巴西橡胶树的离体微繁殖

利用SRAP分子标记技术对8种海南野生兰属植物的遗传多样性和亲缘关系进行分析。结果显示：从30对引物中筛选出20对SRAP引物组合,共扩增出195条多态性条带,平均每个引物组合产生9.75个多态性条带。UPGMA聚类分析可将8种供试材料划分为4类：第Ⅰ类为冬凤兰;第Ⅱ类为纹瓣兰;第Ⅲ类为多花兰和独占春;第Ⅳ类为寒兰、建兰、墨兰和兔耳兰,这与传统的形态分类学结果基本一致。本研究可为兰属品种的鉴定和系统分类研究提供依据。     

巴西橡胶树未成熟花药的体细胞胚胎发生及植株再生

以巴西橡胶树（Hevea brasiliensis Muell. Arg.）的未成熟花药为外植体成功实现高频体细胞胚胎发生及植株再生。筛选出的最佳愈伤组织诱导培养基为：改良MS+2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L, 最佳体细胞胚胎诱导培养基则为：改良MS+KT 0.7 mg/L+NAA 0.2 mg/L。将成熟体胚转移至无激素培养基中可进一步发育出根、茎、叶完整的小植株。细胞学分析显示, 所有受检小植株均为二倍体。将长至2-3 cm高的小植株移栽到营养袋中并置于温室条件下育苗, 随后可定植到大田。     

巴西橡胶树离体材料的绿色荧光背景研究

绿色荧光蛋白GFP是植物遗传转化常用的报告基因,但是有些植物组织由于具有绿色荧光背景而不能使用.为了探索GFP基因作为报告基因在巴西橡胶树遗传转化中利用的可行性,对巴西橡胶树不同的离体材料进行荧光背景检测,发现花药愈伤组织、未授粉胚珠愈伤组织、游离小孢子、花药壁体细胞均能发出极强的绿色荧光,叶片侧脉细胞发出弱的绿色荧光,而叶肉细胞不能发出绿色荧光.这表明橡胶树愈伤组织、游离小孢子、花药壁体细胞、叶片侧脉细胞含有自发荧光物质,在以它们为受体构建转化体系时不能以GFP基因作为报告基因.     

玉米未成熟雄穗的离体培养

本研究旨在用玉米未成熟雄花序作为外植体,以获得接近正常发育的小穗。由于供培养的雄穗易受影响,而且脱离了植株其余器官的影响,因此可以进行许多以前难于进行或不可能进行的研究。例如使正常雄穗生长和分化所必需的营养因子的研究成为可能,它们是减数分裂和小孢子发生的基础生化研究。此外,还可能进行诸如诱导花药单倍体和用化学方法使     

橡胶树幼胚离体培养的研究

橡胶树经传粉后3～3.5个月的幼胚,在H、MS等培养基上经过1个月左右的培养,可直接诱导成完整植株。培养效果以不添加附加物的H培养基(蔗糖3％)为好,植株诱导率达60％左右,移载成活率70％左右。这一技术的应用,将会有效地减少因台风造成人工授粉果脱落的损失。     

茶树未成熟胚离体培养植株的形成

应用组织培养技术进行种质改良和基础研究,迄今仍颇具活力。在茶树上,国内外的一些研究虽已取得可喜的进展,但始终还没见未成熟胚培养成功的报道。本试验基于胚是下一代的新起点的特性,在无菌条件下,采用多种培养基对茶树未成熟胚进行人工培养,成功地诱导出合子胚,不定胚及不定芽,并形成植株。     

巴西橡胶树游离小孢子培养

以橡胶树品种海垦2号为材料,对橡胶树游离小孢子培养体系进行初步研究,为进一步建立其成熟培养体系提供基础。小孢子的提取采用直接研磨法和间接研磨法进行,结果发现以间接研磨法为佳,虽然工作量大,但污染率低、杂质少、培养效果好。对小孢子分别进行高温热击、Starvation Medium B溶液、对照预处理试验,发现用Starvation Medium B溶液预处理小孢子2 d有利于小孢子分化。不同的碳源比较发现麦芽糖培养效果较蔗糖好。对诱导培养基的组分、pH研究发现,以改良N6为基本培养基添加外源激素2,4-D 0.5 gm/L、KT 0.5 mg/L,pH 6.6时诱导效果好,小孢子分化率达8.33%。小孢子的分化以B途径为主,初步获得小孢子分化的细胞团和微愈伤。同时以橡胶树小孢子为受体进行电激转化试验,瞬时表达结果证明外源基因已导入部分小孢子基因组中。     

