犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定

选取来自黑龙江省病犬的肺脏、胰脏、肝脏、脾脏、肾、膀胱、淋巴结等组织病料,研磨上清接种非洲绿猴肾细胞（Vero）进行病毒的分离。对分离毒株进行了形态学、血清学、回归动物试验鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测感染细胞中的病毒核酸。分离得到的病毒在Vero细胞上可产生明显的细胞病变（CPE）,病毒形态学、血清学、回归动物试验、RT-PCR鉴定均为阳性,确定所分离的病毒为犬瘟热病毒,命名为CDV-HLJ株。     

贵州犬瘟热病毒的分离鉴定

对流行病学调查、临床症状检查和ELISA检测为犬瘟热阳性的自然发病犬,取肠内容物为病料,采用同步培养方法接种于犬肾细胞系(MDCK)进行病毒的分离,并对分离株进行了形态学特征、血凝特性、动物感染及RT-PCR鉴定。结果表明:病料接种MDCK细胞产生明显的细胞病变(CPE),电镜负染观察接毒细胞培养物见有典型的犬瘟热病毒粒子。分离株不凝集鸡及人“O”型红细胞,接种犬出现明显的临床症状和病理变化。用RT-PCR技术检测病毒细胞培养液,扩增出的片段长为760 bp,与预期设计的长度相同,由此确证分离株为犬瘟热病毒,命名为CDV-GZ2株。     

虎犬瘟热病毒的分离与初步鉴定

2003年3月，北京市某动物园的一只虎发病死亡，临床症状与病理变化与犬瘟热相似。为了弄清病因，我们进行了相关实验室诊断和研究，报告如下。     

小熊猫等四种动物犬瘟热病毒的分离与鉴定

对犬,貂,貉,狐,熊,小熊猫,大熊猫,狼,狮,虎,金猫和猞狮共６５只动物的病料进行了犬瘟热病毒分离,结果从小熊猫,犬膜梭菌抗毒素对小熊猫,犬,貉和狐四种动物的病料中分离出９株ＣＤＶ,其中小熊猫ＣＤＶ具有较强诱导产生中和抗体的能力。该毒株有可能成为疫苗后备株。     

水貂犬瘟热病毒LD-1株的分离与鉴定

取山东某貂场疑似犬瘟热病毒（canine distemper virus,CDV）感染的水貂肝脏等组织病料,通过RT-PCR检测呈CDV阳性,且无水貂细小病毒存在,将病料接种原代CEF细胞、传代系Vero细胞和DF1细胞3种细胞进行病毒分离,通过优化细胞培养条件,最终在Vero细胞上传代培养成功,出现露珠状典型细胞病变（CPE）。分离毒应用RT-PCR、PCR产物测序、抗体中和试验（SN）、间接免疫荧光试验（IFA）及病毒包涵体检查等多种方法进行了CDV的鉴定,结果显示CDV阳性,表明分离到的病毒为水貂CDV,并将其命名为CDV LD-1株。     

大熊猫犬瘟热病毒LG株的分离鉴定

为获得大熊猫犬瘟热病毒株,采集死亡大熊猫的心脏、肺、肝病料,研磨并反复冻融后收集上清液接种Vero细胞,待出现细胞病变(CPE)后,收集病毒液。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定病毒分离株,测定病毒TCID_(50),动物回归试验测定其毒力。结果显示,盲传到第5代时,Vero细胞出现圆缩、聚集、脱落等病变;PCR扩增出287bp片段,与预期相符;测序结果显示,该毒株与已发表的CDV SD(14)11毒株(亚洲-Ⅰ型)的同源性为98%;毒株的TCID_(50)为10~(-5.2)/mL;幼犬感染分离毒株后出现体温升高、鼻头发干、拉稀、眼鼻分泌出水样分泌物等症状。本研究成功分离出大熊猫源犬瘟热病毒株。     

一株水貂犬瘟热病毒的分离与鉴定

为寻找免疫失败的原因,有效防治犬瘟热的流行,对临床一水貂犬瘟热疑似病例,取其肝、脾、脑等组织研磨后接种Vero和BHK细胞分离病毒,并对分离毒株进行一系列鉴定。通过电镜观察,发现了大小约150 nm的副黏病毒样粒子。结果表明,分离株对鹅、鸡、小鼠、家兔、山羊、猪红细胞均无凝集性,该分离株的毒价TCID50为10-4.87;分离株病毒对乙醚、氯仿敏感,病毒的核酸型为RNA。经间接免疫荧光试验,接种病毒的BHK细胞出现特异性的亮绿色荧光。对分离株和对照毒株分别提取RNA进行RT-PCR扩增,最后得到与预期扩增片段(294 bp)相符的核酸电泳带,充分证明分离病毒为犬瘟热病毒。     

