肠外致病性大肠埃希菌毒力因子研究进展

近年来,在人类饲养的伴侣宠物、猪、牛、羊、家禽以及林麝等动物体内均已分离到一种能够引发肠外组织感染的大肠埃希菌--肠外致病性大肠埃希菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)。ExPEC所具有的毒力特征使其能够在消化道以外的组织脏器中定殖增殖,在临床上能引起人和动物的严重感染甚至导致死亡。由于ExPEC导致的疾病存在治疗困难且易复发的特点,给医疗事业和畜牧业造成了巨大的经济损失。ExPEC较强的致病性与其携带的众多毒力因子密不可分。论文就已发现的ExPEC主要毒力因子研究进展进行分类阐述,并介绍了不同毒力因子在ExPEC感染宿主过程中的致病机制。     

致病性大肠埃希菌HPI研究进展

强毒力岛(HPI)首先在耶尔森菌属中发现,由于水平转移等原因在致病性大肠埃希菌中也有发现,这在基础生命和生命科学领域已成为对HPI研究的热点.随着研究的不断深入,HPI与人及动物的致病关系非常密切,目前研究发现铁载体与细菌致病性有着重要的关系.论文主要对致病性大肠埃希菌HPI的基本特征、流行病学特征、HPI的获取机制、HPI与致病性关系的研究现状做以综述.     

兔致病性大肠埃希氏菌病的诊断

兔大肠杆菌病(colibacillosis)是由大肠埃希氏菌(Escherichia coli 简称 E.coli)某些特定血清型菌株所引起的一种肠道细菌传染病,尤其在幼兔中造成严重的损失,其中以1～4日龄幼兔感染最高,其次是7～15日龄内哺乳幼兔,有关试验结果资料表明:致病性血清型为 O_(23)、O_(35)、O_(86)、O_(13)、O_(26)等。我院实验动物中心家兔繁殖场连续不断发生幼兔腹泻下痢疫病,幼兔繁殖一直较困难,成活率较低,造成本院实验     

鸡源致病性大肠埃希氏菌血清型鉴定

鸡大肠埃希氏菌病是由埃希氏大肠杆菌(E·Coli)的某些血清型所引起鸡的不同类型疾病的总称。从现有的资料看,各地区流行的鸡致病性大肠杆菌的血清型不尽相同。其中以O_1、O_2、O_(78)在世界各地流行普遍,致病力也最强。近几年在国内也相继报导了由O_1、O_(78)、O_7、O_(73)和O_(88)等所引起的鸡大肠杆菌病的主要血清型。虽然在我省各养鸡场致病性大肠杆菌病时有发生,但却很少了解这些致病菌株     

牦牛致病性大肠埃希氏菌病的诊断

西藏那曲地区牦牛发病死亡数量较大，本病症状与大肠埃希氏菌病极为相似。通过对流行病学调查，临床症状及病理变化观察，细菌学、血清学检查鉴定，动物回归试验，首次证明引起那曲地区牦牛死亡的病因是由致病性大肠埃希氏菌所致。     

肠出血性大肠埃希菌O157疫苗研究进展

肠出血性大肠埃希菌感染是重要的新发传染病，在世界范围内多次暴发流行。肠出血性大肠埃希菌O157能引起人的出血性结肠炎、溶血性尿路综合征和血栓性血小板紫癜等全身性并发症。控制该病暴发流行的最好措施是免疫预防，但目前还没有研制出可用于人的疫苗。该菌的主要毒力因子包括染色体上原噬菌体编码的志贺毒素、LEE致病岛编码的毒力相关蛋白及质粒编码的肠溶血素等。研制中的O157疫苗种类包括亚单位苗、基因工程减毒活菌苗、重组载体活菌苗和转基因植物疫苗等。近年来，随着基因组序列的解析及分子生物学技术的发展，针对大肠埃希菌O157免疫预防研究取得了重要进展。     

影响大肠埃希菌感受态细胞因素的探讨

研究不同型号的菌株、不同转化溶液、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的复苏时间等对质粒转化效率的影响.结果表明,转化溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响,而转化时间、冰浴时间和转化后的振荡培养复苏时间对转化效率的影响不明显.     