巴西橡胶树花药体胚发生类型及其培养条件的改良

橡胶树花药培养体胚发生率低及植株再生频率低是制约其组培苗工厂化生产的瓶颈。以热研7-33-97品系花药为外植体,研究橡胶树花药体细胞胚发育过程并对其体细胞胚进行系统分类,同时改良其培养条件。结果表明,完整的体胚发育过程是球形胚-心形胚-鱼雷胚-子叶胚,但有些心形胚不能进一步发育成鱼雷胚,在后继培养中会分化成畸形胚;体胚发生不具同步性,在鱼雷胚旁又长出次生胚。胶树花药体细胞胚共分9种类型,发现胶树花药体胚发生过程中产生连体胚现象,该类胚能正常发育成植株。不同胚状体培养条件对植株再生率的影响说明,暗培养诱导胚状体2个月后再转移至500 lx弱光照条件下培养10～15 d,然后再转移至出苗培养基培养,能够显著提高植株再生率。在诱导胚胎发生培养基中添加不同浓度的稀土,结果表明,稀土具有提高橡胶树花药体胚发生率的效果,其中以添加1 mg/L稀土培养效果最佳。     

温度对巴西橡胶树微体繁殖的影响

进行了温度对巴西橡胶树（Hevea brasiliensis)微体繁殖影响的研究。以巴西橡胶树的腋芽和顶芽为外植体，分别在26，28和30℃3种温度下进行组织培养，定期观测萌生枝的高度、直径、数量等多项指标。结果表明：在培养第50天时，腋芽繁殖系数26℃的2.6提高到28℃和30℃的4.6，提高了76.9%，在同样情况下，28-30℃的顶芽繁殖系数比26℃的提高50%左右；28℃的萌生枝直径略大于30℃和26℃的，30℃和28℃的萌生枝和萌动芽数量大于26℃的；30℃的枯顶数量略大于28℃和26℃的。综合指标说明：培养温度以28℃最佳，继代1次时间不宜超过50d。     

巴西橡胶树胚胎晚期丰富蛋白基因的克隆及序列分析

根据抑制性消减杂交文库分离的EST片段,采用3’-RACE技术从巴西橡胶树胶乳中获得HbLEA14基因的全长cDNA序列,其ORF长456 bp,编码151个氨基酸,预测HbLEA14蛋白分子量为16.58 ku,等电点为5.10。同源性比对显示,HbLEA14与蓖麻RcLEA14、乳浆大戟EeLEA14、陆地棉GhLEA14、大豆GmLEA14、拟南芥AtLEA14、番茄SlER5的同源性分别为88%、80%、75%、73%、65%和61%,属于非典型第2组LEA蛋白。RT-PCR结果显示,死皮植株胶乳中HbLEA14的表达量明显高于健康树。     

巴西橡胶树抗风研究进展

从品种(系)抗风性评价、抗风力影响因素,以及抗风性早期预测等3个方面,综述巴西橡胶树抗风研究的最新进展,为巴西橡胶树抗风性的深入研究及抗风品种选育提供参考。     

巴西橡胶树胶乳基因表达

摘 要 　　天然橡胶（顺式-１，４-聚异戊二烯）是巴西橡胶树（Hevea brasiliensis Muell. Arg. ）乳管中合成的一种具有众多工业用途的高分子聚合物。就胶乳中的特异性或高丰度基因而言，它们在橡胶生物合成中可能起着十分重要的作用。     

巴西橡胶树生物膜的冷害

采用电子显微镜技术和酶的细胞化学法研究巴西橡胶树冷害生物膜结构的变化.实验结果表明:在零上低温下各种细胞器膜系都遭到不同程度的损伤,但是质膜是细胞各种膜体系中对冷害最敏感的部位.膜的损害有三种形式:(1)双分子膜解体和消失;(2)生物膜发生液化作用;(3)双分子膜的撕开.膜蛋白和膜脂都遭受低温的伤害.膜各种形式的伤害原因可能不同.     