犬瘟热病毒强毒株HBF-1株的培育及致病性研究

为研究从北极狐病料样品中分离的一株强毒的致病性,本实验采用病例复制、RT-PCR检测、间接免疫荧光检测(IFA)和电镜观察等方法证实分离得到犬瘟热病毒(CDV),并命名为HBF-1。对该分离株H基因的核苷酸序列比对显示,HBF-1与疫苗株的同源性为91.0%～91.5%,与国内外分离株的同源性为93.5%～99.9%。病毒传代培育试验结果显示HBF-1已适应在北极狐、貉、水貂和犬体内繁殖,具有较广的感染范围。但各种动物的临床症状和剖检病理变化存在不同程度的差异,表明HBF-1分离株对北极狐、貉、水貂和犬的致病力不同;毒力测定结果显示其半数感染量分别为102.46 ID50/mL、102.95 ID50/mL、102.46 ID50/mL和102.58 ID50/mL,表明HBF-1为一株CDV强毒株,可以在不同的经济动物间进行水平传播。本研究结果为开发新的CDV疫苗提供了实验基础。     

貉源犬瘟热病毒的分离鉴定

采集大庆某貉养殖场病貉的病料,处理后接种于非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离。对分离毒株进行了中和试验、血凝试验、理化性质的鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染细胞中的病毒核酸。病料接种 Vero 细胞 72 h 后产生明显的细胞病变(CPE);病毒分离株可以被犬瘟热病毒阳性血清中和,中和效价为 1∶25;分离株对氯仿、乙醚敏感,对酸和热抵抗力弱,可以凝集鸡红细胞,其凝集作用可被犬瘟热病毒阳性血清所抑制; RT-PCR检测病毒细胞培养液,扩增出的片段长287 bp,与预期设计的长度相同,经测序发现与MS01株的同源性为99%。结果表明,分离的病毒株为犬瘟热病毒,命名为CDV-DQ株。     

犬瘟热病毒蓝狐株的分离鉴定

为了对狐犬瘟热的防治提供参考依据,试验通过观察接种分离病毒细胞的细胞病变(CPE)情况,结合反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、核苷酸序列同源性分析对从疑似犬瘟热死亡的蓝狐脾脏中分离出的病毒进行了鉴定。结果表明:该毒株可使培养细胞出现明显的细胞病变。提取感染细胞的总RNA进行RT-PCR,扩增出1 044 bp的融合蛋白基因片段,大小与预期值相符;分离毒株与GenBank中已发表的10株犬瘟热毒株核苷酸序列同源性为92.9%～97.1%,氨基酸序列同源性为96.3%～97.7%。说明分离株为犬瘟热病毒。     

寿光市某犬瘟热病毒的分离鉴定及其致病性

本研究从2013年寿光市某兽医门诊疑似犬瘟热病例中分离鉴定了一株犬瘟热病毒CDV-sg,研究表明CDV-sg可以在Vero胞上复制并在接毒后4-5d开始出现CPE,以后细胞逐渐浓缩,并且范围逐渐扩大,于第8d细胞开始出现拉网脱落,第9-11d发生大面积的拉网脱落。进一步实验表明,CDV-sg株活性在pH7．0-8．0范围内不受影响,而过碱或过酸环境都不利于该病毒的存活,而且该毒株不与鸡、兔和绵羊红细胞发生凝集反应。CDV-sg的CID50可达到10^5.96,将CDV-sg给健康犬接种后进行致病性实验发现有CDV-sg很强的致病性。     

一株貉源犬瘟热病毒的分离与鉴定

从临床疑似犬瘟热的病貉组织中分离到1株病毒,经形态特征、血凝试验、中和试验、间接免疫荧光试验和分子生物学鉴定,该分离病毒为犬瘟热病毒。本研究为研究犬瘟热病毒貉株分子生物学特性、致病机理及构建基因工程疫苗奠定了基础。     

1株貉源犬瘟热病毒的分离鉴定

为筛选貉源犬瘟热毒株,从取皮期乌苏里貉肺脏中收集巨噬细胞,通过ELISA试验筛选阳性样本,用Vero细胞分离培养,获得1株貉源犬瘟热病毒.提取RNA进行RT-PCR和F基因测序分析鉴定,结果证明,该毒株确为犬瘟热病毒,命名为CDV/R-20/12.为下一步的貉源犬瘟热疫苗的研究与制备奠定了基础.     