鸭源致病性大肠埃希氏菌生物学特性的研究

对从自然病例鸭实质脏器中分离的致病性大肠埃希氏菌的生物学特性进行了观察。结果表明，不同血型和同一血清型不同菌株的培养特性、生化试验基本一致，抗生素耐药性呈多重性，所有菌株均能使小鼠和雏鸭发病死亡。     

农牧区牦牛致病性大肠埃希氏菌病的诊断

通过实际调查发现,在我国西藏地区牦牛养殖行业迅速发展过程中,因为大肠埃希氏菌病等情况的出现,造成了大量牦牛死亡的现象.为了能够对该种病菌进行诊断与观察,在接下来的文章中,将具体展开全面的分析,希望能够给相关人士提供些许参考依据.     

大肠杆菌及脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞基质金属蛋白酶表达的影响

为研究大肠杆菌(E.coli)及脂多糖(LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,以及MMPs与基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统在调控细胞外基质(ECM)代谢中的作用,分别以106 CF U/mL热灭活E.coli菌液、7.5μg/mL ...     

鸡转移因子脂质体对小鼠巨噬细胞吞噬功能及肠绒毛长度的影响简

为探讨鸡转移因子脂质体（chicken transfer factor liposome，CTFL）对小鼠腹腔巨噬细胞及消化吸收的影响，本试验选取了大小相近的18～22 g SPF级雌性小鼠30只，随机分成3组，每组10只，分别腹腔注射鸡转移因子（chicken transfer factor，CTF）、CTFL和生理盐水2 mL/只，隔日注射1次，连续注射5次，第11和21天检测小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率，同时分别取十二指肠、空肠和回肠固定到10%福尔马林液中、石蜡切片、苏木素—伊红染色，显微镜下观察，测量各段小肠的绒毛长度。结果显示，CTF和CTFL组对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的影响与对照组相比均差异极显著（P＜0.01），CTF和CTFL组相比差异不显著（P＞0.05）。小鼠饲养11和21 d时，CTF和CTFL组的十二指肠绒毛平均长度均显著长于对照组（P＜0.05），且CTFL组的十二指肠绒毛平均长度比CTF组长，而空肠和回肠平均绒毛长度均无显著差异（P＞0.05）。结果表明，CTFL和CTF均能显著提高机体免疫功能，CTFL对小鼠消化吸收的促进作用比CTF强。     

致病性大肠杆菌HPI对Caspase-1细胞焦亡相关分子表达的影响

为研究云南撒坝猪致病性大肠杆菌高致病性毒力岛（HPI）致猪源巨噬细胞焦亡的分子机制,本试验以云南撒坝猪致病性大肠杆菌HPI阳性株感染猪源巨噬细胞为切入点,从云南楚雄州某规模养殖场采集撒坝猪仔猪黄白痢的粪便,对大肠杆菌进行分离纯化,并通过PCR技术对HPI irp2基因进行检测,分别以HPI阳性株（HPI⁺）和阴性株（HPI^-）感染巨噬细胞,并设立LPS+ATP组和空白对照组,于0.5和6 h收集各组细胞及其上清。应用实时荧光定量PCR法检测不同组Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的变化;应用ELISA检测细胞上清pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和IL-18含量的变化。结果显示,试验成功分离得到致病性大肠杆菌,经PCR检测成功获得HPI irp2基因阳性株,经实时荧光定量PCR法检测后发现HPI⁺组、HPI^-组与空白对照组相比,Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平均呈上调趋势,且HPI⁺组高于HPI^-组。ELISA检测结果显示,与空白对照组相比,HPI⁺组和HPI^-组pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和IL-18的蛋白表达量普遍呈上调趋势,且HPI⁺组均高于HPI^-组。结果表明,云南撒坝猪致病性大肠杆菌HPI可通过上调猪源巨噬细胞中Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA的表达量促进猪源巨噬细胞炎性因子IL-1β和IL-18的释放,诱发炎症,最终促进猪源巨噬细胞发生细胞焦亡。     

