高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究:Ⅱ.不同因素对胚性愈伤组织继代发生的影响

以从4个草坪型高羊茅品种成熟种子直接诱导获得的初始愈伤组织为起始材料，研究3种因素对胚性愈伤组织继代发生的影响。结果表明，继代培养基中添加BAP和硫酸铜以及提高蔗糖浓度均能促进胚性愈伤组织形成，提高胚性愈伤组织频率，其适宜浓度分别为：BAP0．1～0．2mg/L，硫酸铜2．5mg/L，蔗糖60g／L。这3种因素中，又以添加BAP的效果最好，添加硫酸铜次之。4个供试品种间胚性愈伤组织发生能力存在明显差异。     

马铃薯不同基因型幼芽茎外植体的组织培养

利用青薯168、青薯5号和青薯8号三个品种幼芽带节茎段和节间组织为材料,研究了马铃薯的再生体系,结果表明,愈伤组织诱导率为72．92％～92．59％,愈伤组织分化率为30．68％～51．13％,每个外植体形成的小枝梢数为2．3～9．1个,绿色小植梢生根长成健壮的小植株,故认为MS＋NAA0．25mg／L＋BAP1．5mg／L＋GA37mg／L＋蔗糖30g／L＋琼脂7g／L为愈伤组织诱导培养基．MS＋BAP2．25mg／L＋GA37mg／L＋KT2．0mg／L＋NAA2．25mg／L＋蔗糖30g／L＋琼脂7g／L为分化培养基组成的再生体系是有效的,特别对青薯8号更为明显。     

四川竹根姜胚性愈伤组织诱导和植株再生

选用四川竹根姜的茎尖组织,诱导产生了胚性愈伤组织,建立了高频再生体系。筛选出了适于胚性愈伤诱导及扩增最佳培养基MSN+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;胚性愈伤组织分化培养基MS+0.2 mg/L 2,4-D+5.0 mg/L BA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;根状茎形成培养基MS+3.0 mg/LBA+0.1 mg/L NAA+6.0%蔗糖+0.7%琼脂。在3.0%~6.0%的范围内蔗糖浓度越高越促进根状茎形成。     

马铃薯新品种陇薯10号再生体系的建立

以陇薯10号试管苗茎段为外植体，分别在5种培养基上进行愈伤组织诱导，比较接种后28d时的出愈率及愈伤组织的形态，并将胚性愈伤接到10种不同分化培养基上进行再生苗分化。结果表明：接种28d后，5种培养基均可诱导出大量的愈伤组织，MS＋2．0mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA＋3．0mg／LGA3＋0．5mg／L2，4-D培养基上胚性愈伤诱导率最高，生长状态最好。胚性愈伤在MS＋2．0mg／L6-BA＋2．0mg／LZT＋3．0mg／LGA3培养基上分化率最高，且分化苗粗壮。     

斑叶丽格海棠组织培养的研究

以斑叶丽格海棠的叶柄和叶片为外植体进行愈伤组织诱导、继代和再分化培养，结果发现：与叶片相比，叶柄愈伤组织分化芽的能力强；诱导愈伤的培养基为MS 6-BA0．5mg／L NAA1．0mg／L 3％蔗糖 0．7％琼脂；继代增殖的最适培养基为1／2MS 6-BA1．0mg／L NAA0．1mg／L 2％蔗糖 0．5％琼脂，增殖倍数为6～8；生根的最适培养基为1／2MS IAA0．5mg／L 1．5％蔗糖 0．5％琼脂。     

榅桲离体培养繁殖的研究

利用榅桲茎尖进行继代培养,建立了榅桲的离体再生体系。结果表明,适合离体叶片愈伤组织诱导的培养基为1／2MS＋KT0．5mg／L＋2,4-D1．0mg／L＋蔗糖30．0g／L＋琼脂6．5g／L;适合愈伤组织分化不定芽的培养基为MS＋TDZ3．0mg,／L＋NAA0．3mg／L＋蔗糖30．0g／L＋琼脂6．5g／L;适合叶片再生不定芽的培养基为MS＋TDZ2．0mg／L＋NAA0．1mg／L＋蔗糖30．0g／L＋琼脂6．5g／L;适合榅桲茎段生根的培养基为1／2MS＋IAA0．3mg／L＋蔗糖30．0g／L＋琼脂6．5g／L。     

