苏云金芽胞杆菌cry基因研究进展

从cry基因的分类、鉴定、遗传特性以及应用概况等4个方面综述了苏云金芽胞杆菌cry基因的研究进展,并对cry基因的研究进行展望。     

苏云金芽胞杆菌应用研究进展

由于苏云金芽胞杆菌(Bt)具有特异性高,对人畜无害,对环境友好等优点,因而其抗虫基因成为目前研究历史最久、应用最成功、使用最广泛的抗虫基因。现简述了cry基因资源的现状及在生物杀虫制剂、转基因作物中的研究进展。     

苏云金芽胞杆菌CT—43的芽胞萌发及芽胞和伴胞晶体的形成

在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株ＣＴ－４３的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出３个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成．芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成７个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第２阶段开始，由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株ＣＴ－４３中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。     

苏云金芽胞杆菌研究进展

论述了苏云金芽胞杆菌的作用范围、ICPs基因的多样性、杀虫机理、基因工程以及产业化研究的进展情况。     

离心浓缩对苏云金芽胞杆菌芽胞保留率的影响

用正交试验法研究了苏云金芽胞杆菌发酵液浓缩过程中悬浮液固含量、离心转速和离心时间对苏云金芽胞杆菌芽胞保留率的影响.经方差分析,悬浮液固含量、离心转速和离心时间对芽胞保留率均有显著影响.随着离心转速和离心时间的增加,芽胞保留率呈下降趋势,而悬浮液固含量提高,则芽胞保留率升高.根据正交试验结果确定的使芽胞保留率保持较高水平的浓缩工艺条件是:离心转速3000r·min-1,离心时间5min,悬浮液固含量90g·L-1.     

小菜蛾对苏云金芽胞杆菌的抗药性研究

采用人工饲料感染法监测了我国不同地区小菜蛾田间种群对中国标准品Ｃｓ３ａｂ－１９９１的敏感性。结果表明：广东省深圳、东莞、广州的田间小菜蛾对苏云金芽胞杆菌产生了明显的抗性,最高抗性倍数分别为８．９,６．５,２．１。深圳的抗性小菜蛾种群在无毒条件下饲养,抗性会自然减退,经５代之后抗性消失。     

苏云金芽胞杆菌新菌株的研究

为筛选对昆虫有高力的苏云金芽胞杆菌特异性菌株,从韩国不同地区土壤中筛选出两株对鳞翅目和双翅目昆虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌菌株K9805和K9903,它们分属于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种和鲇泽亚种,形成典型的双金字塔型伴胞晶体,两菌株不但对小菜蛾、甜菜夜蛾具有较高的生命活性,而且对双翅目昆虫致倦库蚊有毒。K9805含有cry IAa,cy IAb,cry IC,cry ID和cry I基因,K9903含有cry IAa,cry IAb,cry IAc,cry IE和cry Ⅱ基因。     

苏云金芽胞杆菌对淀粉塑料膜降解的促进作用

苏云金芽胞杆菌菌粉,玉米淀粉与线性低密度乙烯共混制得淀粉塑料,通过地理降解和摇床快速降解试验研究了淀粉塑料中淀粉的降解率。结果发现地理降解１２０ｄ后含５％菌粉和５０％淀粉的薄膜淀粉降解率达到８９．５２％,扫描电镜观察大部分淀粉颗粒破碎,出现许多小孔。不加菌粉的淀粉降解率只３５．４８％,表明添加的菌粉对淀粉降解有的促进作用。     

苏云金芽胞杆菌8010粉剂对流干燥的研究

利用对流干燥试验台，就苏云金芽胞杆菌８０１０粉剂（Ｂｔ ８０１０）对流干燥进行了风温、风速和物料层厚度的正交试验。分析了上述三因素对干燥时间和干燥后芽胞数目的影响的显著水平。同时还得出干燥时间、芽胞剩余率的回归方程及降速干燥阶段曲线方程，提出了较佳的干燥工艺参数。     

啤酒废水污泥培养苏云金芽胞杆菌

以啤酒厂不同处理工段废水、污泥为原料培养苏云金芽胞杆菌(Bt),并与城市污水做比较,研究啤酒废水、污泥的化学耗氧量(COD)、pH、发酵情况及其毒力.结果表明,以啤酒厂混合池原废水和酸化池废水为原料培养Bt,活芽胞数可达109cfu·mL-1级,与城市污水相比(D595nm=0.202),能产较高的晶体蛋白(D595n...     

