云南保种山羊线粒体DNA限制性酶切研究

采用碱变性法,提取来自云南省不同地区４个保种山羊的１３个个体的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）,并用ＡｐａⅠ,ＡｖａⅠ,ＢａｍＨⅠ,ＢｃｌⅠ,ＢｃＩⅠ,ＢｇｌⅡ,ＣｌａⅠ,ＤｒａⅠ,ＥｃｏＲⅠ,ＥｃｏＲⅤ,ＨａｅⅠ,ＨｉｎｄⅢ,ＫｐｎⅠ,ＰｓｔⅠ,ＰｖｕⅡ,ＳａｃⅠ,ＳａｌⅠ,ＳｍａⅠ,ＳｔｕⅠ和ＸｈｏⅠ等２０种限制性内切酶进行酶切分析。结果发现它们的线粒体ＤＮＡ的分子量大小约为１５．８Ｋｂ;不同限制性内切酶的酶切位点分别为：ＤｒａⅠ有７个酶切位点,ＡｖａⅢ有６个酶切位点,ＥｃｏＲⅤ和ＳｔｕⅠ共有５个酶切位点,ＨｉｎｄⅡ和ＨａｅⅡ有４个酶切位点,ＢａｍＨⅠ,ＢｇｌⅡ,ＰｓｔⅠ和ＰｖｕⅡ有３个酶切位点,ＡｐａⅠ,ＣｌａⅠ有两个酶切位点,其余有１个酶切位点。各保种山羊间未发现变异,说明云南的４个保种山羊极可能来自于共同的母性祖先。     

实验兔线粒体DNA多态性研究

用ＥＣＯＲＩ，ＥＣＯＲＶ，ＢａｍＨＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＰｔｕＩ，ＳｍａＩ，Ｘｂｏｌ，ＣｌａＩ，ＳａｃＩ，ＢｇｌⅡ等１１种酶，用ｍｔＤＮＡ限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）技术，分析了国内几个省区的实验用兔ｍｋＤＮＡ多态性。结果表明，在研究的６４个个体中，共检出１５种限制性态型，归结为４种不同的限制性类型，限制性类型的差异主要来源于少数几个限制 位点的偶然突变，提示这些免疫ｍｔＤＮＡ变异度很低，遗传     

云南地方猪种线粒体DNA多态性研究

本文用ＡｐａⅠ、ＡｖａⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＢｅｌⅠ，ＢｃｌⅠ，ＣｌａⅠ，ＤｒａⅠ，ＥⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＫｐｎⅠ，ＰｓｔⅠ，ＰｕｖⅡ，ＳａｌⅠ，ＳｍａⅠ，ＳｔｕⅠ，ＸｈｏⅠ等１８种限制性内切酶分析云南猪种的ｍｔＤＮＡ多态性。在全部１８头个体中只检出一种限制性类型，结果表明，云南猪种的ｍｔＤＮＡ变异度很低，遗传多样性贫乏，提示云南猪种起源于一个共同的祖先，在品种形成的早期可能受到创立者效应的制约。     

福建黄兔线粒体DNA的限制性内切酶分析

本文用差速离心法分离福建黄兔线粒体，氯化铯超速离心法纯化线粒体ＤＮＡ。对纯化的ｍｔＤＮＡ用ＢａｇＩＩ，ＢａｍＨＩ，ＣｌａＩ，ＥｃｏＲＩ，ＥｃｏＲＶ，ＭｌｕＩ，ＰｓｔＩ，ＰｖｕＩ，ＳａｃＩ等９种限制性内切酶进行酶切分析。共识别了１７个酶切位点。经测算福建黄兔ｍｔＤＮＡ的分子量约为１８．４５Ｋｂ。     

山羊mtDNA多态性及其起源分化研究

本文用１４种识别６碱基的限制性内切酶ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＫｐｎⅠ、ＰｖｕⅡ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ研究了来自我国１２个省和自治区共计１８个地方山羊品种２１８个体ｍｔＤＮＡ的ＲＦＬＰ,并运用Ｎｅｉ氏公式计算了各限制性类型间的遗传距离Ｐ和群丛遗传多态度π值。结果表明,在研究的所有个体中共检测到４１个酶切位点,１８种限制性态,其中Ｂ     

我国北方部分山羊品种mtDNA遗传多样性

用１２种认别６碱基的限制性内切酶Ａｐａ Ｉ、Ｂａｍ ＨＩ、Ｂｇ１ Ｉ、Ｅｃｏ ＲＩ、Ｅｃｏ ＲＶ、Ｋｐｎ Ｉ、Ｐｖｕ Ⅱ、Ｐｓｔ Ｉ、Ｓａｃ Ｉ、Ｃｌａ Ｉ和Ｘｈｏ Ｉ,研究了我国北方地区９个山羊品种和类群共计１１０个体线粒体ＤＮＡ（ｍｔＮＤＡ）的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）,利用Ｎｅｉ氏公式计算了各基因单倍型间的遗传距离Ｐ、群体遗传多态性π值以及各群体间的净遗传距离,并利用ＵＰＧＭＡ方法对各     

