RAPD技术在木耳属杂交种及原生质体融合子鉴定分析中的应用

本研究以ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）技术为主，比较分析食用菌木耳属（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）种内杂交种．种间原生质体融合子与其亲本菌株的ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒｓｅＣｈａｉｈＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增的ＤＮＡ片段之间差异，并辅以其它手段，如核相及核数目观察，同功酶鉴别，以期建立完整有效的检测技术系列，确证其杂交种融合子的真实性及可靠性。在ＲＡＰＤ分析中，用于测试的１０种随机引物仅有４种引物与供试菌株的ＤＮＡ模板具有较好的结合能力，其中１种引物可用于检测杂交种及其亲本，另外３种引物可用于检测融合子反亲本。检测结果显示：３个供试杂交种中有２个为真杂合子，１个为假杂合子；２个供试融合子均为非稳定杂合子。与常规方法鉴定结果比较基本相符。因此，ＲＡＰＤ技术提供了一种快速、简便、准确的杂交种及融合子的鉴别方法。     

香菇DNA导入平菇原生质体及转化子鉴定研究

采用氯化苄方法提取香菇总ＤＮＡ，用Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ Ⅱ电击系统将香菇ＤＮＡ导入平菇单核原生质体，通过香菇ＤＮＡ的导入，利用基因互补原理获得了能出菇的转化子１－１和１３－４８，并对转化子进行了拮抗试验、菌丝生长速度分析，酯酶同工酶分析和ＲＡＰＤ分析。     

香菇线粒体DNA限制性片段长度多态性

研究了来自不同地理区域的５１个香菇野生菌株的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ），其中３８株来自日本，７株来自巴布新几内亚，４株来自新西兰，１株来自婆罗州，１株来自泰国。把它们的ｍｔＤＮＡｓ用限制酶ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ消化，分别产生２４、１２种ＲＦＬＰ型。经比较，５１个野生香菇菌株的ｍｔＤＮＡ有２８种表型。以共迁移限制性片段为基础，计算表型对的相似矩阵，采用ＵＰＧＭＡ聚类，Ｆｉｔｃｈ－Ｍａｒｇｏｌｉａｓｈ法分析，结果同时表明香菇ｍｔＤＮＡ表型分成５群，与各自的地理区域相对应。本研究所得到的系统发育关系证实先前所作的同工酶分析结果，在明香菇存在几个种内组，它们的线粒体和核基因组存在遗传差异。     

葡萄属植物染色体DNA的提取、纯化及RFLP鉴定

利用ＪｅｎｎｉｆｅｒＡ．ＣｏｕｃｈａｎｄＰａｕｌＪ．Ｆｒｉｔｚ的改良方法提取葡萄嫩叶染色体ＤＮＡ，并进行ＲＦＬＰ分析。结果表明，该方法提取的ＤＮＡ均未降解；以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ层析柱纯化后可进行ＲＦＬＰ分析；核糖体ｒＤＮＡ的ＰＶｖｃ一Ａ片段制备的探针与ＨｉｎｄⅢ酶组合，使所有供试样品都显示多态性。     

葡萄属植物染色体DNA的提取,纯化及RFLP鉴定

利用Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ａ．Ｃｏｕｃｈ ａｎｄ Ｐａｕｌ Ｊ．Ｆｒｉｔｚ的改良方法提取葡萄嫩叶染色体ＤＮＡ，并进行ＲＦＬＰ分析。结果表明，该方法提取的ＤＮＡ均未降解；以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ层析柱纯后后可进行ＲＦＬＰ分析．核糖体ｒＤＮＡ的ＰＶｖｃ－Ａ片段制备的探针与ＨｉｎｄⅢ酶组合，使所有供试样品都显示多态性。     