表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响

试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分为4个处理组,分别为对照组、STa组、LMG194组和K88组。整个试验期间均以人工乳饲喂,预饲期4d,试验第5天进行攻毒,STa组、LMG194组及K88组分别在早晚两次口服灌喂2×109 CFU大肠杆菌LMG194-pBAD-STa、LMG194和K88,对照组灌服等量生理盐水,试验第7天早上各组灌服D-木糖并采血,屠宰并取空肠、回肠组织样品,测量仔猪血常规指标、血浆D-木糖含量及二胺氧化酶(DAO)活力,以及吸收与转运相关基因与蛋白表达量。结果显示,与对照组相比,STa组仔猪血液中中性粒细胞、中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05),LMG194组与K88组仔猪血液中中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05);STa组与K88组仔猪血浆D-木糖含量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组血浆DAO活力显著升高(P<0.05);STa组与LMG194组空肠AQP8、AQP10、KCNJ13和b0,+AT基因表达量均显著降低(P<0.05),K88组空肠AQP8、AQP10基因表达量显著升高(P<0.05);STa组回肠AQP8基因表达量显著降低(P<0.05),AQP10、SGLT-1基因表达量显著升高(P<0.05),LMG194组、K88组AQP8基因表达量显著升高(P<0.05),K88组AQP10、KCNJ13、b0,+AT、SGLT-1基因表达量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组空肠HSP70蛋白的表达量显著升高(P<0.05)。以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪小肠产生炎症,吸收与转运能力下降。     

山东部分鸡致病性大肠杆菌菌株抗药性测试

用２４株致病性大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）,对２１种药敏试纸进行抗药性测试。结果表明２４株Ｅ．ｃｏｌｉ抗药性相当严重,每种药物的敏感性也有差异。 ２１种药物只有 ２种药最敏感, ８种药完全不敏感,其余 １１种药也只对 ３－ ８个菌株产生高度敏感, １－９个菌株产生中度敏感,对８－１９个菌株产生完全不敏感。     

表达耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响

试验旨在研究表达耐热肠毒素（STa）的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分在4个日粮处理组,分别为对照组（人工乳）,STa组（人工乳+2×10⁹ CFU重组菌LMG194-pBAD-STa）,LMG194组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌LMG194）,K88组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌K88）。试验第5天进行攻毒,第7天屠宰取样,测量小肠黏膜的绒毛高度和隐窝深度,检测空肠、回肠、结肠及血清中的过氧化氢酶（CAT）、总一氧化氮合成酶（TNOS）与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活力及血清中丙二醛（MDA）与过氧化氢（H₂O₂）的含量。试验结果表明,与对照组相比,STa组仔猪各肠段绒毛高度均显著降低（P<0.05）,十二指肠隐窝深度及绒毛高度与隐窝深度的比值显著降低（P<0.05）,十二指肠、空肠、回肠绒毛表面积显著降低（P<0.05）;同时,STa组回肠、结肠CAT活力显著降低,血清、空肠、回肠和结肠中的TNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组结肠iNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组血清中的MDA与H₂O₂含量显著提高（P<0.05）。结果显示,表达STa的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪肠道结构损伤和抗氧化能力下降。     

Effects of Recombinant E. coli Expressing Heat-stable Enterotoxin on Intestinal Morphology and Antioxidant Capacity in Seven Days old Piglets

