鸡TLR4基因表达水平与沙门氏菌感染关系的研究

为了研究鸡TLR4（toll like receptor 4）基因表达在调控鸡沙门氏菌感染中的作用,80只3日龄SPF鸡按随机分为2组,处理组经口注射鸡白痢沙门氏菌悬液10⁸ CFU/mL 0.50 mL,对照组注射同剂量生理盐水。每个处理组分别在感染后1、3、7和14 d随机取8只鸡处死,迅速取脾脏样品用于RNA提取。采用SYBR GreenⅠ染料实时荧光定量PCR（QPCR）,比较处理组和对照组TLR4基因mRNA相对表达量的变化。结果显示,在4个时间点,与对照组相比,处理组TLR4基因高表达,差异显著(P<0.05);尤其在感染后3和7 d,差异达到极显著水平(P<0.01)。结果表明,鸡沙门氏菌感染后,TLR4基因mRNA表达上调,TLR4基因在沙门氏菌感染中发挥重要作用。     

PCR检测感染鸡沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌

用ＰＣＲ技术检测鸡感染沙门氏菌ＤＮＡ并与常规细菌分离培养作比较。从感染鸡沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的鸡组织中提取ＤＮＡ。所用的一对引物是ＩｎｖＡ中的定向序列合成的，细菌分离自样品的顶培养物。用ＰＣＲ技术从感染鸡组织ＤＮＡ中扩增了２８４ｂＰ的一个片段，与预期的结果一致。用ＰＣＲ方法不仅可检测出细菌分离阳性鸡组织中的ＤＮＡ，而且可以检出细菌分离阴性鸡组织中的ＤＮＡ，从２０个感染鸡沙门氏菌２１ｈ后的样品中     

动物产品沙门氏菌污染情况调查

2007—2009年,应用荧光定量PCR方法对1669份分批采自屠宰场和冻肉库的动物产品增菌后进行沙门氏菌检测,共检出沙门氏菌阳性169份,总阳性检出率为10.13%;其中冻肉库检测样品264份,沙门氏菌阳性55份,鸡肉检出率为25.93%,猪肉检出率为11.76%,鸭肉检出率为30.95%,羊肉检测出率为15.38%,牛肉检出率为12.5%;屠宰场检测1405份猪肝,沙门氏菌阳性114份,阳性检出率为8.11%。结果表明,屠宰场和冻肉库的动物产品都有不同程度的沙门氏菌污染。     

基于pegB基因的鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别方法的建立

为建立一种能快速、准确、简便区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的方法,研究通过对鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌pegB序列进行分析,发现存在3个单核苷酸多态性位点,基于此建立了一种特异性PCR方法用于鉴别鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌。结果显示,该方法特异性强、耗时短,检测限为10.14 pg/反应。临床样品检测表明,该方法不仅具有良好的特异性,且操作比传统方法更为简便。该方法的建立为准确区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌提供了实用技术,将在分子检测中发挥重要作用。     

贵州地方黄牛不同组织中PPARγ基因表达水平研究

试验旨在研究威宁牛、思南牛、关岭牛和黎平牛不同组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors γ,PPARγ）基因mRNA的表达差异。以这4个贵州地方品种黄牛为试验动物,提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织的总RNA,设计PPARγ基因的实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在4个品种不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,PPARγ基因在4个品种黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织中均有表达,但在脂肪组织中的表达量高于其他组织,且差异极显著（P<0.01）,在脾脏和肺脏中也有较高表达,而在肾脏、肝脏、心脏和背最长肌中表达量较低;不同品种PPARγ基因的表达在部分组织中存在差异。研究表明,PPARγ基因在不同组织中的表达量存在差异,可能与其在不同组织中的功能有关,而品种对于PPARγ基因的表达影响不大。     