巴西橡胶树花药体细胞胚胎发生的研究 —培养基配方优化及体胚发生的组织学观察

通过对人工抹花控稍处理后的四季芒进行物候和形态特征等的调查。结果表明,四季芒经过人工抹花控梢处理后,果实成熟期推迟20～30 d,单株产量比对照增加10 kg;处理后的3次生理落果高峰分别在处理后第7、8、11这3周,尤其是在处理后的第7周落果数和落果率都比较严重;处理后的4次生长高峰分别在处理后第7、8两周和第15～17周。     

几种营养物对油菜未成熟胚在离体培养下发育的影响

植物未成熟胚在离体培养条件下,一种是继续维持胚性生长,为正常的胚胎发育途径;另一种称“早熟萌发”,即从胚性生长转为迅速萌发成幼苗。因此,研究营养因素对油菜未成熟胚生长发育的影响,对研究胚在离体条件下的生理、生化特性和杂种胚的胚胎营救、育种上的实际应用有重要意义。     

巴西橡胶树的次生体细胞胚胎发生—— 一种新的长期性体细胞胚胎发生诱导方法

在橡胶树中,以未成熟种子的内珠被为外植体通过其胚性愈伤组织的继代增殖可以持续不断地诱导体细胞胚胎,该方法称为持久体细胞胚胎发生(Maintained Somatic Embryogenesis,MSE)。然而,直接利用内珠被组织诱导易碎型胚性愈伤组织系不但频率很低,而且迄今仅无性系PB260和RRIM703能够藉此途径实现体细胞胚胎的长期诱导。本研究以体细胞胚胎为外植体成功诱导和建立可增殖胚性愈伤组织系。组织学分析显示,体胚外植体切口边缘表皮及周维管细胞脱分化导致易碎型胚性愈伤组织的产生。所获愈伤组织经继代增殖和筛选最终得以建立胚性愈伤组织系。该新方法被称为间接次生体细胞胚胎发生(Indirect Secondary Somatic Embryogenesis,SSE)。我们还就体胚及内珠被2种外植体诱导胚性愈伤系的潜力进行了深入比较。结果表明,采用体胚外植体诱导胚性愈伤组织系其频率明显高于内珠被外植体。除了PB260和RRIM703之外,我们通过SSE途径还成功建立了无性系PB217的胚性愈伤组织系,而该无性系之前一直难以用MSE法获得其胚性愈伤系。此外,采用SSE法建立胚性愈伤系所需继代培养的次数也大为减少。对于不少仅实现初生体细胞胚胎发生的无性系而言,该方法无疑为其长期性体胚发生的诱导开辟了一条新的途径。     

巴西橡胶树胶乳中黄色体破裂指数测定方法的优化

黄色体破裂指数是橡胶树胶乳生理诊断方法的一个核心指标,但目前使用的黄色体破裂指数测定方法存在重复性差、准确性不高的缺陷。以无性系热研7-33-97为材料,比较胶乳采集、样品保存、游离酸性磷酸酶活性的测定及总酸性磷酸酶活性的测定等几个环节对破裂指数测定的影响。结果表明：C-乳清是测定游离酸性磷酸酶活性的最佳样品,并于4 ℃放置24 h不会影响游离酸性磷酸酶活性的测定;全胶乳经冻融、震荡及去污剂处理后,可得到最高的总酸性磷酸酶活性;反应完毕后的离心速度对实验结果无明显影响。此方法具有重复性好、准确性高的特点,是一种适合黄色体破裂指数测定的方法。     

离体培养橡胶树体细胞诱导纯多倍性无性系方法的研究初报

研究结果表明,用0.5%的秋水仙素处理橡胶树二倍体花药体细胞愈伤组织(浸泡或滴溃)dl可有效地从多倍性的细胞再分化成多倍性胚状体并再生植株。所诱导培育获得的多倍胚状体及植株,通过细胞学鉴定表明具有多倍体表型特征的,其体细胞染色体数为2n一72,未见嵌合现象,对照的2n= 36