狂犬病病毒特异性抗体保护致死性疾病攻击的效价测定（摘要）

抗体在对抗多种感染源中扮演重要角色。中和作用是抗体最主要的功能,这些多功能蛋白的Fc及补体依赖活性是其在提供对抗多种病毒感染的保护能力中最关键的。体内抗病毒的保护作用很复杂,其中病毒中和作用（抗体使病毒失去感染力的能力,通常在体外进行）很重要,通常它仅仅占保护作用的一部分。荧光焦点抑制试验仍是检测狂犬病病毒中和抗体的金标准。除了中和试验,抗体的狂犬病病毒特异性抗原结合活性也可以通过酶联免疫吸附试验及其他备用方法进行测定。     

狂犬病病毒中和抗体ELISA技术的建立

将狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G蛋白)中和抗原表位串联表达的重组蛋白作为抗原,建立了检测RV中和抗体的间接ELISA技术。结果表明,最佳抗原包被量为2μg/孔,被检血清最佳稀释倍数为1:200。该方法与快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的阳性符合率为88%,阴性符合率为96%。特异性试验表明,该抗原不与犬腺病毒I型、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬冠状病毒阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。板内和板间重复性试验的平均变异系数分别为2.7%和4.2%,具有良好的重复性,为动物RV中和抗体检测提供了简单快捷的检测方法。     

测定狂犬病病毒中和抗体的微量免疫酶试验

在Kazuakz等报道的微量免疫酶技术(MIET)的基础上,以健康细胞对照孔OD值均数加3倍标准差作为间接ELISA判定标准,进而建立了求中和剂量的新方法.通过用中和99%病毒的一致判定标准同经典的小鼠中和试验(MNT)比较看,本试验所建立的方法可代替MNT.     

我国部分城乡犬狂犬病中和抗体水平调查

以国际兽疫局(OIE)推荐的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对随机采自广东、河北、北京等地区的573份犬血清进行了狂犬病病毒中和抗体效价的测定,以确定犬群中狂犬病的免疫状况。结果显示,在不同地区或不同城市的动物防疫区域中,犬体内狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着明显的差异,城市犬的中和抗体水平较高,有的中和抗体保护水平(0.5IU/mL)阳性率高达100%,少数则达不到保护水平,不同防疫区域狂犬病中和抗体水平为(0.08±0.03)~(4.39±1.45)IU/mL,平均保护水平阳性率为46.3%;乡村看家犬病毒中和抗体水平普遍较低,大部分犬体内无中和抗体,只有个别犬体内存在水平较低的中和抗体,平均保护水平阳性率为1.8%。     

双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

建立了检测伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ,试验方法的最佳工作条件为：抗体包被量为５μｇ／孔,酶标抗体的浓度为１：２００。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体,脑和肺的检出率最高,其次为心,肝,脾,肾等组织。     

狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备

用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。     

三种ELISA方法与荧光抗体病毒中和试验检测狂犬病抗体的一致性分析

为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒,该研究以荧光抗体病毒中和试验（fluorescent antibody virus neutralization FAVN）方法为参照,与3个ELISA试剂盒方法进行比对,进行一致性分析,并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示：三种不同的试剂盒中,试剂盒A与FAVN一致性最好,Kappa值为0.605,有较高的一致性,符合率为86%;试剂盒B次之,Kappa值为0.485,为中度一致,符合率为80%;试剂盒C与FAVN的一致性最差,Kappa值为0.310,符合率也最低,为74%。在敏感性和特异性方面,试剂盒A的敏感性最高,为92.1%,试剂盒B的特异性最高,为72.7%。本研究为临床上科学的筛选试剂盒提供了依据。     

狂犬病病毒糖蛋白膜外区表达及中和抗体间接ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol·L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达.通过Western-blot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性.以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板,用已知中和抗体效价的OIE参考血清对该方法进行了标准化,建立了检测狂犬病病毒中和抗体的间接ELISA方法.结果表明,抗原的最佳包被量为3.74 μg,血清的最佳稀释度为1:100,待检血清阳性临界值为0.50.用此方法检测了418份血清样品,并与荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法进行了比较,符合率为98.61%.     