MC4R基因表达及其与鸡屠宰性状的相关分析

根据鸡MC4R mRNA和看家基因β-actin mRNA序列,分别设计1对引物,以半定量RT-PCR法研究不同品种鸡肾上腺中MC4R基因mRNA表达水平,并分析了其与屠宰性状间的相关关系。结果表明,京海黄鸡公鸡MC4R基因在肾上腺中的表达水平显著高于尤溪麻鸡公鸡（P＜0.05）;京海黄鸡公鸡的胴体重、胸肌重、腿肌重与MC4R基因在肾上腺中表达水平存在极显著相关（P＜0.01）;尤溪麻鸡公鸡的胴体重与MC4R基因在肾上腺中表达水平存在极显著相关（P＜0.01）,胸肌重、腿肌重与MC4R基因在肾上腺中表达水平存在显著相关（P＜0.05）。     

贝类中副溶血弧菌和沙门氏菌荧光定量PCR快速检测方法的建立

为适应进口鲜活水产品的快速检验,有必要建立快速检测多种病原生物的方法。本文针对鲜活水产品中常见的副溶血弧菌和沙门氏菌,设计了特异的荧光引物,建立了检测贝类中这两种细菌的荧光定量PCR体系,并进行了特异性与重复性试验。结果表明,在相同的反应条件下,副溶血弧菌和沙门氏菌均得到了特异性扩增,而阴性对照菌株均未见扩增。副溶血弧菌标准曲线在1.53×105~1.53×109拷贝/μL之间、沙门氏菌标准曲线在4.89×106~4.89×1010拷贝/μL之间有较好的线性关系。与传统的检测方法相比较,该荧光定量PCR方法检测贝类中的副溶血弧菌和沙门氏菌更为快速准确,结果直观,可以满足口岸进口水产品快速检测的需要。     

荧光PCR法检测鸡肉中沙门氏菌的研究

作者采用合成的基因探针和引物，对2株阳性标准菌株、2株野生菌株和1个无菌去离子水进行检测，结果准确可靠，整个试验过程在30 h内完成。可见，该法是一种特异、敏感、简便、快速的沙门氏菌检测方法，对快速通关将发挥积极的作用。     

雏鸡鼠伤寒沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌 混合感染的诊断

为对发病雏鸡群进行确诊,通过流行病学调查、病雏剖检观察及细菌分离鉴定,并对分离菌进行小白鼠接种观察,证实鸡群发生了由鼠伤寒沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌混合感染引起的禽副伤寒和禽伤寒,其中鼠伤寒沙门氏菌是主要病原,感染率高于鸡伤寒沙门氏菌。药物敏感试验结果表明,分离菌对多种常见抗生素表现敏感。     

家兔组织器官中Nramp1基因表达差异研究

本研究旨在检测家兔Nramp1基因mRNA在不同组织中的表达水平,为进一步阐明家兔Nramp1基因的生物学功能提供有用的方法和信息。根据GenBank中家兔Nramp1基因序列设计引物,采用基于SYBR GreenⅠ的Real-time PCR对家兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、盲肠、回肠、淋巴结、肌肉、脂肪和大脑中Nramp1表达水平进行了定量分析。结果表明,Nramp1基因在肺脏组织中表达量最高,胃组织中最低,而在肌肉和盲肠组织中不表达。研究结果说明家兔Nramp1表达具有一定组织器官特异性。     

鸡白痢沙门氏菌感染情况的调查

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的一种败血性细菌性疾病 ,它能垂直传递和水平传播。为了控制本病 ,对种鸡群进行净化是最根本的措施。鸡白痢净化的主要方法是检测淘汰阳性种鸡和防止再次感染。检测方法主要是采用现场全血平板凝集试验。为了最大限度检出和淘汰阳性鸡 ,连续进行了 4次检测。1　材料和方法鸡白痢平板凝集抗原 :由中国兽药检察所生产的鸡白痢鸡伤寒多价染色抗原。鸡白痢阳性和阴性对照血清 :由中国兽药检察所提供。检测方法和判断标准 :全血平板凝集试验。检测时机 :1 6周龄开始 ,全群普检 ,淘汰阳性鸡 ,如阳性率大于 0 .2 % ,…     

