黑亚14号不同类型愈伤组织结构的透射电镜观察

[目的]通过透射电镜来观察黑亚14号不同类型愈伤组织的超微结构。[方法]采用常规电镜样品制备和观察方法。[结果]透射电镜观察结果表明,初始愈伤组织细胞有非常明显的液泡,细胞核被其挤压位于细胞的边缘一角,但仍可观察到核仁;胚性愈伤组织细胞壁与初始愈伤组织细胞壁相比加厚,在靠近细胞膜的胞质区域里有较多的淀粉粒,且可观察到其内含有淀粉粒的叶绿体;非胚性愈伤组织细胞基本只能观察到液泡,几乎无其他细胞器;褐化愈伤组织细胞器崩解,基本没有细胞器。[结论]亚麻不同类型愈伤组织在细胞超微结构水平上有显著的差异,可以作为反映愈伤组织细胞分化能力的指标。     

农杆菌介导的BT基因导入甘蔗的研究

以甘蔗品种台糖22的胚性愈伤组织为试材,以MS 2.4-D1.5mg/ml培养基为基本培养基,进行愈伤组织的诱导。运用真空渗入与农杆菌相结合法,通过菌株LBA4404-Q5将来源于苏云金芽孢杆菌的抗虫基因(Bt基因)转入胚性愈伤组织细胞,经过卡那霉素(Km)的2次筛选培养,获得了抗性愈伤组织及再生植株。通过特异性引物的PCR扩增检测,在1.1kb处获得阳性条带,初步表明基因整合到甘蔗染色体基因组中。     

不同甘薯材料胚性愈伤组织的诱导与再生

用5个甘薯品种(系),分别用含有2种不同激素的培养基诱导胚性愈伤组织和进行再生能力试验.结果表明:苏薯9号和苏薯11号的胚性愈伤组织的诱导率和再生力较高,适合作为受体材料用于转基因研究,宁51 -5和宁51 -14的胚性愈伤组织诱导率和再生率较差,而苏薯12号不能诱导出胚性愈伤.添加2mg/L2,4-D和0.2 mg/L6 - BA的MS固体培养基比仅添加2mg/L2,4-D的MS固体培养基更适合作为甘薯胚性愈伤组织的诱导培养基,能明显增加胚性细胞的诱导效率.     

橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化

[目的]以3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶1基因(HbHMGR1)乳管表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织,获得抗性转基因材料,为研究HbHMGR1基因的乳管特异性表达及提高橡胶产量打下基础.[方法]用根癌农杆菌EHA105介导表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR1转化橡胶树品种热研8-79花药易碎胚性愈伤组织,经卡那霉素筛选数月后,对抗性愈伤组织进行GUS染色和分子检测.[结果]经过对根癌农杆菌侵染的易碎愈伤组织进行4~6个月筛选,得到5个GUS检测呈阳性的抗性愈伤组织系;取其中的2号和11号抗性愈伤组织系进行PCR鉴定,均能扩增出与阳性对照相同的特异片段,uidA、NPTⅡ和PHEV2.1-HbHMGR1序列的目的片段大小分别为829、797和3592bp.2号和11号抗性愈伤组织系经反向PCR鉴定,发现2号抗性愈伤组织系未扩增出目的条带,而11号抗性愈伤组织系扩增获得一条约2000 bp的条带,包含T-DNA序列和一段未知的DNA序列,其中未知DNA序列是橡胶树品种热研8-79基因组的一段连续序列.[结论]将植物表达载体的T-DNA整合到抗性愈伤组织系基因组DNA中,可获得一个含35S-NPTⅡ-PHEV2.1-HbHMGR1-35S-uidA的转基因愈伤组织系.     

组培平贝母形态转变过程中同工酶变化的研究

以平贝母为供试材料,研究了组培平贝母培养过程中培养体不同发育时期同工酶的变化。结果表明:在发育过程中各培养体的酯酶同工酶的酶带较丰富,共检测出11条酶带,且形成小鳞茎后酶谱的酶带数都明显多于愈伤组织和胚状体时期,且愈伤组织在Rf=0.708处产生了特异性酶带。过氧化氢酶在愈伤组织、胚状体和刚形成小鳞茎时都有表达,且酶谱仅有1条带,Rf=0.042,而在鳞茎膨大时没有该酶的表达。     