狂犬病病毒CVS-11株的培养及其效价测定

本研究通过神经瘤细胞（NA）培养CVS-11株狂犬病病毒,并测定不同批次的病毒毒价,为优化狂犬病疫苗的生产工艺提供数据支持,具有实际意义。病毒培养和检测结果表明,第1次和第2次收获的病毒液病毒含量较高,在107.0FFU/0.1 mL以上,毒力为106.4～107.0LD50/0.03 mL;而第3次收获的病毒含量则较低,只有106.0FFU/0.1 mL左右,毒力为105.0～105.3LD50/0.03 mL。第1次和第2次收获的病毒液可用于制备狂犬疫苗,第3次收获的病毒液因毒价较低不适于制备狂犬疫苗。     

狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RABV）感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。     

表达绿色荧光蛋白重组狂犬病病毒Flury-LEP的构建及其用于中和抗体检测的研究

为确定狂犬病病毒(RV)Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组LEP基因组cDNA克隆pCI-LEP-EGFP,并成功拯救出重组病毒(rLEP-EGFP)。rLEP-EGFP的生物学特性和野生型LEP(wtLEP)在NA细胞和BHK-21细胞中的生长动力学及对小鼠的致病性没有显著差异。rLEP-EGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,各代次重组病毒均稳定表达EGFP。重组表达的EGFP可用于中和抗体检测,rLEP-EGFP免疫犬血清经间接免疫荧光(IFA)或荧光下直接观察检测RV中和抗体滴度,两种检测结果显示较好的相似性(p0.05)。本研究为研制以Flury-LEP株活载体多价疫苗奠定了基础,并为病毒中和抗体的检测提供了更为快捷的新方法。     

应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平的探讨

为了解应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测犬狂犬病抗体水平的效果,对东莞市采集的54份犬血清应用ELISA进行检测,采用Synbiotics软件进行分析,同时将该批血清送至军事医学科学院军事兽医研究所作荧光抗体病毒中和试验(FAVN)比较.ELISA检出阳性数35份,阳性率为64.82%,与军事医学科学院军事兽医研究所的测定结果差异不显著,符合率为85.19%.证明应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平定性检测具有较高的准确率,适合在短时间内监测大批量的血清样品.     

云南某犬场犬狂犬病灭活疫苗免疫抗体效价评估

采用直接免疫荧光病毒中和试验(FAVN),对云南某犬场狂犬病灭活疫苗免疫28 d后的犬群随机抽样44只(份),检测血清中狂犬病病毒抗体效价。结果显示,44只受试犬,14只阳性(≥0.50 IU/m L),阳性率31.82%(14/44);狂犬病灭活疫苗免疫1次的31只受试犬(幼犬14只、训练犬17只),3只阳性,阳性率9.68%(3/31);免疫2次及2次以上的13只受试犬(3只训练犬,10只种犬),11只阳性,阳性率84.62%(11/13)。调查显示,该犬场狂犬病灭活疫苗免疫覆盖率为100%。笔者建议:在犬12月龄前,应进行两次狂犬病灭活疫苗免疫;在幼犬3月龄后进行第1次免疫,间隔1个月后进行第二次狂犬病灭活疫苗加强免疫,消除狂犬病免疫空挡,以后每年进行1次免疫;对于监测过程中,出现血清中和抗体效价低于0.50 IU/m L的犬只,应及时加强免疫1次;并加强犬场周围流浪犬、流浪猫管理。     

SPA-ELISA检测猪伪狂犬病病毒血清抗体

本研究比较了SPA-ELISA和乳胶凝集试验（LAT）对广西部分猪场为狂犬病病毒血清抗体的检测。用SPA-ELISA检测了9个猪场248份血清，181份为阳性，阳性率73%。用LAT检查其中的SPA-ELISA阳性血清168份，98份为阳性，仅占58.3%。多数血清样本的SPA-ELISA检测结果比LAT高2个稀释度以上，说明SPA-ELISA的敏感性比LAT高。上述结果显示，广西的多数猪场已受到伪狂犬病病毒的感染。     

传染性法氏囊病病毒VP2特异性抗体效价与保护力的相关性

用一种新方法测定传染性法氏囊病病毒的特异性抗体，并对抗体效价与保护力的相关性进行了研究，对不同抗体效价的鸡进行攻毒，用乳胶凝集抑制试验测定抗体效价，该法对检测ＩＢＤＶ ＶＰ２特异性抗体快速，简便，当免疫鸡的ＬＩ效价达１：２或更高时，几乎所有的鸡均可抵抗强毒ＩＢＤＶ的攻击，相反，带有母源抗体的鸡，即使其ＬＩ效价达１：４，用同样方法攻击，仍有半数的鸡易感。