This experiment was conducted to investigate the effects of recombinant E.coli expressing heat-stable enterotoxin(STa) on intestinal absorption and barrier function, intestinal morphology and antioxidant capacity of 7 days old piglets. Twenty-four 7 days old piglets were allotted to four treatments:control group (artificial milk), STa group (artificial milk +2×10⁹ CFU E.coli LMG194-pBAD-STa), LMG194 group (artificial milk +2×10⁹ CFU E.coli LMG194), and K88 group (artificial milk +2×10⁹ CFU E.coli K88).The pigs were treated with E.coli on the 5th day and slaughtered on the 7th day. The results showed that, compared with the control group, villus height in jejunum, ileum and duodenum, crypt depth and villus height/crypt depth in duodenum, and small intestine villi surface area were significantly decreased in STa group (P<0.05). The activities of catalase (CAT) in ileum and colon, total nitric oxide synthase (TNOS) in serum, ileum, jejunum and colon, inducible nitric oxide synthase (iNOS) in colon were significantly decreased in STa group (P<0.05). STa group also had a higher levels of malondialdehyde (MDA) and hydrogen peroxide (H₂O₂) in serum (P<0.05). These results suggested that recombinant E.coli expressing STa could lead to intestinal injury and oxidative stress of 7 days old piglets.     

猪生长分化因子11的原核表达及抗体制备

本研究旨在获得猪GDF-11的特异性抗体,以便于进一步研究猪GDF-11的功能.对猪GDF-11的编码区进行了克隆、表达载体的构建和转化、原核诱导表达和纯化以及将GDF-11注射到小鼠中并分离抗体.从猪胚肾中分离总RNA,经RT-PCR扩增得到猪GDF-11基因的编码区,插入pMD18-T载体中.再经限制性内切酶BarnH Ⅰ和EcoRⅠ双酶切,将回收的GDF-11酶切片段插入原核表达载体pGEX-4T-2中,获得重组原核表达质粒pGEX-4T-2-GDF-11.重组质粒经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导产生了65 ku的GST-GDF-11融合蛋白.融合蛋白经凝血酶酶切,分离纯化出42 ku左右的GDF-11蛋白;然后注射小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1:25 600,而且特异性好,表明得到了猪GDF-11的多克隆抗体.     

宁夏部分地区鸡大肠埃希菌的分离与血清型鉴定

为调查宁夏地区鸡大肠杆菌病的流行情况,采集宁夏4个地区的103个规模化鸡场疑似病料151份,通过病原菌分离鉴定及生化试验,鉴定出鸡大肠埃希菌109株,平均分离率为72.19%(109/151);动物试验证实,59株分离菌有致病性,占分离菌54.13%(59/109);对致病性菌株进行血清型鉴定,确定血清型种类13种38株,占致病性菌株64.41%(38/59);优势血清型分别为O15、O18、O78、O88,占定型菌株63.16%(24/38)。     

发酵豆粕中大分子蛋白质和肽含量对仔猪小肠绒毛结构的影响

本试验旨在研究豆粕中大分子蛋白质和肽含量对仔猪小肠绒毛结构的影响。采用凝胶过滤色谱技术分析豆粕中大分子蛋白质和肽含量。选取40头断奶仔猪,随机分成4个处理:去皮豆粕处理、发酵豆粕C处理、发酵豆粕E处理和动物蛋白处理。试验期5周。结果表明:去皮豆粕中大分子蛋白质含量约占80%,发酵豆粕中约占50%,甚至降至24%;发酵豆粕中肽含量约占19%,去皮豆粕中仅有2.7%。与去皮豆粕处理相比,发酵豆粕C处理十二指肠绒毛高度显著提高(P0.05),发酵豆粕E、发酵豆粕C处理十二指肠、空肠隐窝深度显著下降(P0.05),发酵豆粕E、发酵豆粕C处理十二指肠和空肠的绒毛高度/隐窝深度均显著升高(P0.05)。由此可见,豆粕中大分子蛋白质含量与小肠绒毛高度/隐窝深度呈负相关;发酵豆粕能够在断奶仔猪饲料中使用,并且有效改善断奶仔猪小肠绒毛结构。