苏云金杆菌液体剂型的研制

用凯松ＣＧ和尼泊金甲酯作复合防腐剂,吐温－２０作湿润展着剂,木质素磺酸钠和山梨醇作紫外光防护剂,人工甜味剂作昆虫食欲促进剂,油酸作杀虫增效剂,研制出了高效、稳定的苏云金杆菌液体剂型。在一年的正常存放试验中,液剂效价保持率８９％。加速降解试验表明,４５℃条件存放２５ｄ,液剂效价保持率为７３％。在紫外光照射下,当新研制的剂型效价保持率为９０．２％时,对照保持率仅为３６．６％。     

河北省部分地区苏云金芽孢杆菌菌株多样性的研究

选择河北省植被覆盖率高、生态系统典型且较完整的地区——白石山、雾灵山、满城灵山、清西陵、白洋淀、龙潭湖、顺平桃林采集土壤样品261份,分离出Bt菌株24株,其中雾灵山地区Bt出土率最高(17.8%)。分离的菌株产生的伴孢晶体形态各异,有长菱形、短菱形、球形、无定型,充分体现了河北省Bt资源的多样性。     

苏云金杆菌微胶囊剂的研制

苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis简称Bt）的品体蛋白是主要的杀虫成分,抗紫外照射能力差．造成野外防治过程中易失活、防效不稳定、残效期短,为改良Bt剂型,探讨了以明胶-阿拉伯胶为囊壁材料的复凝聚相分离法制备Bt做胶囊剂的加工工艺,并用平板活菌计数法对得到的Bt做胶囊剂进行了抗紫外能力分析及用毒力测定法比较微胶囊前后的杀虫活性。结果表明,经过紫外2h的照射,原Bt菌液平饭活菌计数成活率只有11．4％,微胶囊化后的Bt菌液成活率高达78％;相应地,原Bt菌液已基本丧失杀虫活性,而微胶囊化后的Bt菌液对小菜蛾致死率仍达66．7％,比原菌液抗紫外能力大大增强。     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的形成及降解

【研究目的】研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体的形成及降解,为其生物学特性的系统研究和活性成分分析提供理论基础。【方法】将Bt菌株HD-1在牛肉膏蛋白胨固体培养基上30℃下培养24h,制成菌悬液后用日本电子JEM100-CX-II透射电子显微镜观察伴孢晶体的形成。采用五种溶解方法降解Bt菌株HD-1和LSZ9408伴孢晶体后,进行SDS-PAGE电泳。【结果】此研究的电镜观察表明BtHD-1在分裂过程中形成芽孢和晶体,晶体为大菱形。BtLSZ9408晶体含有130和65kDa的毒蛋白,HD-1晶体含有130、65和25kDa的毒蛋白。【结论】BtLSZ9408和HD-1伴孢晶体都包含CryI和CryII蛋白质毒素。     

苏云金芽孢杆菌质粒复制区的分离克隆

Bt-E.coli穿梭载体pHT315去除Bt复制区,构成了一个具有红霉素和氨苄抗性,同时具有多克隆位点的只能存E.coli中复制的载体,命名为pHT315-1。利用pHT315-1,通过部分酶切建库的方法,从近10 000个重组子中得到1个Bt复制区。序列测定结果表明,该复制区为5273bps,已在GentBank注册,Accession number为AY278324。GenBank核酸序列Blast表明,该复制区部分序列与Bt菌株HD263的复制区。ori43编码复制蛋白的宁列同源性为98％。30℃连续培养72h,复制区质粒在Bt无晶体突变株HD73cry-中稳定性达98％以上,30h生长曲线也表明,该复制区质粒对受体菌株无明显不良影响。     