绵羊、山羊和岩羊mtDNA的RFLP及其遗传分化研究

本文用１５种识别６碱基的限制性内切酶ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＣｌａⅠ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨａｅⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｖｕⅡ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ和ＳａｌⅠ对绵羊、山羊和岩羊ｍｔＮＤＡ的限制性片断长度多态性进行了比较研究，以探讨其遗传分化关系。共检测到７５个酶切位点，４１种限制性态型，其中绵羊和山羊、绵羊和岩羊以及山羊和岩羊的共享位点数分别为１５、８和１４，共享     

天蚕、柞蚕线粒体DNA（mtDNA）的限制性酶切电泳图谱

采用差速离心和碱变性法，以９种限制性内切核酸酶对天蚕和柞蚕ｍｔＤＮＡ进行了单酶切分析，发现这两种蚕的ｍｔＤＮＡ在分子长度和酶切类型上存在明显差异。还对天蚕、柞蚕、蓖麻蚕和家蚕的ｍｔＤ－ＮＡ限制性酶切电泳图谱进行了比较研究。     

天蚕、柞蚕线粒体DNA（mtDNA）的限制性酶切电泳图谱

采用差速离心和碱变性法，以９种限制性内切核酸酶对天蚕和柞蚕ｍｔＤＮＡ进行了单酶切分析，发现这两种蚕的ｍｔＤＮＡ在分子长度和酶切类型上存在明显差异。还对天蚕、柞蚕、蓖麻蚕和家蚕的ｍｔＤ－ＮＡ限制性酶切电泳图谱进行了比较研究。     

牦牛mtDNA限制性类型及与其它牛种分化研究

用２０种限制性内切酶分析了２１头牦牛ｍｔＤＮＡ限制性片段长度多态性，通过双酶切制定出春内切酶物理图谱，发现牦牛ｍｔＤＮＡ存在４种限制性类型计算出牦牛与普通牛，瘤牛分化时间大约分别在１．１－２．２，１。０１－２．０１百万年前。     

四川白鹅朗德鹅及杂交后代线粒体DNA多态研究

采用ＲＦＬＰ技术，对四川白鹅和朗德鹅及其杂交后代进行了线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）多态分析，在所使用的１９种限制性内切酶中，有４个酶（ＥｃｏＲＶ，ＨａｅⅡ，ＨｉｎｃⅡ和ＫｐｎＩ）检测出多态，共获得两种ｍｔＤＮＡ单倍型，四川白鹅和以四川白鹅为母本杂交后代ｍｔＤＮＡ为Ｉ型，朗德鹅的ｍｔＤＮＡ为Ⅱ型，以上结果为中国鹅和欧洲鹅存在两种不同起源学说提供了分子遗传学的证据，ＥｃｏＲＶ，ＨａｅⅡ，ＨｉｎｃⅡ和Ｋｐ     

蜜蜂线粒体DNA碱变性提取法

一、前言线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）已被广泛应用于动植物群体遗传学和进化生物学的研究中，并为分子系统学提供了有价值的比较生物学的数据，取得了许多非常有意义的结果。有效的ｍｔＤＮＡ提取方法，无疑是开展这方面研究的前提。而ｍｔＤＮＡ提取实验成功的标志是把染色体ＤＮＡ（即核ＤＮＡ）、蛋白质与ＲＮＡ尽量去除干净，从而获得一定得率和纯度的ｍｔＤＮＡ，以满足ｍｔＤＮＡ用于限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析中的酶切及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）中酶切、拷贝和连接的需要。本试验用碱变性提取法，ＣｓＣｌ超速离心法和蛋…     

大肠杆菌不耐热性肠毒素LT_B基因的克隆及其核苷酸序列分析

用内切酶ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切大肠杆菌质粒ｐＥＷＤ２９９，回收５０５ｂｐ的ＬＴＢ基因片段，再将载体ｐＵＣ１８用ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，最后将ｐＵＣ１８ＤＮＡ与５０５ｂｐ的ＬＴＢＤＮＡ进行连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＳａｃⅠ／ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１。再将ｐＸＬＴ１进行ＥｃｏＲⅠ酶切、大肠杆菌聚合酶ⅠＫｌｅｎｏｗ大片段补平、ＨｉｎｄⅢ酶切处理，然后与用ＨｉｃⅡ和ＨｉｎｄⅢ酶切的ｐＵＣ１８连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＸｂａⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１－１。将质粒ｐＸＬＴ１－１进行核苷酸序列分析，确定了插入的ＬＴＢ基因与载体的连接向位及其全部核苷酸序列     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA酶切图谱分析

选用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＢｇｌⅠ和ＢｇｌⅡ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株与ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４、８、１０、１０、６和７条。各酶切图形、片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔＩ－ＥｃｏＲＩ的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为６、７、９、７、４和１０条，酶切图形和片段大小均与ＡＶ－１２７有很大不同，表明该分离株可能为１株血清型相同而基因组不同的ＥＤＳ－７６鹅腺病毒。     

