用于蛋白质组分析的两种马铃薯块茎蛋白质提取方法的比较

【目的】进行两种提取方法下马铃薯块茎蛋白质组结果差异分析,并确定最佳马铃薯块茎蛋白质提取方法.【方法】采用酚提取法和三氯乙酸/丙酮沉淀与乙酸铵/甲醇沉淀相结合的两步沉淀法提取马铃薯块茎蛋白质,进行2-DE分离,对差异表达蛋白质进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定.【结果】两步沉淀法提取的马铃薯块茎蛋白质较酚提取法获得蛋白质纯度和浓度及蛋白质点数目均明显增加,双向电泳凝胶图谱分辨率较高.质谱鉴定结果表明,两步沉淀法中鉴定的差异表达蛋白质丰度均显著高于酚提取法,并鉴定到一些新出现的蛋白质包括假定的线粒体NAD依赖的苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶类似物和蛋白酶抑制剂II前体类型B.【结论】提取马铃薯块茎蛋白质时两步沉淀法优于酚提取法.     

文冠果种子蛋白质提取及组分分析

探索文冠果种子蛋白质及其蛋白质组分的提取方法,采用凯氏定氮法及聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)进行分析,为文冠果种子蛋白的高效提取与开发利用奠定基础。结果表明,文冠果种仁的蛋白质质量分数为26.29%,经脱脂后其脱脂粉中蛋白质量分数为62.04%。采用连续分级提取法得到文冠果种脱脂粉中球蛋白、清蛋白、谷蛋白及醇溶蛋白组分的质量分数分别为26.38%、21.50%、2.49%和1.99%,并采用一次直接提取法可得到水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白与碱溶蛋白的提取率分别为34.63%、75.57%、7.26%和80.09%。采用碱溶酸沉法对脱脂后的文冠果种进行蛋白提取,蛋白质提取率达84.06%,得率为36.40%,可得到纯度为83.92%的蛋白粉。SDS-PAGE分析图谱表明文冠果种子蛋白的主要亚基分子质量分布在20～60ku,并计算得出4种蛋白组分的主要亚基分子质量,为文冠果蛋白组分的进一步研究提供依据。     

不同方法提取昆虫蛋白质效果比较

本试验以黄粉虫为试验材料,对昆虫蛋白质的提取方法进行筛选。采用的提取方法共4种,分别为碱提蛋白法、盐提蛋白法、胰蛋白酶提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。经过试验数据分析,得出最佳提取方法为胰蛋白酶提蛋白法,碱提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法次之,盐提蛋白法效果最差。     

药用植物白芷种子萌发特性研究

该文研究了实验室条件下,不同pH值、赤霉素(GA3)浓度和光照时间对白芷种子萌发的影响。结果表明:白芷种子对pH值具有广泛的适应性,在pH5.0~9.0均可萌发,其中以pH7.0~8.0条件下萌发率较高;用150mg·L-1的GA3浸种处理6h更有利于白芷种子的萌发;白芷种子在有光的条件下和黑暗条件下均能萌发,其中以光照12h·d~(-1)条件下的萌发率最高。白芷种子萌发效果的最佳组合为:用150mg·L~(-1)的GA3浸种处理6h,播种在pH7.0~8.0条件下,进行光照12h·d~(-1)处理。     

适于SDSPAGE分析的高粱叶片蛋白质提取方法

为了探索适于高粱叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,对TCA/丙酮沉淀后的蛋白质分别用裂解液Ⅰ(尿素+硫脲+CHAPS+DTT)和裂解液Ⅱ(尿素+DTT)2种裂解液进行裂解,用改良的Bradford法进行定量分析,并进行SDS-PAGE分离检测。结果表明,裂解液Ⅰ所得蛋白质质量浓度(2.538g/L)高于裂解液Ⅱ所得蛋白质质量浓度(1.905g/L),且两者呈极显著差异(P<0.05),但裂解液Ⅰ所得蛋白质电泳条带出现1条杂带;而裂解液Ⅱ所得蛋白质能满足上样要求且电泳条带清晰无杂带。因此,TCA/丙酮沉淀并用裂解液Ⅱ进行裂解的方法适用于高粱叶片的SDS-PAGE分析。     