棉花新陆早17号愈伤组织中盐响应相关基因的表达分析

[目的]愈伤组织是一种研究植物生长发育及基因调控的理想实验材料,开展盐胁迫对棉花愈伤组织基因表达影响的研究,有助于阐明棉花愈伤组织基因的表达特性.[方法]对棉花新陆早17号品种非胚性愈伤和胚性愈伤进行盐胁迫处理,采用半定量RT-PCR技术,对棉花不同基因GhATPase-b、GhBADH、GhNHX1和GhP5 CS盐响应相关基因在不同NaC1浓度胁迫0、14和28 d时的表达情况进行分析.[结果]100 mmol/LNaC1促进棉花非胚性愈伤和胚性愈伤的生长分化;在新诱导的非胚性愈伤中,GhNHX1的表达水平先降低后小幅升高,而GhA TP ase-b、GhBADH及GhP5CS相对表达量随处理时间延长均呈上调表达;在继代多次的非胚性愈伤中,GhNHX1与GhBADH在处理期间相对表达量先降低后升高,GhATPase-b与GhP5CS相对表达量随处理时间延长均呈上调表达;胚性愈伤中,仅GhA TPase-b的表达量随处理时间增加持续升高,其余基因在处理期间相对表达量先降低后升高.[结论]适量NaC1可促进棉花非胚性愈伤和胚性愈伤的生长分化;不同阶段的棉花愈伤组织基因表达模式的不同,表明这些愈伤组织可能采用不同的机制响应NaCl的胁迫.     

棉花组织培养中畸形胚产生原因的分析

以陆地棉珂字棉312、河南79、鲁棉6号和泗棉2号的下胚轴为外植体诱导产生胚性愈伤组织,并建立了胚性悬浮系,胚性愈伤组织在培养基MS+B_5+0.1 mg/L ZT上诱导产生体细胞胚状体的频率最高。在胚胎发生过程中形成胚状体的同时,还产生大量的畸形胚,胚性愈伤组织细胞的染色体变异是产生畸形胚的主要原因之一。一些胚状体可产生两个或两个以上的芽,在棉花组织培养中可能存在着器官发生的途径。     

栓皮栎胚性和非胚性愈伤组织抗氧化物酶的研究

以诱导产生的栓皮栎不同基因型的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织为材料,对其过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶(SOD)活性及同工酶谱型进行了研究。结果表明胚性愈伤组织中抗氧化物酶活性均明显高于非胚性愈伤组织。不同基因型的胚性愈伤组织或非胚性愈伤组织的抗氧化物酶活性之间差异不显著,但同一基因型的胚性和非胚性愈伤组织之间均存在极显著差异。不同抗氧化物酶同工酶谱具有特异性,且显示与酶活性一致的变化趋势。     

长期继代下玉米愈伤组织差异蛋白的双向电泳分析

实验以玉米自交系齐319幼胚进行愈伤组织的诱导及继代培养,提取继代5次和10次的胚性愈伤组织中可溶性蛋白质进行双向电泳。运用2-D凝胶图像分析软件PDQuest进行分析,探究玉米胚性愈伤组织长期继代培养的分子调控机理。结果表明,长期继代10次相比5次共有20个有明显差异的蛋白点,其中14个表达下调,6个表达上调。通过质谱分析及搜索数据库鉴定出14-3-3-like protein GF14-12和ferritin-1,chloroplastic 2个蛋白,可能是愈伤组织长期继代后细胞生长代谢途径受到影响的结果 。     

柳枝稷成熟胚愈伤组织诱导的影响因素

为优化柳枝稷愈伤组织诱导培养条件,以柳枝稷成熟胚为外植体,通过正交设计,研究基因型、2,4-D、6-BA、基本培养基、碳源和pH等因素对柳枝稷成熟胚愈伤组织诱导的影响。结果表明,6种因素中,2,4-D对柳枝稷成熟胚愈伤组织诱导的胚性愈伤率影响最大,6-BA次之,再次为基本培养基,而基因型、碳源和pH对胚性愈伤率影响较小。柳枝稷成熟胚愈伤组织诱导的最佳培养基组合为2,4-D 5 mg/L,6-BA0.2mg/L,基本培养基B5或MS或N6以及基因型西稷3号。柳枝稷成熟胚愈伤组织诱导的胚性愈伤率与出愈率、愈伤组织鲜质量和干质量均呈显著正相关关系,出愈率与愈伤组织干质量和愈伤组织鲜质量无显著相关性。     

黑亚14号不同类型愈伤组织结构的透射电镜观察

黑龙江省农业科学院经济作物研究所利用外源DNA导入技术,采用柱头基部切割滴注法以法国品种范妮（FANY）为供体,黑亚10号为受体育成了品系D93005—15—8,其各产量性状均超过其受体亲本和当前的主栽品种,2003年由黑龙江省品种审定委员会审定通过,命名为黑亚14号（H14）。     