产蛋下降综合征（EDS—76）病毒DNA酶切图谱分析

选Ｅｃｏ，Ｒｉ，Ｐｓｔ，Ｉ，Ｐｖｕ ＩＩＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，Ｂｇ１Ｉｔ和Ｂｇ１ＩＩＩ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株子ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４，８，１０，１０，６和７条。各酶切图形，片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和Ｐｓｔ－Ｉ－Ｅｃ     

几种鸟类mtDNA限制性酶切图谱的比较研究

本文用５种限制内切酶（ＨｉｎｄⅢ，ＢｇＬＩ，ＰｓｔＩ和ＢａｍＨＩ）初步建立了头鹅、白鹅、火鸡和鹌鹑的肝脏线粒体ＤＮＡ的内切酶图谱。结果表明白鹅和狮头鹅的ｍｔＤＮＡ的酶切图谱极为相似。山鸡、火鸡和鹌鹑的ｍｔＤＮＡ限制性性内切酶图谱之间的差异是很大的，以上事实说明驯化中的鹅类的不同品种间ｍｔＤＮＡ差异不在。而鸡形目中的不同物种间的ｍｔＤＮＡ是有很大的差异的。     

适于家蚕AFLP标记的酶切反应系统

ＡＦＬＰ作为一种新的分子标记技术，其成功的关键依赖于ＤＮＡ的酶解效果，本文使用ＰｓｔＩ、ＴａｑＩ两种限制性内切酶，选用不同的酶切方式与不同的反应离子的组合对家蚕ＢＣ１代基因组ＤＮＡ进行酶切、通过人工接头连接、二次扩增及ＰＡＧＥ电泳、银染检测，结果显示是两酶在２５ｍＭＴｒｉｓ－Ａｃｅｔａｔｅ（ＰＨ７．８）、１００ｍＭＫＡｃ、１０ｍＭＭＧＡｃ２、１ｍＭＤＴＴ反应系统中能得到多态性丰富、重复性好的ＤＮＡ指纹图谱。同时，表明寻求适宜的限制酶缓冲组分是十分重要的。     

四川白鹅郎德鹅及杂交后代线粒体DNA多态研究

采用ＲＦＬＰ技术 ,对四川白鹅和郎德鹅及其杂交后代进行了线粒体ＤＮＡ多态分析。在所使用的１９种限制性内切酶中 ,有４个酶检测出多态 ,共获得两种ｍｔＤＮＡ单倍型 ,四川白鹅和以四川白鹅为母本杂交后代的ｍｔＤＮＡ为Ⅰ型 ,郎德鹅的ｍｔＤＮＡ为Ⅱ型。以上结果为中国鹅和欧洲鹅存在两种不同起源学说提供了分子遗传学的证据。ＥｃｏＲＶ、ＨａｅⅡ、ＨｉｕｃⅡ和ＫｐｎⅠ四种限制性内切酶的两种限制性态型可以作为鉴别两种不同起源家鹅的母系分子遗传标记。线粒体ＤＮＡ在家鹅中也遵循严格的母系遗传。（摘自《畜牧兽医学报》１９９８，…     

嗜水气单胞菌HEC毒素基因的克隆及酶谱分析

嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素是该菌重要的致病因子和保护性抗原。为了解其分子生物学特性，用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取了嗜水气单胞菌Ｊ－１株的染色体，经ＥｃｏＲＩ酶切、琼脂糖凝胶电泳后作Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，用ＤＩＧ标记的ＨＥＣ毒素探针检测，其５．０ｋｂ的酶切片段呈阳性。回收该片段，与ｐＵＣ１９相连，转化大肠杆菌ＪＭ１０９。提取Ｘ－ｇａｌ平板上白色菌落的质粒，经大小比较、ＥｃｏＲＩ酶切分析及ＤＩＧ标记ＨＥＣ毒素核酸探针斑点杂交鉴定，获得ｐＨＥＣ１１等含５．０ｋｂ目的ＤＮＡ片段的重组质粒。ｐＨＥＣ１１质粒经酶切、电泳，证实目的ＤＮＡ片段中含有ＢａｍＨＩ、ＳｍａⅠ、ＰｓｔⅠ及ＰｖｕⅡ等酶切位点，并绘制了其物理图谱。同时还构建了若干亚克隆，为研制嗜水气单胞菌基因工程苗提供了目的基因片段。     

3株减蛋综合征病毒毒株核酸酶切谱分析

选用ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅤ、ＰｖｕⅡ、ＢｇｌⅠ、ＳｍａⅠ和ＰｓｔⅠ等８种限制性内切酶,对不同地区分离的３株减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒进行酶切图谱比较。结果发现３株毒用前６种酶切割后产生的片段数及各片段的大小均相同,而用ＳｍａⅠ和ＰｓｔⅠ切割后,贵州分离毒ＨＳ－１与国际标准毒ＡＶ－１２７、南京他离毒ＧＣ２相比,多出１个片段。表明不同地区ＥＤＳ分离毒的核酸结构基本相同而又略有差异