猪等孢球虫纯种卵囊扩增及生物学特性研究

应用单卵囊分离技术,获得猪等孢球虫纯种卵囊,给6头3日龄长大二元仔猪每头经口一次人工感染30个纯种猪等孢球虫孢子化卵囊,收集纯种后代,再对6头3日龄长大二元仔猪每头人工感染2 000个孢子化卵囊继代扩增.观察人工感染仔猪的排卵囊规律包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数（OPG值）和仔猪感染后的临床症状,进行了扩增卵囊的孢子化过程及形态结构观察和显微照像.结果表明,感染30个猪等孢球虫孢子化卵囊的仔猪最早在感染后第8d（8 days post-inoculation,DPI 8）从粪中检出卵囊,排卵囊高峰期在DPI 17～21,持续4～5 d,显露期15～18 d;感染2 000个猪等孢球虫孢子化卵囊的仔猪最早在DPI 5从粪中检出卵囊,排卵囊高峰期在DPI 8～13,持续4～6 d,显露期7～13 d.潜隐期、显露期、OPG值与感染剂量存在相关关系,即感染剂量越小,潜隐期越长,显露期越长,OPG值越小;反之亦然.感染30个卵囊的仔猪无临床可见病征;感染2000个卵囊的仔猪呈现腹泻甚至黄色水样腹泻等明显症状.常规培养新收集的猪等孢球虫卵囊,2 h时胚孢子开始分裂,8 h分裂成2团,12 h形成2个孢子囊,20h开始形成子孢子并可见内残体,最早26 h卵囊完全孢子化;72 h时孢子化率达50%,96 h达80%.本试验扩增和继代扩增所获球虫卵囊,与亲本和文献报道的猪等孢球虫生物学特性相一致.     

猪等孢球虫的致病性及生活史的研究

猪等孢球虫能致仔猪球虫病,接种２０万孢子化卵囊后３ｄ出现腹泻,第４ｄ水泻,仔猪脱水消瘦,死亡率１５％,接种后５ｄ排卵囊,持续５ｄ,显微病变见肠绒毛萎缩,局部粘膜糜烂与溃疡,并出现纤维素性坏死性肠炎,猪等胞球虫的发育史包括２代无性生殖和１代有性生殖,多寄生于空肠,回肠,感染后３６ｈ出现第１代裂殖体,８４ｈ出现第２代裂殖体。有性阶段出现在感染后９６ｈ,１０８ｈ出现未成熟卵囊,１２０ｈ结肠粪中检出卵囊。     

江苏丹阳等县猪球虫调查报告

本文报导了江苏省丹阳等三县猪球虫的种类以及不同年龄猪的球虫感染率。共查276头猪,球虫阳性的95头,阳性率为34.4％。从276头不同年龄的猪共检到1科2属11种球虫卵囊,其中艾美尔属Eimeria9种:猪艾美尔球虫E.suis,蒂氏艾美尔球虫E.debiecki,光滑艾美尔球虫E.cerdonis,粗糙艾美尔球虫E.scabra,四川艾美尔球虫E.szechuanensis,豚艾美尔球虫E.porci,最小艾美尔球虫E.perminuta,新蒂氏艾美尔球虫E.neodebrleki,有刺艾美尔球虫E.spinosa。等孢属I sospora两种,即猪等孢球虫I.suis,阿拉木图等孢球虫I.almataensis。其中猪艾美尔球虫,光滑艾美尔球虫,豚艾美尔球虫,最小艾美尔球虫,新蒂氏艾美尔球虫,有刺艾美尔球虫和猪等孢球虫7种为国内首次报道。     

