湖南小鹅瘟防治的研究 Ⅲ. 小鹅瘟高免血清防治效果及其保护期试验

制备4批小鹅瘟高免血清,用这些血清进行保护试验、治疗试验、保护期试验和田间防治试验的结果表明,2～3日龄雏鹅注射高免血清0.5～1mL,抵抗自然感染的保护率达95%～100%,抵抗强毒株(剂量为0.5×10~(-2)mL)感染的保护率为80%～100%;5～7日龄病雏注射高免血清2～4mL,治愈率为86%;2～3日龄雏鹅注射高免血清1mL,对人工感染和自然感染的保护期至少有15d;田间试验共预防雏鹅2816只,保护率为97.1%,治疗雏鹅5943只,治愈率为78.8%。结果证明高免血清是防治小鹅瘟的较理想的制剂。     

抗小鹅瘟异源高免血清的研制和应用

用小鹅瘟病毒弱毒抗原加福氏完全佐剂后，分二次皮内多点注射免疫山羊、奶山羊，皮下注射免疫黄牛，结合二次静脉注射免疫小鹅瘟强毒，用琼扩进行效价测定，可获得琼扩抗体平均效价为１：１６—１：６４的抗小鹅瘟高免血清。将制备的三种动物的高免血清混合稀释至琼扩效价１：４、１：８，分别用于预防免疫１－１０日龄的雏鹅，获得保护率为９０％和９６．３％；用于治疗发病鹅群，治愈率达８４％和９２％。牛、羊抗小鹅瘟异源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点     

山羊抗小鹅瘟血清的研制和应用

本课题采用山羊研制抗小鹅瘟高免血清获得成功,抗体琼扩效价达1:8;雏鹅皮下注射血清 1 ml,经强毒攻击,保护率为 100％;在疫区内免疫接种 25000 余只雏鹅,调查了 394 只,成活率为 92.8％,而 103只未免疫的雏鹅,成活率仅 55.3％;血清对病鹅的洽愈率为 74.3％,证明山羊抗小鹅瘟血清安全、有效。     

小鹅瘟病原分离鉴定及高免卵黄抗体的研制

无菌采取怀疑患小鹅瘟雏鹅的脑、肝、脾、肾等组织样本，健康鹅胚尿囊腔接种分离病毒，经雏鹅保护试验及鹅胚内中和试验鉴定，确诊病雏鹅的病原为小鹅瘟病毒，应用所分离的病毒制备高免卵黄抗体，经效力检验，取得对小蛾瘟攻毒保护100%的良好效果。     

湖南小鹅瘟防治研究 Ⅱ.小鹅瘟疫苗的研制及其应用效果

采用本地小鹅瘟强毒株C-85 F~2成功地研制了鹅胚化小鹅瘟(简称SEP)和鸭胚化小鹅瘟(简称SGD)疫苗,并对两苗进行了安全试验、无菌试验、效力测定试验和田间免疫试验。结果表明,用SEP或SGD原液2lm肌注成年母鹅均安全;经1次免疫(1:1OO SGD或1:100 SEP每只1ml)或2次免疫(1:100 SGD和1:50 SEP每只各1ml)的成年母鹅种蛋所孵的鹅胚或雏鹅,都具有抵抗小鹅瘟强毒的能力,其保护率达90%;在岳阳、怀化等地田间免疫母鹅的跟踪调查,其抵抗自然感染的保护率为95%。     

湖南小鹅瘟防治的研究——Ⅴ.不同毒力疫苗和不同免疫程序与雏鹅保护率的关系

1990～1992年,在湖南省武冈、岳阳、芷江和湖北省公安等县,用不同毒力的小鹅瘟疫苗,采用不同的免疫程序免疫母鹅.同时,采用免疫后175～188 d 内的母鹅产蛋所孵化的雏鹅进行攻毒试验.田间试验结果表明:用小鹅瘟鸭胚苗或鹅胚苗采用一次免疫法,母鹅免疫后175～182 d内,其后代的保护率为81.7%～87.0%;两次免疫法,首次用鸭胚苗或鹅胚苗,第2次用毒力较强的鹅胚苗,其后代的保护率为89.3%～94%.在攻毒试验中前一种方法对雏鹅的保护率只有60%～81.8%,而后一种方法则达到了86.6%～90.4%.     

湖南小鹅瘟防治研究——Ⅳ.抗小鹅瘟高免血清、卵黄抗体、山羊血清对小鹅瘟防治效果比较试验

制备了几批抗小鹅高免血清、卵黄抗体和山羊血清制剂.并用这3种制剂分别进行了保护试验和田间防治效果比较试验.结果表明:2～3日龄雏鹅每只肌注高免血清或卵黄抗体或山羊血清0.5～1 mL,抵抗自然感染的保护率分别为100%,100%和75%～100%,抵抗人工感染的保护率分别为80%～100%,75%～100%,60%～100%;田间预防效果的保护率分别为97.1%.96.2%和(?)7.1%;治疗效果的治愈率分别为81.8%,78.5%,70.9%;3种制剂的保护率和防治效果,以高免血清最佳,卵黄抗体次之,山羊血清稍差.     

