稻瘟病菌分生孢子萌发和附着胞形成的抑制效果达到89%以上,无菌上清液对孢子萌发和附着胞形成的抑制作用达到81%以上。温室条件下对叶瘟的预防效果达到79.98%;田间试验结果证实对水稻幼苗有明显的促生效果,提高种子发芽7.15%、促进根长10.36%和增加株高10.33%;对叶瘟和穗颈瘟的田间防效分别达到73.32%和70.21%,与75%三环唑可湿性粉剂没有显著差异,与绿地康有显著差异。研究表明,荧光假单胞菌S149不仅可以用于防治水稻稻瘟病,而且可以促进水稻生长,具有较好的防治稻瘟病等多种真菌病害的应用潜力。     

育苗基质中添加不同微生物菌剂对烟草抗病性及产质量的影响

土传病害给烟草的产质量造成严重损失,而在大田施用生物菌剂进行生物防治往往因生防菌剂在土壤中适应增殖困难而效果不理想.本研究采用基质拌菌的方法,选取4种常用拮抗微生物菌剂(枯草芽孢杆菌菌剂、荧光假单胞杆菌菌剂、解淀粉芽孢杆菌菌剂和多粘类芽孢杆菌菌剂),探究不同微生物菌剂早期根际定殖对烟草青枯病的防控效果及对烟株农艺性状和产量的影响.结果表明:在育苗基质中加入微生物菌剂可以优化烟草苗期和团棵期农艺性状,提高烟草对青枯病的抗病性,其中以培育1 000株烟苗的育苗基质中加入多粘类芽孢杆菌500g(有效芽孢量5×10~3亿cfu)效果最好.本试验结果为育苗基质拌菌技术在烟草促生和抗病方面提供理论支撑.     

类芽胞杆菌W51菌剂制备及对番茄青枯病的防效研究

青枯病是由青枯劳尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种土传病害。本研究将制备得到的伊利石吸附W51菌剂作用于防治番茄青枯病的温室试验。结果表明,伊利石吸附W51菌剂中的伊利石最佳剂量为4%,最佳吸附时间为30 min,在该条件下伊利石对菌体的吸附率达到90.78%;温室试验中,伊利石吸附W51菌剂处理组在第14 d仍然表现出较好的防效62.29%,远高于类芽胞杆菌Paenibacillus sp.W51菌悬液处理组的42.91%。本研究表明,伊利石吸附W51菌剂相对于单一的类芽胞杆菌Paenibacillus sp.W51对番茄青枯病有较高的防治效果。     

绿色荧光蛋白标记荧光假单胞菌P303及其生存能力检测

构建了含有荧光假单胞菌自身启动子PP303的中间质粒载体pGFP.然后利用mini-Tn5转座子,通过接合转移,将两个带有不同启动子的绿色荧光蛋白基因分别整合到荧光假单胞菌P303染色体上,获得了在488nm波长下发光稳定的P303m1和P303m3菌株.PCR鉴定和Southern印迹结果均证明绿色荧光蛋白已随机插入P303染色体.SDS-PAGE结果表明,含有PA1/04/03启动子的P303m3菌株GFP表达量低于含有PP303启动子的P303m1菌株,染色体标记的GFP表达量低于质粒标记.室内平板抑菌试验结果表明,P303m1与出发菌株P303抑菌活性相当,对九种植物病原真菌有较强的拮抗作用.定殖、生存竞争能力研究表明,荧光假单胞菌在自然土壤中和大白菜根际都具有较强的定殖能力.P303和P303m1在自然土壤中第60天的菌量分别为1.63×104和3.3×102cfu/g土(湿重),大白菜根际第50天的菌量分别为3.29×106和4.1×104cfu/g根(湿重).     