猪等孢球虫感染仔猪血液生理生化指标动态变化

应用纯种猪等孢球虫(Isospora suis)孢子化卵囊人工感染9头6日龄仔猪,检测了感染前1 d和感染后1,3,6,9,11 d时血液生理生化指标.结果表明,仔猪感染 I.suis后,白细胞数在感染后1 d开始增多,11 d达最高;红细胞在感染后3 d开始减少,9 d最低,11 d时恢复到感染前水平.血清丙氧酸氨基转移酶活性逐渐升高,感染后11 d时达最高值;天冬氨酸转氨酶感染后6 d升高并达到最高;感染后1 d碱性磷酸酶活性下降,11 d最低;血清乳酸脱氢酶、γ-谷氧酰转肽酶、α-羟丁酸脱氢酶活性均呈下降趋势,但无显著差异.感染后1 d时白蛋白含量下降,至11 d恢复到正常水平;球蛋白含量持续下降,但差异不显著.血清葡萄糖含量升高但无显著变化.感染后1～3 d时血清尿素氮含量降低,之后逐渐升高,至11 d时达最高;尿酸在感染后1～3 d升高,之后持续下降,至11d时最低.血清总胆固醇持续降低;甘油三酯在感染后1～9 d升高,11d时恢复到感染前水平.血清K 含量在感染后持续降低,但差异不显著.嗜中性白细胞,单核细胞,血红蛋白含量,红细胞压积,总蛋白含量,Na',Cl-,Ga2 .Mg2 含量均无明显变化.     

猪等孢球虫纯种株的建立及其生物学特性研究

从哺乳仔猪的腹泻粪样中分离出等孢球虫卵囊,感染仔猪建立球虫纯种株.通过卵囊形态结构观察与18S rRNA PCR鉴定,鉴定该球虫分离株为猪等孢球虫.将6只24日龄断奶仔猪分为2组,分别感染4×102和104个孢子化卵囊,观察仔猪的临床表现及虫株的潜伏期、显露期和卵囊产量.结果表明,感染4×102个卵囊后仔猪未出现腹泻症状,感染104个卵囊后仔猪出现腹泻且持续6 d.感染4×102个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期为7 d,每个卵囊产出5.72×103个卵囊;感染104个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期18 d,每个卵囊产出6.41×102个卵囊.由此可见,该株猪等孢球虫对仔猪具有致病性,可用于构建猪等孢球虫病动物模型及其疾病学研究.     

猪等孢球虫PCR诊断方法的建立

参照GenBank收录的Isospora suis 18SrRNA基因全序列(U97523),利用引物分析软件Oligo 6.57和Primer Premier 5.0设计了一对引物(上游引物:5''-tcctgcgagtactcatatgc-3'';下游引物:5''-gttcagc-tacgcataccttg-3''),首次扩增出猪等孢球虫分离株的18SrRNA基因序列,结合GenBank上登录的相关原虫序列,用DNAstar4.0软件比较其同源性,经Clustalx1.81序列比对,Paup4.0、Treeview3.0、Phylip种系发育关系软件分析后,证实该分离株为猪等孢球虫,并且河南不同地区之间的猪等孢球虫没有明显遗传差异。     

孔雀球虫种类调查研究

对郑州动物园15只孔雀（pavo)的粪便进行了检查，结果发现它们主要感染鸟等孢球虫Isospora Iacazei Labbe,1893；偶见有梅氏艾美尔球虫Eimeria mayurai Bhatia et Pande,1966和曼德勒艾美尔球虫E.mandali Banik et Ray1964。对这些球虫已孢子化卵囊作了描述、摄影绘图，并列出了检索表。     

东北虎源等孢球虫虫种的鉴定

对采自黑龙江省某动物园的东北虎源球虫虫种进行鉴定。对东北虎源球虫进行形态学观察;应用孢子化卵囊对犬进行感染性试验;根据已发表的猫等孢球虫核糖体内转录间隔区Ⅰ(ITSⅠ)序列设计引物,提取虫体基因组DNA扩增目的片段,并与其他球虫的ITSⅠ序列进行同源性比较。结果表明,根据形态学观察发现该球虫符合等孢属球虫的特征;用孢子化卵囊感染犬,结果不能在其粪便中检出卵囊;利用聚合酶链式反应(PCR)扩增的目的片段,与其他19种球虫的ITSⅠ序列同源性为35.97%~98.71%之间。通过对东北虎源球虫形态学观察、犬的感染性试验与分子鉴定,确定东北虎源球虫为等孢属球虫,并且与猫等孢球虫亲缘最近。     

