黑龙江林蛙ISSR反应体系的建立与优化

以黑龙江林蛙为材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、DNA聚合酶、模板进行体系优化,对引物的最佳退火温度进行选择,建立适合黑龙江林蛙的ISSR-PCR分析的最佳体系:在25μL总体积中,包含10×PCR Buffer 2.5μL,Mg2+4.0 mmol.L-1,dNTPs 0.15 mmol.L-1,引物0.3μmol.L-1,TaqDNA聚合酶0.5 U,DNA模板2.0 ng.μL-1,最佳退火温度53.8℃。为利用该技术对黑龙江林蛙遗传多样性分析和构建遗传图谱提供一定的依据。     

香蕉SSR反应体系的优化

以香蕉品种AAcv Rose为试材,研究了香蕉SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响,并比较了聚丙烯酰胺凝胶及琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明:在20μL的反应体系中,各成分的最适用量分别为TaqDNA酶0.5U/mL;Mg2 2.5mmol/L;引物0.4μmol/L;模板DNA20～40ng/μL;dNTPs0.1mmol/L。利用24个香蕉品种验证此反应体系,80g/L的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在150～300bp之间,不同品种间DNA谱带具有多态性。聚丙稀酰胺凝胶电泳检测的DNA多态性高于琼脂糖。     

独尾草DNA提取方法优化及ISSR反应体系的建立

为研究独尾草(Eremurus chinesis Fedtsch.)的遗传多样性,以独尾草的干燥叶片为研究材料,比较了SDS法和CTAB法提取独尾草总DNA的效果,并对CTAB法提取方法进行了优化.采用正交试验以Mg2+、dNTP、Taq酶、引物4因素3水平建立了独尾草的ISSR反应体系.结果表明,优化的CTAB法提取独尾草DNA的质量较好,在l0 μl的反应体系中,含10×PCR Buffer、1.0 mmol/l MgCl2、200 μmol/l dNTP、0.75 U Taq酶、0.4mol/l的引物和20 ng模板DNA.基于上述ISSR反应体系,筛选出了适合独尾草遗传多样性分析的21条ISSR引物.     

巨竹ISSR反应体系的建立与优化

以巨竹叶片提取的基因组DNA为材料,用引物UBC810(序列为GAG AGA GAG AGA GAG AT)研究了PCR反应体系的主要成分、退火温度及循环次数对该种植物ISSR扩增结果的影响。结果表明,20μL的反应体系含40 ng模板DNA、0.6μmol.L-1引物,1.0 U Taq DNA聚合酶,2.5 mmol.L-1Mg2+,0.25 mmol.L-1dNTPs,1×Buffer。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,54.5℃复性30 s,70℃延伸90 s,循环40次;72℃延伸10 min,置4℃保存。     

一品红ISSR反应体系的建立与优化

运用L16(45)正交设计对一品红ISSR反应的5个因素(DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、TaqDNA酶浓度)在4个水平上进行优化试验,通过不同反应体系扩增效果比较,建立了优化的一品红ISSR反应体系:50μL的PCR体系中含有DNA模板100 ng、Mg2+2.5 mmol·L-1、dNTPs 0.20 mmol·L-1、引物300 pmol·L-1、TaqDNA聚合酶1.0 U.     

剑麻ISSR反应体系的建立及其优化

为利用ISSR分子标记进行剑麻遗传多样性分析和种质资源鉴定,分析了剑麻ISSR反应的主要参数对反应体系的影响。结果表明:25μL的反应体系中含150ng的模板DNA、10μLTaq聚合酶MIX、0.5μmol/L引物。优化的反应程序:94℃预变性5min;94℃变性30s,设定温度(51~60.3℃)退火45s,72℃延伸45s,循环35次;然后72℃延伸10min;筛选到16条适合剑麻扩增的ISSR引物。     

太子参ISSR反应体系的优化

通过单因子试验和正交设计,对影响太子参ISSR-PCR扩增效果的因素,如模板DNA浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度、退火温度、延伸时间和循环数进行优化。确立了可用于太子参ISSR-PCR分析最适宜的反应体系:20μL反应体系中含80 ng模板DNA,0.5U Taq酶,0.4μmol·L~(-1)引物,0.18 mmol·L~(-1)dNTPs;PCR扩增延伸时间为70 s,循环数为35。稳定性试验表明,该体系能在不同太子参品种中扩增出清晰明亮、稳定性、多态性好的条带。     