荧光假单胞菌Tn5诱变菌株防治小麦全蚀病的初步研究

 利用生物技术(转座子Tn5诱变)对荧光假单胞菌进行遗传改良获得对小麦全蚀病有更好防治效果的基因工程菌株。将大肠杆菌S17-1中psup2021值粒上的转座子Tn5转移到荧光假单胞菌CN12菌系的基因组内获得5100个Tn5突变体,转化频率为1.2×10^-7。与自然菌系CN12比较,7个突变体对全蚀病菌的离体拮抗作用提高到160-250%,其中3个突变体对温室苗期全蚀病防治效果也显著提高(p=0.01)。初步研究证明:(1)荧光假单胞菌中可能存在两类功能不同的拮抗作用基因(暂称为抗生基因和调控基因);(2)在目前抗病基因缺乏或难于应用的情况下,利用微生物或其有用基因达到防病增产的目的可能是一条有希望的途径。     

沼泽红假单胞菌PSB-06菌剂对番茄褪绿病的防效及其作用机制

为明确沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris PSB-06菌剂对番茄褪绿病毒（tomato chlorosis virus,ToCV）的抑制作用,连续3年在田间进行沼泽红假单胞菌PSB-06菌剂对ToCV的药效试验,并在室内研究其抗病毒的作用机制。田间试验结果显示,PSB-06菌剂处理能降低ToCV的发生,植株发病率均低于50%,均显著低于清水和氨基寡糖素处理;室内试验结果显示,PSB-06菌剂处理能抑制病毒传播,喷施PSB-06菌剂后的感病番茄的SA含量达532.67 mg/g,PI II和NPR1基因表达量也相对上升;同时,健康番茄与感病番茄的叶绿素含量均明显升高;经PSB-06喷施后番茄植株上的烟粉虱Bemisia tabaci生存数量降低。蛋白组学分析结果表明,PSB-06处理促使植物代谢及防御的相关蛋白均上调。表明沼泽红假单胞菌PSB-06菌剂能增强植物免疫和防御烟粉虱的能力,从而有效地控制ToCV的发生及传播。     

云木香内生细菌的分离鉴定及其对大丽轮枝菌的抑制作用

从药用植物云木香中分离得到41株内生细菌, 采用细菌16S rRNA基因测序的方法对这些菌株进行鉴定, 结果显示, 这些云木香内生细菌分别属于6个属, 其中假单胞菌属Pseudomonas和拉恩氏菌属Rahnella为优势菌属。采用对峙培养方法对这些菌株进行筛选, 发现其中12株内生细菌对大丽轮枝菌Verticillium dahliae具有抑制作用, 其中有2株属于拉恩氏菌属Rahnella, 7株属于假单胞菌属Pseudomonas, 3株属于沙雷氏菌属Serratia。12株内生细菌对棉花黄萎病的温室防效评估结果表明, 假单胞菌属菌株R1-6、R1-13和S1-2对棉花黄萎病的温室防效达到55%以上, 具有潜在的生产利用价值。     

活性氧与木质素对细菌Sneb825诱导番茄抵抗南方根结线虫侵染的响应

 根结线虫病严重威胁各类蔬菜作物的生产,是世界上最难防治的土传病害之一。利用生防细菌能够有效地控制蔬菜根结线虫种群数量并降低危害。荧光假单胞菌Sneb825是本实验室筛选出的对南方根结线虫病具有较高防效的生防细菌。本研究通过盆栽试验、裂根试验和温室试验验证了荧光假单胞菌Sneb825诱导番茄抗南方根结线虫侵染的防治效果;通过酶联免疫法(ELISA)和实时荧光定量PCR检测了番茄根系内活性氧与木质素含量及其相关基因表达量的变化。研究发现,Sneb825菌株发酵液不但能够有效降低南方根结线虫对番茄的侵染,而且对番茄植株有显著的促生作用。Sneb825菌株发酵液灌根处理并接种南方根结线虫二龄幼虫后,番茄根系内活性氧(10 dpi)和木质素含量(5 dpi)显著高于空白对照;活性氧合成相关基因RBOH1(10 dpi)和过氧化物酶基因Ep5C(10 dpi)以及木质素合成相关基因Tpx1(5 dpi)的表达量均达到最高值。研究结果表明活性氧和木质素的大量积累是荧光假单胞菌Sneb825诱导番茄抑制南方根结线虫侵染的防御对策之一。荧光假单胞菌可以有效的防治根结线虫病,在农业生产实践中具有潜在的应用前景。     