秦艽种子蛋白质电泳提取方法研究

分别采用40mmol／L氯化钠水溶液、40％乙醇、蒸馏水提取秦芜艽子蛋白质．并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）图谱比较。结果表明：3种提取方法间SDS—PAGE图谱谱带数目、分布及强弱不同。其中以40mmoL／L氯化钠水溶液提取的蛋白质SDS—PAGE图谱在3个供试秦艽种类间差别明显,且谱带清晰,可用于泰艽种子的蛋白研究与种子鉴别。     

不同方法提取车前草蛋白质效果比较

以车前草叶片为材料,采用正交试验方法,对车前草蛋白质的提取条件进行优化研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率高于盐提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。碱提取蛋白质的优化工艺指标为:碱液浓度为1. 5%,浸提温度为60℃,抽提时间为60 min,固液比为1:10。     

杜鹃叶片3种蛋白质提取方法的比较

以映山红(R.simsii)、马银花(R.ovatum)、满山红(R.mariesii)和云锦杜鹃(R.fortunei)4种杜鹃为实验材料,采用TCA-丙酮法、酚法和TCA-丙酮-酚法3种蛋白质提取方法提取杜鹃叶片蛋白质,并应用双向电泳技术(2-DE)比较分析不同方法的蛋白质提取率、溶解性、完整性等的差异,确立适用于2-DE分析的杜鹃叶片蛋白质提取方法。结果表明,TCA-丙酮法提取的蛋白溶解性差且粘稠,得到的蛋白质点少,不适合杜鹃叶片蛋白的提取;酚法提得的蛋白质溶解性好,蛋白质点多,但是杂质较多,且此法不适用于映山红叶片蛋白的提取;TCA-丙酮-酚法提取的杜鹃叶片蛋白质位点较多且清晰,重复性也好,且4种杜鹃叶片蛋白的提取效果都比较好。因此,TCA-丙酮-酚法被认为最适于杜鹃属植物叶片蛋白质的提取及分析。     

洋虫成虫蛋白质化学提取方法的比较

洋虫成虫蛋白质提取方法及主要工艺指标筛选研究结果表明:3种方法中碱提蛋白法的蛋白质得率最高,其次为Tris-HCl提蛋白法,盐提蛋白法得率最低。碱提蛋白法的主要工艺指标为:碱液质量分数1.0%、温度80℃、时间60min、固液体积比为1∶15时蛋白质得率有最大值;盐提蛋白法:盐液质量分数1.0%、温度20℃、时间2h、固液体积比为1∶10时蛋白质得率有最大值;Tris-HCl提蛋白法:Tris-HCl液pH值8.1、抽提温度10℃、抽提时间30min、固液体积比1∶10时蛋白质得率有最大值。     

三七种子总RNA提取方法的比较

从三七种子中提取高质量的RNA。采用CTAB法、天根试剂盒法、普通Trizol法、改良Trizol法对三七种子总RNA进行提取比较。结果表明,改良Trizol法提取的三七种子RNA纯度好、浓度高、无DNA污染,且成本低廉、操作简单,质量符合后续的基因克隆、cDNA文库构建、基因表达等分子生物学研究的要求。     

大活籽挥发油超临界萃取工艺及成分分析

通过正交试验,讨论了超临界CO2萃取大活(Angelica dahurica Benth. et Hook)籽挥发油过程中萃取压力、温度、时间对萃取率的影响,同时将试验结果与水蒸汽蒸馏法所得结果进行了比较,并采用气质联用(GC-MS)方法对比分析了超临界油与水蒸汽挥发油的成分.结果表明:超临界萃取压力的变化对萃取率的影响最大,萃取温度次之,而萃取时间最小.从GC-MS分析结果看,超临界CO2萃取大活挥发油的萃取率较水蒸汽蒸馏法高,最佳萃取条件为:萃取压力30MPa,萃取温度45℃,时间2h,挥发油收率为2.78%.     