宁夏玉米高效再生体系的建立及其影响因素

以4个宁夏玉米品种幼胚为材料,采用组织培养法,研究培养基类型、基因型、外源激素、头孢霉素(Cef)对玉米幼胚培养及再生的影响。结果表明,在愈伤组织诱导过程中,Ⅰ号和Ⅱ号培养基诱导率较高,宁玉12号和宁0816的胚性愈伤组织诱导率相对较高,达到85.3%和82.1%;6-BA对不同基因型愈伤组织分化率的影响不同,添加6-BA对愈伤组织的分化均有促进作用;此外,当Cef质量浓度高于500 mg/L时,愈伤组织分化明显受到抑制。最佳诱导培养基为基本元素N6+水解酪蛋白200 mg/L+脯氨酸690 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+肌醇100 mg/L+AgNO310 mg/L,最佳分化培养基为基本培养基N6+6-BA1.0 mg/L+蔗糖50 g/L。     

高羊茅组织培养基的选择

用不同种类的基本培养基及不同浓度2，4-D、6-BA，对本地高羊茅的种子进行愈伤诱导，结果表明：基本培养基种类对愈伤诱导无明显的效果；MS培养基下不同浓度2，4-D、6-BA对高羊茅愈伤诱导时间及出愈率差别很大，以9mg/L效果最佳，愈伤诱导率达70．2％左右；过高浓度2，4-D、6-BA对萌芽和愈伤的形成有负作用；愈伤组织分化以MS-PBA2.0mg/L-NAAO-5mg／L为最佳MS基本培养基，2，4-D浓度以9．0mg／L为最佳，最适合高羊茅愈伤组织诱导的培养基为MS＋9.0mg／L 2，4-D。     

草坪型高羊茅成熟种子胚性愈伤组织诱导及植株再生

以5种草坪型高羊茅成熟种子为外植体材料,探讨外植体消毒和不同激素组合对愈伤组织诱导、继代培养以及植株分化的影响。结果表明,不去种皮与去种皮相比,能显著提高高羊茅成熟种子发芽率和出愈率。猎狗5号和野马2号在添加2,4 D10.0mg/L的培养基中愈伤组织诱导率最高;新秀和颂歌的出愈率在2,4 D浓度为8.0mg/L时达到最高;野火的出愈率在2,4 D浓度为4 0～10 0mg/L时变化不大,仅为10.5%～11.2%。用3.0g/L的水晶洋菜(Gelrite)代替琼脂做培养基疑固剂可促进愈伤组织生长及向胚性愈伤组织转化;愈伤组织在含BA2.0mg/L和NAA0.5mg/L的MS培养基上植株分化率较高,其中猎狗5号在此培养基上的愈伤组织植株分化率达72.8%。     

超甜玉米自交系幼胚高效成株系统的建立

以超甜玉米自交系S1、S2、S3和粤甜 3号等为材料 ,建立了超甜玉米高效再生系统。研究结果显示 ,超甜玉米基因型、幼胚的大小是影响胚性愈伤组织生成的主要因素 ,幼胚长度在0 5～ 1 2mm之间时 ,胚性愈伤组织的诱导频率最高。培养基中蔗糖浓度和细胞分裂素浓度对胚性愈伤组织的分化和小植株再生频率有重要影响 ,低浓度的蔗糖 (2 0 g/L)和 6 -BA (2mg/L)获得的再生频率较高。继代培养中ABA处理可使愈伤组织的再生频率提高 1 6 8倍 ,IBA浓度在 3 0mg/L ,可以明显提高小植株生根     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导与分化

[目的]筛选再生能力强的基因型小麦品种,建立高效的小麦成熟胚高频植株再生系统。[方法]以小麦品种抗冻早-30、百麦4411和06-4046的成熟胚为外植体,以MS为基本培养基,添加不同激素,组配诱导、继代、分化和生根培养基,通过胚性愈伤组织诱导。探讨影响小麦愈伤组织诱导和分化的因素。[结果]2,4-D浓度为1—5mg／L时对3个小麦品种愈伤组织的诱导差异不大,诱导率均高于80％,但2,4-D浓度为2mg／L时更有利于诱导胚性愈伤组织,诱导率在90％以上;在抗冻早-30和百麦4411分化培养基中加入2mg／L KT有助于提高分化率和再生率,在06-4046分化培养基中加入0．5mg／L KT对小麦成熟胚的分化和再生苗比较有利。[结论]在MS培养基中添加2mg／L2,4-D和一定量的KT可促进小麦成熟胚愈伤组织的诱导和分化再生苗。     