RFLP,RAPD技术在食用菌研究中的应用

随着分子生物学的发展,多种在分子水平上研究生命现象的技术与方法业已建立,尤其是利用分子标记去研究生物的系统进化、遗传变异、基因定位与克隆等已成为近年来的研究热点。目前,在食用菌研究领域中应用最为广泛的分子标记主要是ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ,它们在食用菌的系统进化、遗传变异、菌株及杂种鉴定等方面都已得到了较好的应用。本文主要对ＲＦＬＰ与ＲＡＰＤ技术在食用菌研究中的应用作一概要介绍。1　ＲＦＬＰ技术在食用菌研究中的应用ＲＦＬＰ(Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)即限制性…     

葡萄属植物核糖体基因的RFLP分析

葡萄属植物核糖体基因的ＲＦＬＰ分析张立平１林伯年２沈德绪２董继新２（１浙江农业大学生物科学系；２浙江农业大学园艺系，杭州３１００２９）关键词葡萄属；核糖体基因；ＲＦＬＰＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＲＦＬＰｉｎＲｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡｏｆＶｉｔｉｓＺｈａｎｇＬ...     

RELP在柑桔遗传多样研究上的应用

通过研究摸索出适宜提取柑桔叶片总ＤＮＡ的方法，利用异源ＤＮＡ探针－小麦ｒＤＮＡ克隆ＰＴＡ７１，与用四种核酸内切酶ＥｃｏｒＩ，ＰｓｔＩ，ＢａｍＨ１及Ｂｇ１Ⅲ酶切消化的几种柑桔叶片总ＤＮＡ杂交，结果表明，ＰＴＡ７１－ＥｃｏＲ１，ｐＴＡ７１－ｐＴＡ７１－ＢａｍＨ１，ｐＴＡ７１－Ｂｇ１Ⅲ四种探针－酶组合均可在本地早、宜昌橙、枸橼和金柑等柑桔等型中检测到ＲＦＬＰ差异，利用ｒＤＮＡ的ＲＦＬＰ变异可以从分子水平     

AFLP技术在黄瓜种资源鉴定及分类上的应用初探

关于黄瓜不同生态型之间的亲缘关系,有学者研究发现各类型黄瓜的遗传变异幅度较小,遗传基础狭窄,用同工酶酶谱研究较为困难〔１,２〕。随着生物技术的发展,ＲＡＰＤ技术开始应用于各类作物种属的分类和品种的鉴定,但在黄瓜种质资源和品种鉴定方面,因扩增的ＤＮＡ多态性很低,效果不理想〔２～４〕。ＡＦＬＰ技术是继ＲＡＰＤ技术后发展起来的新型分子技术,该方法克服了ＲＡＰＤ技术重复性差、多态性低等缺点,以其准确和高多态性而广泛用在资源的分类及分子标记辅助育种等方面。但尚未见到在黄瓜方面应用的报道。本文试图用ＡＦＬＰ…     

分子标记在植物上的应用

综述分子标记技术ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ的基本原理、优缺点及其在植物研究中的应用情况。     

应用RAPD技术对香菇融合菌株进行遗传鉴定

本文应用RAPD技术与聚类分析方法,对香菇细胞融合菌株F1及亲本S1、465进行遗传分析.根据DNA扩增的指纹图谱,估算融合子与亲本的DNA相似系数并构建遗传相关性聚类图.结果表明,RAPD技术与聚类分析方法可应用于香菇细胞融合菌株的遗传鉴定.     

平菇与香菇融合子后代子实体的细胞学研究

平菇(Pleurotus sapidus)、香菇(Lentinus edodes)及其融合子后代子实体的细胞学观察表明:平菇、香菇的担子细胞及核分裂行为均属正常,而融合子后代的担子细胞发生异常,其担子细胞顶端出现粗大伸长的担子梗,其中有的形成一个孢子。处于终变期的染色体收缩成小球状,其数目多于双亲染色体,分裂后期出现落后染色体,融合子后代子实体不形成孢子印,镜检发现有少数孢子。融合子所产生的孢子与双亲的孢子相比较,在形态特征及大小上均有较显著的差异。     