十种常见鹅病的防治

1.小鹅瘟由小鹅瘟病毒引起。1～20日龄和30～40日龄为发病高峰期,死亡率30%～40%,最高达70%左右。病鹅精神沉郁,吃草减少,拉灰色粪便,脱水消瘦,不能站立,滑冰样运动,一般发病后5～8小时死亡。防治:(1)搞好孵坊和鹅舍消毒。(2)刚孵出的雏鹅每羽注射高免血清1毫升,病鹅皮下注射1.5毫升。(3)母鹅注射鸭胚弱毒苗100倍稀释液1毫升,或注射鹅胚弱毒菌100倍稀释液;雏鹅用500倍稀释液滴鼻免疫。(4)鸡鸭制备的卵黄抗体每羽1毫升,腿部皮下注射,防治效果可达90%以上。     

雏鹅新型病毒性肠炎的初步分离和鉴定

从南京某地具典型雏鹅新型病毒性肠炎病变的死亡雏鹅体内分离到一株病毒。用12日龄鹅胚增殖病毒,通过电镜观察到腺病毒样粒子,直径70-120 nm;经与小鹅瘟阳性血清进行中和作用后,接种鹅胚后仍出现死亡。人工感染4日龄健康易感雏鹅,引起发病和死亡,并具有典型雏鹅新型病毒性肠炎的临床症状和剖检特征。用此株病毒感染的鹅胚尿囊液制备的沉淀抗原,经琼脂扩散试验,不能与小鹅瘟病毒阳性血清发生特异性沉淀反应。     

小鹅瘟病毒的分离与初步鉴定

从死亡的具有典型小鹅瘟症状的7日龄雏鹅肝中分离到1株病毒．选用未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产的12日龄鹅胚，进行鹅胚接种试验，雏鹅表现出典型鹅瘟临床症状和剖检特征；鸡胚致死率达到25％；不能凝集多种动物红细胞；能凝集黄牛精子，经琼脂扩散试验，用此株病毒感染的鹅胚液能与小鹅瘟病毒阳性血清发生特异性反应．综上所述，这株病毒初步鉴定为小鹅瘟病毒．     

小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较

 【目的】比较小鹅瘟病毒（GPV）VP3基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）和弱毒疫苗免疫鹅体内的免疫应答,以期为进一步研究和阐明pcDNA-GPV-VP3免疫发生机理、免疫持续期等提供基础数据。【方法】将pcDNA-GPV-VP3和小鹅瘟弱毒疫苗分别免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学方法检测免疫鹅体内GPV抗原的分布,用淋巴细胞增殖实验和间接ELISA分别检测免疫鹅的细胞免疫水平和血清抗体滴度,比较GPV基因疫苗与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的能力。【结果】①弱毒疫苗组于免疫鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、大脑及注射部位肌肉均中检测到GPV抗原;基因疫苗组于免疫鹅的心、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠及注射部位肌肉中检测到GPV抗原。②弱毒疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞14 d后对ConA的反应开始增强,35 d达到最高值后下降;基因疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞OD值先下降,14 d后开始上升并高于空白质粒对照鹅和PBS对照鹅,35 d时达最大值,以后又逐渐下降,第21-63天极显著（P＜0.01）高于PBS对照鹅和空白质粒对照鹅,第21-63 天时极显著（P＜0.01）高于弱毒疫苗免疫鹅。③弱毒疫苗免疫鹅血清抗体第3天开始高于PBS对照鹅,第28天达到最大值后逐渐下降;基因疫苗免疫鹅血清体从第14天开始高于PBS对照组,第28天达最大值,第21-217天显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于PBS和空白质粒对照鹅;基因疫苗免疫鹅血清抗体除第28天极显著(P＜0.01)高于GPV弱毒疫苗免疫鹅外,其余时间与弱毒疫苗免疫鹅差异不显著。【结论】pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌和各肠段中表达并能够诱导鹅体产生良好的细胞免疫和体液免疫,基因疫苗诱导鹅体产生免疫应答的能力优于弱毒疫苗,结果为阐述pcDNA-GPV-VP3的免疫机制和临床应用提供了数据资料。     

几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较

用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清.研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1:4096(IHA),与每次都使用抗原的传统免疫程序制备的抗体效价相当,但所用抗原剂量减半,该法优于另外2种免疫程序.     