玉米再生体系建立及其影响因素的研究

以玉米骨干自交系K12、137、87-1和综3的幼胚为外植体,研究基因型、胚龄、继代次数、诱导（分化）培养基中激素浓度对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导、保持和植株分化的影响。结果表明,基因型是玉米幼胚培养能力的主要影响因子。中等大小（1.0～2.0 mm）的幼胚都具有较高的愈伤组织诱导率。2,4-D浓度对玉米幼胚的胚性愈伤组织诱导率有很大的影响,而且不同基因型的最大诱导率所需的2,4-D浓度也不相同。为防止2,4-D浓度过高引起无性系的变异,本试验确定的诱导培养基的2,4-D浓度为2.0 mg/L。继代培养基中1 mg/L的2,4-D对胚性愈伤组织诱导和保持起关键作用。最佳分化培养基为N6盐＋B5有机＋2.0 mg/L甘氨酸＋1 g/L CH＋1.0 mg/L 6-BA＋30 g/L蔗糖。     

(木奈)幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油（木奈）幼胚为材料，研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2，4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响，结果表明，长轴为5—7．9mm低温处理18h的幼胚，诱导胚性愈伤组织的效果最好；使用山梨醇（浓度为3％）为碳源、含氮量低的WPM培养基，胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基；幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2，4-D浓度为2．0mg／L，培养基中附加5．0mg／LAgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。     

文冠果细胞悬浮培养技术研究

[目的]建立文冠果体细胞胚胎发生和快速成苗的悬浮培养体系,为文冠果的产业化和规模化发展提供参考。[方法]以文冠果新旧种子为材料,诱导体胚发生,进行文冠果细胞悬浮培养。[结果]适合胚性愈伤诱导的最佳培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋2,4-D0．5mg／L＋3％蔗糖;适合胚性愈伤组织不定芽诱导培养的最佳诱导培养基为MS＋6一BA1．0mg／L．4-NAA1．0mg／L＋3％蔗糖,且萌芽率最高;适合单细胞团再生植株培养的最佳培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．2mg／L＋3％蔗糖。[结论]NAA和2,4-D混合使用有利于胚性愈伤组织的形成;一定浓度的NAA对文冠果愈伤组织萌芽培养有较大的促进作用。     

超甜玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导及再生方法研究

研究超甜玉米自交系1132成熟胚愈伤组织诱导和植株再生频率的影响因素,丰富诱导愈伤组织的外植体来源。以1132成熟胚为材料,通过比较研究蔗糖、脯氨酸、2,4-D等因素对愈伤组织诱导率和分化再生的影响,确定适合1132成熟胚外植体愈伤组织诱导和再生的方法。结果表明,蔗糖浓度40g/L,脯氨酸1.4g/L、2,4-D浓度为4 mg/L的诱导培养基上愈伤组织出现最早,且愈伤组织诱导率最高,达到75%。在继代培养基中2,4-D浓度为2 mg/L,其他相同的条件下,愈伤组织继代性最好,最易产生胚性愈伤组织。植株再生培养通过含60g/L蔗糖的MS培养基培养2~3周,后转入含30g/L蔗糖的MS培养基培养再生植株的方法最好,可实现芽和根的同步再生。利用1132成熟胚诱导产生愈伤组织,并分化再生植株是对幼胚再生体系的有效补充,可以克服玉米基因工程育种研究中幼胚受季节限制的不利条件,丰富甜玉米基因工程育种中外植体的来源。     

东方百合胚性愈伤组织诱导和植株再生研究

为建立东方百合元帅、提拔、西伯利亚的高频愈伤体系,以幼叶、花丝、生长点为外植体,进行了不同激素组合的MS固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生研究。结果发现,Picloram比2,4-D更有利于胚性愈伤组织的诱导,幼叶、花丝更能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株,生长点的出愈率较低。幼叶在MS＋2mg／L Pieloram培养基,花丝在MS＋2mg／LPicloraIn＋0．1mg／L ABA培养基,生长点在MS＋2mg／LPieloram＋0．03mg／LTDZ培养基上能高效诱导出愈伤组织,来自幼叶的胚性愈伤组织在MS＋1．0mg／LBA＋0．1mg／LKT＋0．1mg／LIBA培养基上能高频再生出芽,来自花丝的胚性愈伤组织在Ms＋1．5mg／LBA＋0．3mg／LKT＋0．2mg／LIBA培养基上能高频再生出芽。愈伤组织生长呈直线生长趋势。     