植物土传病原菌拮抗细菌的筛选与鉴定

从作物根际土壤中分离到1056株细菌，筛选出7个具有较强拮抗活性的菌株。室内测定对水稻纹枯病菌、辣椒疫病菌、瓜果腐霉、油菜菌核病菌、棉花枯萎病菌、茄根腐病菌、棉花黄萎病菌、番茄青枯病菌、甘蓝黑腐病菌等重要土传病原菌有较强拮抗作用；温室盆栽试验对番茄青枯病表现出较好防效，其中以BOH2和OH11效果较为明显，防效分别为90．9％和86．4％。通过形态观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析，确定OH11为产酶溶杆菌。BOH3为荧光假单胞菌，其余5个菌株为不同芽孢杆菌。     

构树上一种新的丁香假单胞菌致病变种的研究

 构树细菌性疫病是一种荧光假单胞菌引起的新病害。主要症状有叶片角斑,嫩梢肿大和幼枝溃疡。从江苏一带分离获得的12个构树菌株和3个桑树对比菌株进行交互接种试验,发现构树菌株与桑树菌株之间不能交互侵染其寄主。细菌学特征和LOPAT试验及其它37项生理生化和营养特性试验表明,两种菌的表型特征基本相似,仅在7种化合物的利用上存在差异。两种菌的血清学反应无相关性。细胞全蛋白SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱也略有不同。试验结果证明,构树细菌性疫病细菌属于假单胞菌属(Pseudomonas),丁香假单胞菌(P.syringae)的一个新致病变种,定名为Pseudomonas syrzngae pv.broussonetiae pv.nov.     

小麦条锈菌细胞质效应子Hasp8抑制植物基础免疫

为明确小麦条锈菌Puccinia striiformis f. sp. tritici效应子Hasp8的功能,以小麦条锈菌CYR31侵染水源11小麦叶片的cDNA为模板,通过PCR技术扩增获得Hasp8基因的完整编码区序列,采用qRTPCR技术测定Hasp8基因的表达情况,利用农杆菌介导马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)瞬时表达体系在烟草上验证Hasp8基因是否能够抑制由Bax蛋白诱导的细胞坏死,将Hasp8基因构建到pCAMBIA1302载体用于在烟草上瞬时表达Hasp8进行亚细胞定位以明确该效应蛋白的作用空间;并将Hasp8基因构建到p EDV6载体上用于荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens介导的瞬时表达系统以明确该效应蛋白是否能够抑制病原相关分子模式引发的免疫反应和效应蛋白诱导的免疫反应。结果表明,Hasp8基因编码117个氨基酸,N端含22 aa的信号肽;qRT-PCR结果显示,Hasp8基因在小麦条锈菌CYR31侵染小麦水源11的早期上调表达。烟草瞬时表达Hasp8基因能够抑制由Bax诱导的细胞坏死;烟草上亚细胞定位发现效应子Hasp8定位于细胞质和细胞核;荧光假单胞菌介导的抑制植物免疫试验结果显示效应子Hasp8能够抑制由荧光假单胞菌诱导的胼胝质积累,并且抑制由小麦条锈菌无毒性生理小种CYR23引起的过敏性坏死和活性氧积累,促进病菌的侵染,菌丝面积和菌丝长度增加。     

微生物菌剂处理增加了生姜土壤中有益微生物的相对丰度

作物连作易导致土壤中病原菌大量积累, 促使土传病害频发, 影响作物生长?本试验采用微生物菌剂(富含哈茨木霉Trichoderma harzianum TH7?淡紫拟青霉Purpureocillium lilacinum PL22以及高效枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis)处理具有多年生姜种植历史的地块, 并采用分离培养法和宏基因组测序技术对处理后土壤中的微生物进行检测, 明确微生物菌剂对生姜土壤中微生物群落组成的影响?结果表明, 与对照相比, 微生物菌剂处理后, 土壤中细菌属和种的数量增加, 而真菌属和种的数量减少?从微生物菌剂处理后的土壤中分离出3个门水平, 24个属水平和42个种水平细菌, 以及3个门水平, 20个属水平和24个种水平真菌, 其中分离频率较高的细菌和真菌种分别为温哥华假单胞菌Pseudomonas vancouverensis和Musidium stromaticum?从未经微生物菌剂处理的土壤(对照)中分离出导致生姜茎基腐病的病原菌尖镰孢Fusarium oxysporum和腐皮镰孢 F. solani?宏基因组测序结果表明, 微生物菌剂处理对真菌多样性的影响大于对细菌?与对照相比, 微生物菌剂处理提高了土壤中根瘤菌属Rhizobium?假单胞菌属Pseudomonas?芽胞杆菌属Bacillus等细菌属及Musidium?被孢霉属Mortierella等真菌属物种的相对丰度?综上, 微生物菌剂处理增加了生姜土壤中细菌属和种的数量, 增加了土壤中与有益微生物相关的细菌和真菌的相对丰度, 并且抑制了病原菌的生长?     