苦楝SRAP-PCR反应体系的建立及优化

【目的】应用SRAP技术对苦楝Melia azedarach遗传多样性、种质资源鉴定等开展研究,对苦楝SRAP-PCR体系中的模板DNA、d NTPs、Mg2+、引物和Taq DNA聚合酶5个组分浓度进行优化,建立适合苦楝的SRAP-PCR反应体系.【方法】采用单因素试验对反应体系中的5个因素分别设置8个浓度梯度水平,确定浓度范围后进行L16(45)正交试验设计,并对结果进行打分,确定优化体系.【结果和结论】SRAP对苦楝DNA浓度的要求不高,有一个较宽的浓度适宜范围;d NTPs在0.1~0.2 mmol·L-1范围内,能扩增出条带基本相同的清晰谱带;Mg2+为2.0mmol·L-1左右时扩增条带较清晰且数量多;引物介于0.48~0.64μmol·L-1均能扩增出带型基本保持一致且清晰的谱带;Taq DNA聚合酶在0.50~2.00 U范围内可以得到清晰的带型.根据正交试验设计16个处理的得分,确定优化的反应体系为:模板DNA 30 ng、d NTPs 0.125 mmol·L-1、Mg2+2.25 mmol·L-1、引物0.48μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.75 U,反应总体积25μL.     

春兰SRAP-PCR反应体系的建立与优化

[目的]构建适合春兰SRAP-PCR反应的最佳体系。[方法]对影响PCR反应的5个变量(dNTPs浓度、Mg~(2+)浓度、引物浓度、Taq酶量、模板DNA用量)采用L16(45)正交试验设计,建立春兰SRAP-PCR最适反应体系。[结果]最佳优化体系为0.25 mmol/L d NTPs、2.50 mmol/L Mg~(~(2+))、0.80μmol/L引物、1.00 U Taq酶、200.00 ng模板DNA,共20μL。扩增程序:94℃预变性4 min,反应前5个循环在94℃变性1 min、35℃复性1 min、72℃延伸1 min的条件下运行,随后的30个循环复性温度提高至50℃,最后72℃延伸10 min。[结论]该体系有利于SRAP分子标记在春兰材料上的应用,为春兰分子遗传育种奠定了基础。     

适合西兰花的ISSR反应体系的建立

以西兰花基因组DNA为材料,对ISSR-PCR反应体系中各种影响因子如镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、Taq DNA聚合酶量BSA浓度、引物用量、甘油浓度以及最适退火温度等进行了优化和筛选,建立了适合西兰花的ISSR反应体系:10μl PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris.HC l,pH值9.0,50mmol/L KC l,0.1%Triton X-100),2.0 mmol/L MgC l2,0.75 U Taq酶,5 ng模板DNA,12 pmol引物,dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2 mmol/L,4 mg/m l BSA,西兰花的最适退火温度为48.5℃。     

枣树ISSR反应体系的建立及优化

为建立枣树适宜的ISSR反应体系, 以枣树叶片为材料,对ISSR反应体系中的主要影响因子进行了优化.研究了引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶及退火温度对扩增的影响.结果表明,在25 μL ISSR体系中各组分的适宜的浓度为:1×PCR buffer, 375 μmol/L dNTP, 0.2 μmol/L引物,1.5 U TaqDNA聚合酶.不同引物间适宜的退火温度不同.应用该ISSR体系对10个不同品种的枣材料进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.     

蓝莓ISSR PCR反应体系建立与优化

以蓝莓为材料,通过正交试验设计和单因子优化试验对影响ISSR-PCR扩增结果的5个因素进行探讨,建立了适合蓝莓ISSR-PCR分析的反应体系和扩增程序,即在50μL反应总体积中,包含模板DNA20 ng、ISSR引物0.4μmol.L-1、dNTPs 0.15 mmol.L-1、Mg2+1.5 mmol.L-1、1.25 UTaqDNA聚合酶和10×buffer 5.0μL。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,47℃退火30 s,72℃延伸1 min,30个循环;72℃延伸7 min。该体系的建立为利用ISSR标记进行蓝莓遗传分析奠定了基础。     