草莓花药愈伤组织类型与状态调控研究

在草莓花药愈伤组织诱导及继代培养过程中,主要出现了3种类型愈伤组织：I型愈伤组织表现为生长缓慢、淡绿色、块状或粒状;Ⅱ型愈伤组织表现为生长旺盛、鲜白色、松软状;Ⅲ型(胚性)愈伤组织表现为生长较旺盛、鲜黄色、松脆状。草莓花药在F NAA0．2mg／L BA2．0mg／L 水解酪蛋白300mg／L培养基上诱导的愈伤组织多为I型,I型愈伤组织在含2,4-D浓度较高(3．0mg／L)的MS培养基上培养,转变成Ⅱ型愈伤组织,Ⅱ型愈伤组织在MS 2,4-D0．5～1．0mg／L BA0．05～0．1mg/L 水解酪蛋白400mg/L 谷氨酰胺150mg/L KCl 400mg/L培养基上培养,提高了其质量,而后将质量好的Ⅱ型愈伤组织转到附加KNO3 1140mg／L的MS培养基上,培养40d后在愈伤组织块边缘出现了黄色、颗粒状愈伤组织,将此状态的愈伤组织在MS 2,4-D 1．0mg/L NAA 1．0mg/L ZT 0．2mg/L 水解酪蛋白400mg/L 谷氨酰胺150mg／L KCl 400mg／L培养基上培养获得了Ⅲ型(胚性)愈伤组织。I型愈伤组织和Ⅱ型愈伤组织不适合建立细胞悬浮系,而Ⅲ型(胚性)愈伤组织很容易建立细胞悬浮系,并诱导出大量胚状体。I型愈伤组织能再生植株．Ⅱ型愈伤组织不能再生植株,Ⅲ型(胚性)愈伤组织经状态调控成I型愈伤组织后也能再生植株。     

高羊茅成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

[目的]优化高羊茅成熟胚的组织培养条件。[方法]以高羊茅成熟胚为外植体,MS为基本培养基,探讨不同浓度激素和激素组合对愈伤组织诱导、继代培养及植株分化的影响。[结果]添加2,4-D2.0mg/L的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,达63.5%;在1.0～4.0mg/L范围内,随着培养基中2,4-D浓度的降低,愈伤组织的颗粒性增强,致密性增加,含水量下降,其中MS＋2,4-D2.0mg/L为愈伤组织继代的最佳培养基;愈伤组织在含2.0mg/L6-BA和0.10mg/LNAA的MS培养基上植株分化率最高,达80.2%;将再生苗转移至不含植物生长调节剂的1/2MS培养基上进行增殖、壮苗,然后将其移栽入沙质壤土中,移栽成活率可达90%。[结论]该研究建立了高羊茅的高效再生体系。     

穗花杉组织培养初步研究

以穗花杉不同器官和组织为外植体诱导愈伤组织，通过茎段诱导腋芽(芽生芽)，然后由腋芽诱导不定根。试验表明，愈伤组织诱导中，表现生长良好的穗花杉器官为当年发芽的实生苗嫩茎，在不计污染情况下．以1／2MS 6-BAL5mg／L NAA0．5mg／L为培养基的诱导率可达100％；腋芽分化的适宜培养基为：MB[1／2MS(MS1／2大量元素、微量元素) B5(有机成分)，下同] KT1．5mg／L NAA0．5mg／L 蔗糖2．0％ 琼脂0．8％，诱导率可达60％；诱导不定根适宜培养基为：1／4MS IBA4．0mg／L NAA2．0mg／L 琼脂0．5％ 蔗糖2．0％。     

低温及碳源对拟南芥菜胚愈伤组织诱导和植株再生的影响

以低温处理1～4d的野生型拟南芥菜种子胚为外植体，分别培养在附加激素为2，4－D（0．05mg／L），BA（0．05mg／L）的B5和MS两种基础培养基上，每种培养基的碳源分别为蔗糖和葡萄糖．结果发现均有愈伤组织的形成，其中B5＋蔗糖培养基有较高的诱导频率；当蔗糖为碳源时，胚外植体先萌发出子叶，然后在下胚轴长出愈伤组织，而改用葡萄糖时，整个胚外植体都形成愈伤组织；将诱导出的愈伤组织转移到B5、MS和1／2MS3种附加2，4－D（0．05mg／L）和BA（0．5mg／L）培养基上进行植株的再生，发现在MS和1／2MS两种培养基上有芽的生成．再将生芽组织转接到1／2MS生根培养基上，均可诱导生根．剥去种皮与低温处理种子有相同的效应，都能打破种子的休眠，这表明低温打破种子休眠的效应部位不是在胚．