祁白芷种子水浸液的萌发抑制效应初探

制备不同处理的祁白芷种子水浸液,分别对小麦、玉米、棉花、荆芥种子的萌发进行了生物检测,并鉴定了祁白芷种子中水溶性内源萌发抑制物质的活性大小。结果表明:祁白芷种子和种翅膜中均含有一定活性的水溶性内源萌发抑制物质。该抑制物质不仅能降低种子的发芽率,还能推迟种子的萌发时间,此外,还会对种苗生长起抑制作用。     

杭白芷种质资源遗传多样性的AFLP分析

通过对50份杭白芷种质资源的AFLP分析,探求各种质间的遗传多样性。采用扩增片段长度多态性 （AFLP）标记,在DNA水平上进行遗传多样性研究,筛选出12对选择性扩增引物,将扩增出的条带作为原始矩阵,用NTSYS PC软件计算并分析了杭白芷种质间的相似度,构建了遗传系统进化树。结果表明,50份杭白芷种质间,相似度均超过70%,总体上亲缘关系都比较接近,相对而言,ZYS002039和ZYS002045种质,与其他种质的遗传背景差异较大。     

大活茎挥发油成分分析

采用水蒸气蒸馏的方法从大活茎中提取挥发油,运用GC-MS联用技术分析鉴定了其中的88个组分,主要成分是脂肪酸酯、酸及倍半萜类化合物,含量高于或近于5%。大活茎含有根部挥发油的主要成分,同时也含有一些根部所不含有的化学成分,且含量较高。通过对大活挥发油的分析,为大活茎的进一步开发利用提供了科学依据。     

祁白芷氮、磷、钾积累特征研究

研究表明,祁白芷积累的大量矿质元素中氮、钾最多,磷最少。祁白芷对氮素的主要积累期是在生长140d以后,吸收的氮素主要积累在地上部;磷素含量在生长90d时最高,此时磷素分配以地上部为主,在生长140—190d时磷素积累量最大,主要积累在地下部;钾素含量在生长165d时最高,在生长140—190d时积累量最大。因此,在祁白芷生产上,前期宜少施氮肥、多施磷肥。在生长140d以后追施氮、磷、钾肥。     

施用腐植酸肥对白芷产量和质量的影响

为了研究施用腐植酸肥对白芷产量和质量的影响,为腐植酸肥在白芷上的应用提供理论依据。试验采用单因素随机区组设计,收获后测定产量与主要有效成分含量。结果表明,不同处理对白芷的产量和质量均有一定影响。施用腐植酸类肥料均可提高白芷产量及质量,其中以1.0 g.L-1浓度的黄腐酸进行叶面喷施综合效果最好。     

祁白芷生理指标和药效成分的动态变化及其相关性分析

试验研究了祁白芷生理指标和药效成分的动态变化及其相关性。结果表明:在祁白芷生长90~165 d期间,生长旺盛期叶片中可溶性糖、可溶性蛋白、淀粉、香豆素含量较高。在生长165~190 d期间,生长中心转向地下部,叶片中各指标含量呈下降趋势,根中各指标含量增加迅速,是祁白芷植株中各生理指标和药效指标积累的主要时期。从生理指标和药效指标的相关性来看,根中可溶性糖、可溶性蛋白与香豆素含量呈负相关,叶片中淀粉与香豆素含量呈正相关,因此通过一些处理来改善器官中可溶性糖、可溶性蛋白质、淀粉的含量可以提高祁白芷主要有效成分的含量。     

四种当归多糖提取方法的比较研究

对热水浸提法、超声波法、纤维素酶与果胶酶法这4种提取当归多糖的方法进行比较.以当归多糖得率为指标,用苯酚-硫酸法对当归多糖进行测定,优化4种方法的提取工艺并比较.结果显示,在最佳工艺条件下,热水浸提法的多糖得率为21.78％,超声波法为22.15％,纤维素酶法为24.55％,果胶酶法为24.81％.酶法是当归多糖提取较佳的选择.纤维素酶法的最佳提取条件是加酶量1.0％,提取温度60℃,提取时间60 min,pH值6.0;果胶酶法的最佳提取条件是加酶量1.0％,提取温度50℃,提取时间90 min,pH值5.5.     

氮肥、磷肥、钾肥对祁白芷生理指标和药效成分的影响

本试验旨在研究氮肥、磷肥、钾肥对祁白芷生理指标和药效成分的影响。试验结果表明,氮肥有利于祁白芷中可溶性蛋白、可溶性糖和淀粉的合成及积累,对药效成分香豆素的影响不明显;磷肥有利于可溶性糖和香豆素的合成及积累,不利于淀粉在根中的合成及积累;钾肥最有利于增加香豆素的合成和积累,也有利于可溶性糖和淀粉的积累;各生理指标和药效成分积累的主要作用时期为收获前25d。综合考虑各因素,祁白芷施用基肥时,应多施钾肥、适当少施磷肥、合理施用氮肥;在收获前25d左右进行追肥,主要追施钾肥,不宜追施磷肥。