Production of Embryogenic Callus and Plant Regeneration from Elite Guizhou Waxy Maize Inbred Lines

Immature embryos from three elite Guizhou waxy maize inbred lines (W21019, B7, and QCL5036) were evaluated for theirability of forming callus and regeneration into plants. Immature embryos harvested at different physiological stages were used as explants to initiate callus on N6 basal medium with 0-3.5 mg L-1 of 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D). The concentration of 2,4-D, physiological age of immature embryos and genotype had a significant effect (P＜0.05) on the percentage of embryogenic callus formed. The optimum 2,4-D concentration for the initiation of embryogenic callus was varied among the waxy maize genotypes from 2.0 mg L-1 (B7 and QCL5036) to 3.0 mg L-1 (W21019). The shoots were generated from embryogenic callus which were transferred into the regeneration medium supplemented with 0-2.5 mg L-1of 6-benzylaminopurine (6-BA). 6-BA in the medium significantly promoted the regeneration of embryogenic callus.Embryogenic size was also an important factor that affected regeneration capacity. 0.6-0.7 cm was proved to be the best size for regeneration from embryogenic callus and the mean number of shoots per primary callus in all genotypes achieved the highest number. The ability of the plant regeneration was also affected by genotype. W21019 had the highest number of shoots formed per primary embryogenie callus. With the optimum condition, the highest mean number of shoots per primary callus was up to 12.13, 5.73, and 3.33 in line W21019, B7, and QCL5036, respectively. The successful regeneration of the two inbred lines provides a basis for development of genetic transformation to improve priority traits such as enhanced insects and drought tolerance.     

香蕉胚性愈伤组织的诱导及胚性细胞悬浮系的建立

分别以3个香蕉品种的多芽体茎尖和5个香蕉品种的未成熟雄花为外植体,诱导产生胚性愈伤组织．结果分别从2个基因组类型为AAA的品种的多芽体茎尖和未成熟雄花获得了胚性愈伤组织,而未能从基因组类型为AAB或ABB的香蕉品种中获得胚性愈伤组织．胚性愈伤组织的诱导率受基因组类型、品种和培养条件等因素的影响．以上述4个品种的胚性愈伤组织为起始材料成功建立了胚性细胞悬浮系,不同香蕉品种,从其胚性愈伤组织建立胚性细胞悬浮系的难易程度有所不同．     

龙眼体细胞胚胎发生过程中特异表达蛋白的双向电泳分析

以龙眼品种红核子LC2胚性细胞系为材料,进行体细胞胚胎(简称体胚)发生及其同步化调控,获取体胚发生过程中各个主要发育阶段的培养物(胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚、早期成熟胚、中期成熟胚、晚期成熟胚),采用双向电泳对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析.结果表明:(1)龙眼胚性愈伤组织中,pI为4-5的酸性蛋白表达种类最多,在体胚发育的过程中逐渐消失,相反,pI为5-6的微酸性蛋白的表达逐渐增多;(2)体胚发育后期,尤其是成熟胚晚期,分子质量大的蛋白大量减少,分子质量较小的蛋白增多并逐渐积累;(3)虽然在各个发育阶段都会出现一些新的特异蛋白,但是没有改变蛋白质种类逐渐减少的趋势;(4)发现了一些有差异的特异蛋白点,尤其是成熟胚后期,有一系列大分子质量的蛋白消失,新出现了一部分分子质量较小的蛋白,其中几种表达量很大,可能与体胚发育有密切关系.     

荔枝、龙眼胚性愈伤组织的细胞组织学观察

通过石蜡切片观察荔枝、龙眼胚性愈伤组织的结构和胚性细胞分裂生长的方式 .结果表明 :荔枝胚性愈伤组织中具有旺盛分裂能力和再生能力的胚性细胞主要分布在外缘 ,胚性愈伤组织的增殖生长为单细胞外起源 ;而龙眼胚性愈伤组织的胚性细胞大多处于内部 ,胚性愈伤组织的增殖生长为内起源 .还对荔枝、龙眼胚性愈伤组织应用于遗传转化等问题进行了探讨     