猪球虫病的防治

猪球虫病是由球虫感染所引起,主要发生于仔猪,尤其是哺乳仔猪最为多见,一年四季都可发生,病猪和隐性感染猪是主要传染源,高温高湿的夏秋季最易流行;感染猪主要表现消化道症状,后期还会出现脱水,日龄越小病死率越高;预防本病需加强环境卫生管理,配合药物或益生菌制剂进行预防;本病治疗建议采用对因治疗配合对症治疗的方案,能显著降低死亡率,减少经济损失。     

华南地区猪圆环病毒3型分子流行病学研究

猪圆环病毒3型(PCV3)是一种新的猪圆环病毒类型,为了解PCV3在华南地区的分布及其分子流行病学,应用荧光定量PCR方法对华南地区的临床样品进行检测,然后对PCV3阳性样品进行全基因组扩增和测序,将获得的7株PCV3核酸序列与国内外参考毒株进行遗传变异分析。结果表明,华南地区送检的临床样品和猪场的PCV3阳性率分别为46.3%和69.2%,7株PCV3毒株与国内外的参考毒株同源性为97.4%~99.8%,而ORF2核苷酸及其推导的氨基酸序列同源性分别为96.6%~99.8%和96.7%~99.5%。由此可见,PCV3在我国华南地区已经广泛存在。     

豫南地区猪链球菌兰氏分群研究

随着养猪业的不断发展,各种血清型链球菌也相继出现于各养殖场。自2000年至今,我们从豫南地区送检病料中分离了20株链球菌.依据兰氏分群原理,做了一系列生化实验,结果表明:兰氏C群15株,占75%,兰氏D群3株,占15%,其它占10%,其结果与许多研究报告结果一致。     

猪链球菌病与诊断技术研究进展

猪链球菌病是由多种致病性链球菌感染引起的一种人畜共患传染病,综述了猪链球菌病的感染因子及其诊断技术的研究进展。     

河南省大蒜病毒病的分子检测

为了明确引起河南省大蒜病毒病的病原,采用RT-PCR方法对采集的表现矮缩症状的大蒜样品分别用5对引物进行检测,结果表明,在大蒜样品中同时检测到洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)、韭葱黄条病毒(leek yellow stripe virus,LYSV)和青葱潜隐病毒(shallot latent virus,SLV)3种病毒,没有检测到大蒜普通潜隐病毒(garlic common latent virus,Gar CLV)和青葱X病毒(allexiviruses)。根据测序结果进行序列和遗传进化分析发现,河南省OYDV分离物与SLV分离物在进化树上都单独形成一分支,其中OYDV与其他分离物的核苷酸同源性为94.8%~96.9%,SLV与其他分离物的核苷酸同源性在86.5%~88.5%,河南省LYSV分离物与墨西哥分离物的同源性达到99.4%,亲缘关系最近。试验中同时检测到3种病毒,说明河南省大蒜病毒病为多种病毒复合侵染。     

阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物治疗猪链球菌病的研究

为研究阿莫西林钠-酒石酸泰复方药物乐菌素治疗猪链球菌病的药效学,选用60只15g左右的昆明鼠,以多重耐药的临床分离猪链球菌为病原,以腹腔注射为感染途径,对猪链球菌的病理模型进行了复制,按照Reed-Munch法计算LD50为9.61×108cfu·mL-1。在此基础上,选用80只昆明鼠,接种LD50菌液,分别口服阿莫西林钠,酒石酸泰乐菌素及阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物。结果表明,阿莫西林钠-酒石酸泰乐菌素复方药物组的作用效果明显优于单药组,小鼠存活率为80%,阿莫西林钠组的小鼠存活率为70%,酒石酸泰乐菌素组为60%。     

广东省某猪场链球菌的分离与鉴定

为了解广东省茂名某猪场暴发猪链球菌病的详细情况及制作灭活疫苗给猪群接种免疫。该研究通过分离细菌、PCR鉴定、生化试验等方法分离、鉴定细菌,并通过动物试验了解该分离菌的致病性。最后通过药敏试验找出高敏药物用于临床治疗及了解该猪场细菌病的耐药性,指导临床合理用药。