巴西蕉假茎对2种香蕉象甲的诱捕效果分析

为明确巴西蕉假茎对香蕉假茎象甲和香蕉球茎象甲的诱捕效果,为利用巴西蕉假茎防治香蕉象甲这一农业防治措施提供理论依据,采用假茎田间诱捕试验及室内选择反应试验,研究了巴西蕉假茎对2种香蕉象甲的诱捕效果。田间诱捕试验结果表明,巴西蕉假茎对2种香蕉象甲具有有效的诱捕作用,其5d和10d的诱捕量分别达8.3~11.3和14.7~18.0头/诱捕器;室内选择反应试验结果表明,与空白对照相比,2种香蕉象甲对巴西蕉假茎均表现出显著的选择趋性。因此,巴西蕉假茎可用于蕉园香蕉象甲的诱捕防治。     

大血藤ISSR-PCR反应体系的建立

采用改进的SDS法抽提大血藤基因组DNA,分析了镁离子、dNTP、模板DNA含量、引物浓度、Taq DNA聚合酶量和BSA浓度对大血藤ISSR-PCR扩增结果的影响,建立了稳定的、可重复的大血藤ISSR最佳反应体系:10μL PCR反应体积中,4×Taq酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris-HC l,pH9.0,50 mmol/L KC l,1 g/LTriton X-100),0.5U Taq DNA聚合酶,2 mmol/L MgC l2,0.1 mmol/L dNTP,12 pmol引物,10 ng模板DNA,2 mg/mL牛血清白蛋白。大血藤的最适退火温度为52.4℃。     

正交设计构建陕北山杏ISSR反应体系

[目的]构建陕北山杏ISSR-PCR反应体系。[方法]以陕北山杏为试材,采用CTAB法提取其幼叶基因组DNA,利用正交设计L9(34)对山杏ISSR-PCR反应体系的4个因素(Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶)在3个水平上进行试验,最后应用SPSS统计软件对PCR结果进行分析。[结果]试验表明,各因素的不同水平对PCR反应体系结果都有显著影响,其中Taq DNA聚合酶用量影响最显著;建立了适合陕北山杏ISSR-PCR的最佳反应体系(20μl):Taq DNA聚合酶1.0 U、MgCl21.0 mmol/L、dNTPs 0.15 mmol/L、引物0.30μmol/L;对最佳反应体系进行验证,结果显示该体系稳定性好,操作性强。[结论]该研究为陕北山杏遗传多样性分析及种质资源研究等奠定了基础。     

大叶石上莲ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为建立并优化大叶石上莲(Oreocharis benthamii)ISSR-PCR反应体系,采用改良的CTAB法提取大叶石上莲叶片DNA,利用正交试验设计方法,从Mg~(2+)、d NTP、引物、Taq DNA聚合酶以及模板DNA 5因素4水平,对大叶石上莲ISSR-PCR反应体系进行优化,确立了适用于大叶石上莲的扩增多态性高、稳定性强、条带清晰的ISSR最佳反应体系:2.0μL的10×PCR缓冲液,2.0 mmol/L Mg~(2+),0.25 mmol/L d NTP,0.7μmol/L引物,2.0 U TaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板(20μL反应体系)。在此基础上,从100条引物中筛选出13条ISSR扩增引物,其中5条引物最为合适并已确定其最佳退火温度。     

金柑属ISSR反应体系的建立及优化

以融安金弹(F.crassifolia Swingle)为试材,利用正交设计和单因素试验相结合的方法,对ISSR反应体系中各个主要影响因子进行了优化筛选,结果表明,20μL的ISSR反应体系中各组分的最适浓度分别为:Mg2+1.60 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,TaqDNA酶1.0 U,引物0.2μmol/L模板1.2 ng/μL.并利用该优化对金弹等21份金柑属材料进行了ISSR扩增,证实了该体系稳定和可靠性.     

巴西香蕉苗静置水培营养液配方的初步筛选

采用静置水培法,使用4种不同的营养液配方,并以清水培养和椰糠基质栽培为对照,对巴西香蕉苗进行生长比较试验。结果表明:在香蕉苗增加的生物量方面,BXM配方(巴西木植物营养液)处理与椰糠栽培的差异不显著,但与日本园试配方、Hoagland植物营养液配方、1/2 MS培养基营养元素配方和清水培养的差异显著;在株高和叶面积方面,均以椰糠栽培的最大,BXM配方处理的居次,接下来依次是Hoagland植物营养液配方、日本园试配方、1/2 MS培养基配方和清水培养。综上所述,在这4种营养液配方中,BXM配方是巴西香蕉苗生长的最适营养液配方。