豆薯细菌性角斑病的病原鉴定

 在安徽滁州的豆薯叶片上发现一种由细菌侵染引起角斑症状的病害,从角斑上分离到具有致病性的非荧光的杆状细菌,菌株的表型特征、细菌学特征、LOPAT试验和生理生化试验表明该细菌与丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae van Hall)相似,BIOLOG系统鉴定结果与丁香假单胞菌豌豆致病变种(P.syringae pv.pisi)相近,接种试验表明豆薯菌株能侵染大豆、菜豆和眉豆,但对豌豆的致病性差;在豇豆、绿豆和蚕豆上不表现症状。结果表明豆薯细菌性角斑病是一种新病害,病原菌属于丁香假单胞菌群的一个新的致病变种,命名为P.syringae pv.pachyrhizus nov.     

假单胞菌产生的抗生素

假单胞菌属Pseudomonas群体庞大,广泛分布于土壤、水体和动植物中,并产生大量的次生代谢产物以适应环境的变化。抗生素为假单胞菌在自然生态条件下的生存提供了重要的竞争手段,同时也是生防假单胞菌防治植物病害的主要机制之一。本文介绍假单胞菌产生的抗生素种类、作用机制、不同浓度下抗生素的生物学功能,以及假单胞菌抗生素在医学和农业病害防治中的应用。     

金氏B培养基在中国的改进

 金氏B (KB)培养基是荧光假单胞菌检测中应用最广泛的培养基,但是,其中有些有助荧光色素产生的成分在中国不易买到。我们将用国产蛋白胨、英国产胰蛋白胨和国产琼脂制备的金氏B培养基与用Difco的(月示)蛋白胨3号利琼脂制备的金氏B培养基进行了比较。6株荧光假单胞菌的试验结果表明,二者平板上生长情况没有明显差异,但是用国产蛋白胨(上海生物化学试剂)利琼脂粉(上海生化试剂)制备的金氏B平板上有90-100%的菌落没有荧光出现,而用英国产胰蛋白胨(oxoid)(20g/1)和国产琼脂(深圳)(15g/1)制备的金氏B平板上出现稳定而强烈的荧光,后者与用Difco试剂制备的金氏B培养基相比还能在非荧光菌株与荧光假单胞菌混合涂平板时稍微提高非荧光菌株的回收率。     

4种微生物菌剂对辣椒主要病害的生物防治作用

本文选择4种不同微生物活性成分的生防菌剂,采用盆栽生物量测定、温室和田间小区试验对辣椒主要病害进行抗病效果及促生增产作用评价。结果表明,木霉-芽胞杆菌复合菌剂对辣椒的枯萎病、疫病、炭疽病和灰霉病防效分别达到72.2%、78.3%、71.9%和59.7%,枯草芽胞杆菌-粉红粘帚霉复合菌剂对辣椒4种病害的防效分别达到60.5%、62.1%、60.5%和50.9%;而淡紫紫孢菌菌剂只对辣椒炭疽病具有很好防效（77.5%）。同时,4种微生物菌剂对辣椒植株生物量均有显著促生作用,其中木霉-芽胞杆菌复合菌剂及枯草芽胞杆菌-粉红粘帚霉复合菌剂在盆栽试验中鲜重和干重增幅分别为132.79%、190.35%和211.80%、293.84%;两者在温室及田间小区试验中比对照增产182.3%、152.7%和65.0%、23.9%。本研究表明,生防菌剂可以替代化学药剂用于植物病害的防治,同时还能够促进作物植株生长,有增产作用。