鹅卵泡抑制素α亚基的克隆及原核表达研究

利用RT-PCR技术从鹅的卵泡颗粒细胞中得到抑制素的总RNA,根据Genbank中家禽的抑制素基因的序列设计引物,扩增克隆抑制素α亚基片段,构建出克隆和表达载体,将鉴定为阳性的原核表达载体质粒(IB-pET28a-BL21),经IPTG诱导4.5 h后收集菌体,经电泳可见约1.4 kD的蛋白带.     

籽鹅促卵泡激素α亚基基因的克隆、序列分析及其原核表达载体的构建

以雌性籽鹅脑垂体的总RNA为模板,利用特异性引物通过RT-PCR扩增获得长为363 bp的籽鹅促卵泡激素α亚基的cDNA片段,将扩增的促卵泡激素α亚基基因片段克隆至pMD18-T载体后进行测序。将测序结果与鸡、鹌鹑、火鸡、鼠、羊、牛等多种禽类和哺乳动物的该基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果表明,这些物种促卵泡激素α亚基基因序列具有较高的保守性,其中与鸡、鹌鹑、火鸡的核苷酸同源性最高,均为95.9%,推导的氨基酸序列与鸡、鹌鹑、火鸡的同源性最高,均为97.5%。为了对克隆的籽鹅促卵泡激素α亚基基因功能研究提供基础,将籽鹅促卵泡激素α亚基基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体。     

抑制性消减杂交构建奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库

以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料，分离Poly(A)^ RNA，反转录合成单链及双链cDNA，经酶切成平均大小为400～600 bp的片段，将患乳房炎奶牛cDNA分成2组，分别与2种不同的接头连接，再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增，将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增，构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库。文库扩增后得到610个白色阳性克隆，随机挑选克隆进行PCR鉴定，插入片段主要分布在250～750bp之间。文库的成功构建为进一步筛选、克隆与奶牛乳房炎抗性相关的基因奠定了基础，对研究奶牛乳房炎抗性的分子机制以及乳房炎的综合防制具有重要意义。     

鹅细小病毒河北流行株HBZF07 NS1基因的克隆与序列分析

鹅细小病毒HBZF07株经13日龄鹅胚增殖后收集尿囊液,提取病毒基因组总DNA,采用PCR方法,一次性扩增出与预期大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯回收后克隆入pMD18-T载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,对阳性克隆进行了序列测定和序列分析。测序后拼接的基因长1892bp,包含完整的NS1开放阅读框（1884bp）,编码623个氨基酸。与GenBank中其它毒株的NS1基因核苷酸序列相比,同源性分别为DY（EF515837）98．4％,与B（GPU25749）为99．2％,与HG5／82（AY506546）为93．9％,与YG（AF416726）为93．9％,与SHM319（GPU34761）为97．0％。