气单胞菌与沙门氏菌混合感染蛋鸡的诊断

1991年11月,浙江省肖山某鸡场发生了一起规模较大的具有传染性的疾病。病鸡主要病变为肝脏的肿大、出血、破裂。经病原分离,从病鸡的肝、脾等脏器分离到一株沙门氏菌,血清型为O_9,O_(46):Hgm:一;另一株在形态、培养特征、生化主要特性等与弧菌科的气单胞菌属符合,初步诊断为气单胞菌(Aeromonas)。现把这次发病的流行情况、临床症状、病理变化、病原特性作一报道。     

禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析

旨在分析禽腺病毒血清4型(FAdV-4)感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平,本研究设计鸡NLRP3特异性引物,利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体,制备重组质粒pMD-18T-NL-RP3.以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线.通过反应条件...     

鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达水平研究

为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄～35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达最早于13胚龄被检测到,随后迅速升高,分别于出壳后7日龄和10日龄达到峰值。出壳后,鸡脾脏中同一种细胞因子的基因表达水平显著高于胚胎时期。研究还表明:IFN-γ和IL-2的基因表达模型与出壳后鸡脾脏的发育以及T细胞的迁移定殖情况相一致。该研究对从分子水平,进一步了解鸡在胚胎时期和出壳后,脾脏免疫功能的建立情况具有重要意义。     

4种鸡源致病性沙门氏菌多重PCR检测方法的建立及应用

建立一种多重PCR方法,同时检测肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌。针对沙门氏菌属特异性invA基因、肠炎沙门氏菌特异性Sdf I序列、鼠伤寒沙门氏菌特异性STM4497基因、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌flhB基因设计引物,对引物浓度和反应条件进行优化,并对多重PCR特异性和灵敏度进行评估。利用建立的多重PCR方法调查河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌流行现状。研究建立的多重PCR方法可快速、特异性鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌,最低检出限为100 CFU细菌和0.5 ng基因组DNA。沙门氏菌流行病学调查显示,肠炎沙门氏菌是河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌主要流行血清型。成功建立鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌的多重PCR方法,对沙门氏菌流行病学调查及临床快速诊断具有重要意义。     

肠炎沙门氏菌感染与宿主的关系

肠炎沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病,其危害性备受关注.笔者就感染该菌与宿主关系进行了分析,旨在提高对该病的认识,以便减少该病的发生,保障人畜健康.     

骨发育相关基因表达水平与鹿茸重量的相关性分析

旨在研究骨发育相关基因在不同重量鹿茸的尖端表达规律,以期深入研究鹿茸生长发育分子调控机理.利用实时荧光定量PCR技术检测7个基因(MMP14、COL11A1、PHOSPHO1、RHOA、COL1A2、SPARC,CTNNB1)在不同重量鹿茸尖端组织mRNA的相对表达水平,分析骨发育相关基因表达水平与鹿茸重量的相关性;同...     

五指山猪不同组织中Myf5与MyoD1基因的表达研究

 MRFs家族成员包括Myf5、MyoD1、Myf4和Mfy6,利用Real time PCR技术,检测Myf5、MyoD1基因在从出生到体成熟（30 d、210 d、360 d）五指山猪背部肌肉组织中的表达变化趋势,以及Myf5、MyoD1基因在体成熟五指山猪心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肌、胃和小肠以上组织中的mRNA表达水平。结果表明：Myf5和MyoD1基因在出生后五指山猪背部肌肉组织中的mRNA表达水平与五指山猪的生长年龄成正比（P<0.05）;Myf5及MyoD1基因在成年五指山猪以上8种组织中均有表达,其中在肌肉组织中相对表达量最高。     

一起依莎褐鸡群沙门氏菌感染的病原学检验

一起依莎褐鸡群沙门氏菌感染的病原学检验王泽霖，顾邦涛（河南农业大学，郑州４５０００ｒ２）程铁城（北京农学院）李福田（开封市医学生物研究所）华北某鸡场是一个拥有２Ｏ万只蛋鸡的大规模鸡场。原饲养京白蛋鸡，自１９９０年引进依莎褐鸡后，鸡只死亡情况逐渐严重，...