RAPD技术在金针菇杂交育种中的应用

本文以金针菇不同亲本菌株及其杂交种为材料，用２０个随机引物进行了ＲＡＰＤ分析，结果表明，两个随机引和的扩增出特异的ＤＮＡ片段，经三次重复，均获得相同结果，且能明显地区别鉴定出真正的杂交种，因此，在杂交育种中，ＲＡＰＤ分析是一种简便、快速、有效地从杂交后代中区别鉴定出真正杂交种的方法。     

野生马桑香菇的鉴定及其生物学特性

以贵州省生物研究所保藏的马桑香菇菌株为试材,对其进行ITS鉴定,按照基础生物学研究方法,研究了不同碳源、氮源、温度以及pH对其菌丝生长的影响,以期为野生马桑香菇资源的开发利用提供参考依据。结果表明:所选菌株为有机香菇下的进化分支,同其它香菇属食用菌具有本源差异,且野生马桑香菇菌丝的最优碳源为蔗糖,最优氮源为蛋白胨,最适pH为7~10,培养温度以23~25℃最优。     

应用RAPD方法鉴别香菇菌株的研究

作者采用单个、10-碱基的随机引物(Operon公司产品)PCR扩增香菇的多态性DNA。测试的7个引物均能扩增15个香菇菌株的DNA,扩增位点为12～19个,DNA片段大小为0.34kp～2.52kp。除菌株ATCC 28759和ATCC 28760所有引物扩增的DNA指纹图谱均相同外,其余13个菌株都有其独特的DNA谱带。结果表明,RAPD方法可用于鉴别香菇菌株间的差异,在食用菌遗传育种研究中具有广泛的用途。     

香菇优良品种HL6的选育研究

本文以Cr02 , 7402, 45, 087 , 465, 856 为亲本进行单孢分离和杂交实验, 通过镜检、拮抗实验、EST同工酶分析和栽培出菇实验, 选育出香菇优良新品种HL6 。并通过比较亲本和杂交新组合EST同工酶谱的差异性, 来预测香菇杂交后代的杂种优势。     

担子菌原生质体融合子的免疫学鉴定

TritonX一100提取香菇单核体L52~(-adc)“和金针菇单核体F_(v23)的菌体壁抗原,分别注射兔子制备抗血清。同样方法制备L52~(-adc)“和F_(v23)原生质体融合子F_(02),F_(03)的菌体壁抗原,琼脂糖双向扩散显示融合子F_(02)、F_(03)的菌体壁抗原能与所制备的亲本抗血清发生特异性沉淀反应。表明两个融合亲本的菌体壁抗原基因在融合子中得到表达。从而也进一步证实融合子确为两亲本的杂合子。     

平菇和香菇代料栽培中污染真菌的研究

从 2 0 0 2年 3月到 2 0 0 3年 2月 ,在四川省雅安市代料栽培平菇和香菇的种植户中采集被真菌污染的培养料 ,进行真菌分离和鉴定。研究结果表明 ,粘帚霉(Gliocladiumspp .)是平菇代料栽培中最主要的污染真菌 ;哈茨木霉 (Trichodermaharzianum)是香菇代料栽培中最主要的污染真菌。     

3种鲜销香菇子实体蛋白质营养价值评价

测定了福建省3个菌株、适宜鲜销的香菇(Lentinus edodes)子实体蛋白质含量、氨基酸含量及其种类,应用化学评分法、氨基酸评分、模糊评价法等6种国际通用的非生物学蛋白质评价方法,对3个香菇菌株的营养价值进行综合评价。结果表明,3个香菇菌株蛋白质含量分别为20.6%、21.4%、24.6%,2号香菇菌株氨基酸总量和必需氨基酸总量均为最高,分别为16.53%和6.52%;3个香菇菌株均富含谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸等氨基酸,含量较丰富的必需氨基酸为苯丙氨酸和酪氨酸,亮氨酸和赖氨酸,3个香菇菌株的第一限制氨基酸相同,均为为蛋氨酸和胱氨酸。化学评分分别为63.92、63.75、63.44;氨基酸评分分别为82.01、79.51、82.44;3个品种香菇与标准蛋白(全鸡蛋模式)的贴近度分别为0.92、0.92、0.91。