小麦胚性愈伤组织发生影响因素的研究

小麦成熟胚愈伤组织的诱导率、生长率及胚性愈伤组织发生率的基因型效应有显著差别。供试的 5个基因型中 ,愈伤组织诱导率基因型间差异达到极显著水平。诱导率大小顺序为 :辽 10>774 2 >Roblin>7757>新克旱 9。以成熟胚为外植体的胚性愈伤组织发生率 ,辽 10为 78% ,774 2为 10 % ,新克旱 9为 0 %。外植体与基因型共同作用影响胚性愈伤组织发生率 ,774 2两种外植体(成熟胚与幼穗 ) ,都有胚性愈伤组织发生。但不同外植体发生率不同 ,成熟胚为 10 % ,幼穗为 1%。而新克旱 9两种外植体均无胚性愈伤组织发生 ,并有褐化愈伤组织 (褐化率分别为 6 9.50 %和53.70 % )。培养基不同胚性愈伤组织发生率也不同     

落叶松胚性愈伤组织诱导与未成熟胚形态的关系

以13落叶松未成熟胚为材料进行胚性愈伤组织的诱导,其中,长73-44、日5*、日5、日5×长77-1、日5×兴9、日12×兴9等6个家系诱导出胚性愈伤组织,7月1日采集的日5×长77-1未成熟胚的胚性愈伤诱导率最高,达13.93%。研究结果表明,不同采集时间的落叶松合子胚形态存在一定区别,诱导出的愈伤组织形态也有所不同,其胚性愈伤组织诱导明显受到取材时间及家系的影响。落叶松胚胎发育存在多胚现象,胚性愈伤组织的诱导率与散粉后时间及胚胎长度呈负相关,而与多胚发生率呈显著正相关(p=0.028)。     

香榧幼胚发育与胚性感受态之间的相关性

以突破种鳞第8周至第15周种子的香榧Torreya grandis ‘Merrillii’幼胚为外植体,研究了香榧幼胚胚龄、生长素等对香榧胚性愈伤组织以及体细胞胚直接发生的影响,筛选出高胚性感受态的香榧幼胚胚龄,并根据幼胚内源吲哚乙酸（IAA）和脱落酸（ABA）质量分数检测结果,初步确定了高胚性感受态的香榧幼胚生理特点。结果表明:在SH附加0.1 mg·L-1 NAA培养基中培养,第9周幼胚的胚性愈伤组织发生率最高,为48.3%,第10周幼胚的体胚直接发生率最高,为42.7%;而培养于SH基本培养基中的第14周幼胚直接萌发率最高,为65.1%。香榧不同胚龄幼胚内源ABA及IAA质量分数检测结果表明:不同发育时期香榧幼胚的内源IAA及ABA质量分数具显著差异（P < 0.05）。其中香榧第8周幼胚内源IAA的质量分数最高,为53.90 ng·g-1,随着胚龄的逐渐增加,内源IAA质量分数呈下降趋势,第15周内源IAA质量分数最低,为35.60 ng·g-1。内源ABA质量分数随着胚龄的增加呈先缓慢下降,再快速上升,后下降,其中第15周达到最大值,为160.20 ng·g-1。通过对香榧幼胚离体培养及内源激素的测定,发现香榧第8~12周幼胚具有较高的胚性感受态。该研究结果对维持香榧幼胚高胚性感受态,开展香榧胚性愈伤组织及体胚发生培养条件的优化提供了技术指导。     

沙田柚杂种胚性愈伤组织的诱导及遗传鉴定

【目的】沙田柚（Citrus grandis [L.] Osbeck cv.Shatian）是中国的特有品种，其愈伤组织难以诱导。为进一步进行细胞工程研究，本研究通过与其它品种杂交的方法获得杂种胚性愈伤组织。【方法】以沙田柚为母本，用体细胞杂种橘柚+无酸甜橙 ([C.reticulata Blanco× C.paradisi Macf.] cv.Nova+C.sinensis [L.] Osbeck cv.Succari)为父本进行杂交，90 d后将幼胚取出，在MT + ME（麦芽提取物，500 mg·L-1）和MT + GA3（1 mg·L-1）两种固体培养基上培养。【结果】幼胚培养约5个月左右，在两种培养基上从胚状体和幼小植株的下胚轴处都长出了可继代保存的胚性愈伤组织，经细胞流式仪和SSR鉴定，该胚性愈伤是三倍体杂种愈伤，继代保存两年后，在MT+乳糖（50 g·L-1）培养基上仍可以产生大量的胚状体，具有较强的胚状体发生能力。【结论】沙田柚与体细胞杂种杂交后，可以较容易地获得其杂种的胚性愈伤，对沙田柚种质资源的保存和利用具有重要价值。