犬瘟热病毒的分离鉴定

犬瘟热病毒(CDV)是副粘病毒科麻疹病毒属的重要成员,基因组为不分节、非重叠的负链RNA,其长15960bp,由一个短的3′端前导区和核壳体蛋白(N蛋白)、磷蛋白(P蛋白)、基质蛋白(M蛋白)、融合蛋白(F蛋白)、血细胞凝集素蛋白(H蛋白)和巨蛋白(L蛋白)等六个结构基因及V蛋白和C蛋白两个非     

鸡新城疫强毒株的分离与鉴定

从山东某鸡场的产蛋下降而无其他典型ND症状的高抗体蛋鸡群中分离到一株病毒。经过试验鉴定．该分离株具有血凝性，且可被ND标准阳性血清所抑制和中和，不能被AI（H5亚型与H9亚型）标准阳性血清抑制；该病毒的最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间（MDT）为50．4，1日龄SPF鸡脑内接种分离病毒致病指数（ICPI）为1．85，6周龄SPF鸡静脉接种致病指数（WPI）为2．42，回归试验鸡出现了新城疫症状和病变，该病毒株确定为新城疫病毒强毒型，并暂命名为ShD-dzh04。     

狐源犬瘟热病毒的分离及RT-PCR鉴定

为开展犬瘟热疫苗研究的前期工作,采用Vero细胞分离病毒的方法,选择保守基因N基因做RT-PCR鉴定,结果表明,该方法可成功分离出病毒并扩增出861 bp片段,与预计的片段大小一致。     

犬瘟热病毒的分离与初步鉴定

犬瘟热（CD）是由犬瘟热病毒（CDV）引起的犬的一种高度接触性传染病,病症复杂,致死率高,是危害犬类的第一大传染病。不同年龄、性别、品种的犬均可感染,幼犬、纯种犬易感性高,病情严重,死亡率高。本病呈高度接触性传染,患犬为主要传染源,患犬的鼻液、唾液、泪液、呼吸道飞沫、组织器官、血液中有大量病毒存在并能通过尿液长期排毒。     

犬瘟热病毒的分离鉴定

本试验通过鸡胚成纤维细胞直接从犬病料中分离到一株犬瘟热病毒，定名为ＣＤＶ－ＤＬ１株。该毒株在鸡胚成纤维细胞上生长良好，产生明显的细胞病变（ＣＰＥ），在电镜下观察，病毒粒子具有囊和纤突，大小为１２０－２００ｎｍ。核酸型为ＲＮＡ，不耐乙醚。该病毒接种幼犬，可使幼犬发病，但无论考验工感染均不能使幼犬１００％的发病。     

水貂阿留申病毒地方强毒株ADV-LN的分离鉴定

本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3 d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。     

犬瘟热病毒的分离鉴定、致病特点和单克隆抗体的研究

犬瘟热是由犬瘟热病毒（ Ｃａｎｉｎｅ Ｄｉｓｔｅｍ ｐｅｒ Ｖｉｒｕｓ, Ｃ Ｄ Ｖ）引起的犬的一种高度接触传染性疾病。近年来,随着我国军、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅度增加,以及异地交流的增多,犬瘟热在我国犬群中的发病率和致死率均有升高的趋势,而且临床表现也与以往有所不同。分析原因,除母源抗体干扰、疫苗效价低及使用不当外,犬群中是否出现了 Ｃ Ｄ Ｖ 新毒株亟待研究证实。本研究在从国内病犬分离到 Ｃ Ｄ Ｖ 的基础上,进行了 Ｃ Ｄ Ｖ 理化特性、致病特点、回归动物试验以及研制成功分泌抗 Ｃ Ｄ Ｖ 单克隆抗体,并进行了初步应用,取得了较为满意的研究结果。在研究中应用免疫组化方法进行病原检查,证实可很好地解决以往病理观察中无法进行病毒性疾病的特异性诊断的问题。１）采用免疫组化间接 Ｂ Ａ 法,对临诊疑似犬瘟热病犬脏器组织进行了 Ｃ Ｄ Ｖ 抗原定位检查及系统病理学观察。结果表明：发病犬大脑、小脑、心、肺、肝、脾、肠、肾、肾上腺、淋巴结、膀胱等组织细胞及血管内皮、支气管上皮细胞胞浆内均可见抗原阳性反应。同时,抗原阳性反应组织、器官均可见不同程度的病理变化。２）从病死犬肺、肝和淋巴结分离到 ２株 Ｃ Ｄ Ｖ,即 Ｃ Ｄ Ｖ９３０３９ 和