苏云金杆菌制剂生物测定饲料防腐剂的选择

采用不同防腐剂处理苏云金杆菌制剂及进行毒力生物测定,结果表明,７＾＃（１００ｍＬ中含０．０５ｍＬ福尔马林和０．１５ｇ尼泊金）防腐剂处理苏云金杆菌制剂０－９６ｈ,抑制邪包萌发和菌体活性的效果最佳,其次为２＾＃（１００ｍＬ中含０．１５ｇ尼泊金）,８＾＃（１００ｍＬ中含０．１５ｇ尼泊金和０．０５ｇ土霉素）;毒力生物测定了７＾＃防腐剂最稳定,ＬＣ５０最小,灵敏度最高。     

苏云金杆菌低成本固体发酵培养基的研制

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一类对多种害虫有效的病原微生物。为降低该菌产品制剂的生产成本,以北方常见的玉米芯粉、棉粕、豆粕等农产品下脚料为培养基质,研究了对多种鳞翅目、双翅目害虫具有特异杀虫活性的Bt菌株CYZ-4的固体发酵培养基配方。经对培养基的初始含水量、p H值等单因素试验发现,培养基初始含水量为70%、p H值为8.2时,玉米芯固体发酵培养基的产孢量达到最大;当玉米芯粉与棉粕质量比为5∶5和6∶4,与豆粕质量比为6∶4或7∶3时,发酵效果优于其他组合,产物孢子浓度在9.3×109个/g以上;复合固体发酵培养基基础配方中,玉米芯粉、棉粕、豆粕质量分数分别为19.1%、7.2%、3.6%时发酵Bt的效果最好。培养基3种成分及p H值的L9(34)正交试验结果表明,将玉米芯粉、豆粕、棉粕按质量分数分别为16.0%、6.7%、7.2%的比例混合,添加0.075%KH2PO4、0.05%Mg SO4、0.035%Ca CO3,调节初始含水量为70%、p H值为8.2,按4%的接种量接种,30℃下培养6 d,菌株的产孢量最大,达到1.80×1010个/g。该固体发酵培养基配方成本低,发酵条件简单,适于以药肥撒施毒土方式施用防治鳞翅目和双翅目地下害虫。     

苏云金芽胞杆菌油剂增效因子的筛选

以小菜蛾、棉铃虫为生物测定昆虫 ,通过测定 5种无机盐 (Na2 CO3,K2 CO3,CaCl2 ,MgSO4 ,和MgCl2 )对苏云金芽胞杆菌油剂的增效作用进行增效因子的筛选。结果表明 ,以小菜蛾为供试昆虫 ,除CaCl2 外 ,其余 4种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 10 %MgCl2 效果最好 ,增效比为 1.5 6。以棉铃虫为供试昆虫 ,5种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 12 5 %MgSO4 效果最好 ,增效比为 1.6 9,0 .0 2 5 %的Na2 CO3 次之 ,增效比为 1.5 9     

一种改良的苏云金芽孢杆菌质粒DNA提取方法

以Sambrook的碱裂解法为基础,通过控制菌体培养时间,适当调整提取过程中3种溶液的比例及作用时间,摸索出一种适合于提取苏云金芽孢杆菌质粒DNA的方法.该法与常规碱裂解法相比具有重复性好、质粒DNA质量高等优点.     

固定化苏云金芽孢杆菌转化生产L-鸟氨酸

研究了苏云金芽孢杆菌固定化生产技术及其利用固定化细胞转化精氨酸生产L-鸟氨酸的工艺条件,结果表明:聚乙烯醇(PVA)浓度为5%、卡拉胶浓度为2.5%的凝胶固定于硼酸浓度为30g/L,KCl浓度为30g/L固定液中4h,形成的固定化细胞凝胶球可连续使用7批次。当固定化细胞浓度为100g/L、反应液温度为30℃、反应液pH值为10.0、转化时间24h条件下,转化液中L-鸟氨酸的含量为31.04g/L。