法氏囊病毒感染对鸡群新城疫疫苗免疫效果的影响

为了解传染性法氏囊病毒(IBDV)感染对鸡新城疫体液免疫应答的影响,对IBDV感染康复鸡群和正常鸡群接种新城疫(ND)疫苗后,通过血凝抑制试验测定血清中ND抗体。结果表明:1次、2次和3次免疫后,IBDV感染康复鸡群抗体效价始终显著低于正常鸡群,重复免疫并不能消除这种差异。     

抗阿莫西林多克隆抗体的制备

[目的]为研究阿莫西林残留的免疫学检测方法奠定基础。[方法]采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法将阿莫西林分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原AMX-BSA和检测抗原AMX-OVA,用AMX-BSA免疫成年兔以获得高效价的多克隆抗体。[结果]免疫抗原AMX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特征,其最大吸收峰在276 nm处,说明载体蛋白BSA与AMX成功偶联,可用于动物免疫。检测抗原AMX-OVA最大吸收峰在275 nm处,说明载体蛋白OVA与AMX成功偶联,可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明,2只兔抗血清效价较高,均达1∶32 000以上,说明有特异性抗体产生。[结论]该研究成功制备了抗阿莫西林多克隆抗体,也进一步证明药物偶联成功。     

浙江省鸭、鸡、鹅群感染坦布苏病毒的血清学调查与分析

为分析坦布苏病毒（TMUV）在鸭、鸡、鹅群中的感染情况,开展了血清流行病学调查。2010-2014年间,在浙江省11个地市采集鸡、鸭、鹅血清样品4 989份,采用ELISA方法检测TMUV抗体水平。结果表明：鸭、鹅、鸡的抗体阳性率分别为27.33%,6.94%,1.11%。按年度分析,在2010-2011年鸭TMUV引起的产蛋下降疫情流行期间,鸭感染群的TMUV抗体阳性率为54.83%,鹅、鸡未采样检测;2012年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为33.88%,20.00%,鸡未检测到抗体阳性群;2013年鸭、鹅、鸡TMUV感染群的抗体阳性率分别为49.68%,10.00%,28.00%;2014年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为39.19%,6.67%,鸡未检测到抗体阳性群。总体来看,鸭群在2010-2011年TMUV流行期间的抗体水平最高,表明鸭群是TMUV感染的主要禽种。     

用低龄动物制备高效价Et免疫血清的探讨

[目的]建立一种用低龄日本大耳白兔制备高效价迟钝爱德华氏菌（Edwardsiella tarda,Et）免疫血清的方法。[方法]先制备迟钝爱德华氏菌（Et）抗原。用日本大耳白兔作免疫动物,分2组试验,一组是2月龄组（T组）,另一组是6月龄（S组）。采取耳缘静脉注射的方法,小剂量连续多次（第1、7、14、21、27、33、41天时免疫剂量分别为O．2、0．2、0．25、0．2、0．25、0．3、0．4ml）免疫日本大耳白兔。免疫后,收集免疫血清,然后用微量凝集反应法分2次试血（第1次是免疫第33天后的第7天,采用1：20抗血清;第2次是免疫第41天时,采用1：40抗血清）,测定免疫血清抗体效价。[结果]凝集反应显示,在免疫剂量相同的情况下,第1次试血测＆免疫血清效价,2月龄组T：血清效价最高为1：640,6月龄组S1、S2和S4血清效价均达1：1280,显示6月龄组的体液免疫应答反应强于2月龄组;经继续免疫8d后,第2次试血测凸免疫血清效价可见,2月龄组的T1、T2、T3和6月龄组的S1、S2、S4免疫血清效价一样,均高达1：5120。表明此时在接受相同剂量助抗原刺激后,2月龄组和6月龄组的体液免疫应答反应已趋相同。[结论]试验中所采用的T组动物（日本大耳白兔）月龄较小,免疫后仍产生了与S组一致的高效价抗血清,说明用低龄日本大耳白兔制备高效价凰免疫血清的方法可行。     

兔抗双酚A多克隆抗体的制备

[目的]通过动物免疫制备抗双酚A多克隆抗体。[方法]采用双酚A半抗原（BPAH）和双酚酸（DPA）分别与牛血清蛋白（BSA）偶联制备免疫抗原,免疫新西兰白兔获得抗血清;采用间接竞争ELISA法测定抗血清的效价。[结果]经紫外扫描及红外光谱分析,完全抗原BPAH-BSA及DPA-BSA制备成功;供试3只阳性大白兔的抗血清效价分别为〉51200、25600和12800,完全抗原BPAH-BSA免疫的大白兔抗血清效价高于DPA-BSA免疫的大白兔抗血清效价。[结论]该研究成功制备了高效价抗双酚A多克隆抗体。     

人参皂苷抗鸡新城疫病毒的试验研究

为探讨人参皂苷抗鸡新城疫病毒的作用机理,试验用鸡新城疫病毒人工感染雏鸡,采取人参皂苷口服,观察试验鸡只的临床症状及体重变化,测定血清抗体效价的变化情况。结果表明,人参皂苷组可以明显推迟人工感染鸡新城疫病毒(NDV)雏鸡的发病日龄,缩短病鸡的发病过程。试验鸡饲喂人参皂苷后可明显降低发病率和死亡率并促进抗体的产生。说明人参皂苷可以降低病毒对组织的损害程度,增强雏鸡对新城疫病毒的抵抗力。