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为建立适用于大豆花芽的mRNA差异显示体系,以“吉农18”花芽突变体为材料,采用RNAiso Plus试剂盒提取了大豆花芽的总RNA,并对DDRT-PCR体系中的Mg2+、dNTP及Taq酶的用量进行了优化.试验结果表明:适合大豆花芽mRNA差异显示的PCR体系(25 μL)为反转录产物用量2.0μL,锚定引物50 pmol/L,随机引物50 pmol/L,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.5U. 相似文献
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用单胚mRNA差异显示技术筛选山羊早期胚胎发育相关基因 总被引:1,自引:0,他引:1
用单胚构建的mRNA差异显示技术,对体外培养的山羊早期2、4、8~16细胞期胚胎的基因表达进行研究,并选择1条在2细胞期胚胎特异表达的条带进行分析。结果表明:该片段与人类肽基精氨酸脱亚胺酶基因具有83%的同源性。该基因通过对组蛋白和细胞骨架蛋白翻译后的修饰作用,对早期胚胎发育过程中基因转录和表达的调控起着重要作用,是羊早期胚胎发育过程中的重要影响因子。 相似文献
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对mRNA差异显示技术中引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定的方法等方面进行了概述。 相似文献
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简述了 m RNA差异显示技术的基本原理及其在基因表达差异、基因的鉴定与克隆、激素调控机理、抗逆性机理等方面的应用 ,并对其在植物生理研究中存在的问题与改进的方法做了介绍 相似文献
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【目的】建立一套适合光肩星天牛的mRNA差异显示(DDRT-PCR)体系,并对光肩星天牛触角差异表达基因进行初步研究。【方法】以光肩星天牛雌、雄个体的触角和去触角的身体部分为材料,对影响mRNA差异显示体系的主要因子进行优化,并研究了其差异表达基因。【结果】建立了适合光肩星天牛mRNA差异显示的反应体系,并筛选得到最适的PCR退火温度。使用此体系分离得到28条触角差异表达基因片段,其中9个片段的翻译产物分别与觅食相关蛋白、MYB转录因子、β-乙酰葡萄糖胺转移酶、化学感受蛋白11、表皮蛋白peritrophins1-I、甘油激酶、抗菌肽Alo-3、26S蛋白酶体(非ATP酶亚基12)和清道夫受体等已知蛋白有较高的同源性。【结论】利用建立的DDRT-PCR体系对供试材料进行扩增,扩增产物条带丰富且清晰,可用于分离差异表达基因,得到的触角差异显示基因可能参与了光肩星天牛的嗅觉识别过程。 相似文献
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mRNA差异显示技术及其在植物生理研究中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
简述了mRNA差异显示技术的基本原理及其在基因表达差异、基因的鉴定与克隆、激素调控机理、抗逆性机理等方面的应有,并对其在植物生理研究中存在的问题与改进的方法做了介绍。 相似文献
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利用mRNA差异显示技术对广东省地方品种蓝塘猪和引进品种大白猪达到经济成熟时的眼肌组织mRNA进行比较分析,并对差异显示条带同收产物进行PCR扩增,检测到与肉质性状相关的5条ESTs在2个猪种中存在表达差异,其中ESTsp7在大白猪种中表达量高,而ESTsp8、ESTsp9、ESTsp10和ESTdp11在蓝塘猪中表达... 相似文献
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利用mRNA差异显示技术寻找甘蓝型油菜黄籽基因 总被引:5,自引:0,他引:5
以两组不同来源的甘蓝型黄籽油菜近等基因系为材料,利用mRNA差异显示技术对90对随机引物和锚定引物组合进行筛选,获得1个能稳定重复出现的差异cDNA片段。以该差异片段为探针经Northern杂交验证了上述结果,推测该差异片段可能和种皮色泽差异形成有关。对该差异片段进行了克隆、测序,并根据此序列设计了2个嵌套特异引物,利用PCR-Walking技术延伸该差异片段,对该延伸序列进行克隆、测序及序列同源性分析。同时对mRNA差异显示技术应用过程中的相关问题进行了探讨。 相似文献
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mRNA差异显示技术是研究基因表达差异的有效方法,近些年在研究、分离与克隆植物特异表达基因方面有重要应用。本文对该技术在植物抗逆、抗病机理研究中的应用进行了综述。 相似文献
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利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究大豆抗疫霉根腐病的分子机制 总被引:2,自引:0,他引:2
文章以中国优良大豆品种东农46及大豆疫霉优势生理小种1号菌株为材料,利用mRNA差异显示技术研究东农46与大豆疫霉根腐病菌非亲和互作中前后基因表达的差异,寻找并分离出与大豆疫霉根腐病抗病性相关的9条cDNA片段,通过这些差异片段的序列分析进一步阐述大豆对疫霉根腐病菌的分子抗病机制。 相似文献
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《新疆农业科学》2017,(10)
【目的】十字花科短命植物线果芥在新疆干旱环境下生长,具有较强的抗旱性,研究十字花科短命植物线果芥的抗旱机制。为进一步了解线果芥的抗旱机理和从野生植物资源中发掘一些优异的抗逆基因奠定基础。【方法】用20%PEG6000处理3~4周的线果芥幼苗,分别提取0、3、6、9、12、24及48 h的线果芥叶片总RNA。用mRNA差异显示技术筛选差异表达的基因。【结果】使用80对引物组合共筛选获得差异片段18个,分别命名为DF1-DF18,其中表达上调的有12个,下调的有6个。按照基因的功能可以划分为6大类:基础代谢、转录因子、抗病相关、假想蛋白、未知蛋白和光周期蛋白。其中以基础代谢相关基因最多。对其中的DF-2、DF-6及DF-14进行高盐和干旱胁迫下的表达模式分析,这三个基因均受干旱和盐调控表达。【结论】从短命植物线果芥中筛选了18个抗旱相关的基因,并对其中的3个基因进行表达模式分析,的确受干旱和盐胁迫的诱导表达。 相似文献