牦牛肝片吸虫分泌排泄抗原的生化特性和免疫印迹分析

肝片吸虫的分泌排泄抗原（ＥＳ抗原）在诊断及诱导机体产生抗体方面具有重要作用。本文对寄生于牦牛的肝片吸虫ＥＳ抗原的蛋白质组成及其生化特性进行了分析。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳显示ＥＳ抗原共有９条带，主要由１２－２６ＫＤ的小分子量蛋白质组成；糖蛋白及脂蛋白染色后发现ＥＳ抗原中糖蛋白极少，而含有较多的脂蛋白；等电聚焦电泳结果显示ＥＳ抗原有２２条带，几乎全部是酸性蛋白，ｐＩ主要集中在４．２５～５．２５范围内；双向电泳共检出３０个多肽，主要分布在ｐＩ４．５～７．０之间；免疫印迹分析结果表明：ＥＳ抗原中分子量为１６．２ＫＤ～１８．６ＫＤ的蛋白质是主要的抗原成分，其中１７．２ＫＤ多肽具有最强的免疫原性。     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

肝片吸虫成虫抗原蛋白组分的研究

应用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）电泳转移和固相免疫酶测定相结合的酶联免疫印溃技术（ＥＴＩＢ）首次分析了牛肝片吸虫成虫抗原白组分，结果显示：牛肝片吸虫成虫抗原分离出４４条带，经ＥＴＩＢ分析，抗原与阳性血清反应显示１８条带，其中主带有４条，分子量分别为３５、８０、９２和９４ＫＤ。上述蛋白组分有较强的反应性，可用作肝片吸虫的诊断抗原。     

弓形虫病免疫的研究：弓形虫排泄分泌抗原制备及其对怀孕母羊免疫效…

弓形虫ＧＪＳ株速殖子通过传代细胞（ＢＨＫ－２１）培养，制备排泄分泌抗原（Ｅ／ＳＡ），蛋白含量为２．０９５ｍｇ／ｍｌ；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳分析显示２１条区带，分子量在１８～１２０ＫＤ，其中６８ＫＤ为主带，次带７条。用Ｅ／ＳＡ与佐剂（Ｍ－２０６）制备Ｅ／ＳＡ疫苗，对３０只（２公，２８母）弓形虫血检抗体阴性，混群自然交配５０天的适龄健康绵羊随机分组进行免疫，间隔２０天再加强免疫１次。第１组于混群后８     

新城疫—传染性支气管炎—减蛋综合征三联油乳剂苗田间免疫 …

用自制ＮＤ－ＲＩＢ－ＥＤＳ和ＮＤ－ＫＩＢ－ＥＤＳ两种三联油乳剂苗,各免疫产前蛋鸡４批,共１３８５２只,进行田间免疫试验,抽测不同免疫时期鸡血清或蛋黄样品中１６０份,并用９６只随机样鸡进行强毒攻击试验。结果表明：在免疫后的２０￣３４０ｄ,抽测样品中ＮＤ,ＲＩＢ,ＫＩＢ和ＥＤＳ ＨＩ抗体分别处于６．３ｌｏｇ２￣１１．４ｌｏｇ２、６．４ｌｏｇ２￣９．０ｌｏｇ２、６．０ｌｏｇ￣８．９ｌｏｇ、６．３ｌｏｇ￣     

多头纤虫抗原特性的研究——多头绦虫节片抗原及原头节ES抗原的S…

为了探明多头绦虫成虫节片抗原及多头蚴原头节排泄分泌抗原的多肽组分，以供今后在免疫诊断与预防脑多头蚴病的应用，本试验应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ首次分析了多头绦虫成虫节片抗主多头蚴原头节ＥＳ抗原的多肽组分。应用１２．５％凝胶的连续系统，垂直板型电泳，考马斯亮头Ｒ－２５０染色的结果表明，成虫节片抗原共有１６条多肽带，其分子量范围２９￣１５４ＫＤ，其中主带４条，分别为７３，８８，１２８，１３４ＫＤ，原头节ＥＳ抗     

抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的特性鉴定

通过ＳＤＳＰＡＧＥ、免疫印迹和相加ＥＬＩＳＡ分析了五株抗伪狂犬病病毒杂交瘤细胞系所分泌的单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１、３Ｄ１０和１Ｂ５（均为ＩｇＧ１）各自所识别的病毒多肽。结果证明：单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１和３Ｄ１０识别伪狂犬病病毒９７ＫＤ多肽,单抗１Ｂ５识别５４ＫＤ多肽。相加ＥＬＩＳＡ证实单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１和３Ｄ１０识别同一多肽的重叠表位或邻近表位。     

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原的研究：六钩蚴排泄分泌抗原的反应原性

本实验应用体外培养方法制备细粒棘球绦虫六钩蚴排泄分泌（ＥＳ）抗原，应用酶联兔疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）首次对六钩蚴ＥＳ抗原的反庆原性进行了初步分析。以５μｇ／ｍｌ包被反应板分别与已知阳性，阴性血清；人工感染血清；免疫血清；疫区屠宰绵羊血清；肝片吸虫，细颈囊尾蚴以及边虫感染的绵羊添反应，结果表明六钩蚴ＥＳ抗原具有较好的反庆原性。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００层析以抗原有一定的纯化作用。纯化六钩蚴ＥＳ抗原可     

五种旋毛虫抗原对猪的免疫保护作用研究

本实验研究了旋毛虫肌幼虫可溶性粗抗原、排泄分泌抗原（ＥＳ）、表面抗原（ＳＡ）及成虫ＥＳ、ＳＡ５种抗原对猪的免疫保护作用。结果５种抗原对猪均具有一定程度的免疫原性，可诱导猪体产生对攻击感染的抵抗力（减虫率），其中肌幼虫粗抗原为５５．２０％；肌幼虫ＥＳ为４２．５６％，肌幼虫ＳＡ为７２．２１％；成虫ＥＳ为３２．９２％；成虫ＳＡ为４２．１７％。免疫５种抗原后用肌幼虫“Ｂ”抗原、新生幼虫可溶性抗原及成虫可溶性抗原进行ＥＬＩＳＡ检测，均可测出血清抗体应答反应，其中以相应抗原测出的抗体应答较强烈。免疫５种抗原后猪外周血液中Ｂ淋巴细胞减少，Ｔｈ及Ｔｓ增加，Ｔｈ／Ｔｓ比值降低，呈暂时的细胞免疫抑制现象。     

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原（ＥＳＡg）的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人工感染肝 吸虫的山羊血清中特异性ＩgＧ抗体动态变化。ＥＳＡg用量为１３．８ug/孔，抗体稀释１ ０００倍，二抗１：２０００稀释（３．５ug/孔），ＨＲＰ标记的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ＊）工作浓度为１：４０。检测结果表明，２组实验山羊（第１组每只羊口服２００ 个 囊蚴，第２组每只羊口服５００个囊蚴）在感染后第３周血清中的持异ＩgＧ即开始升高最     

胰吸虫与肝片形吸虫成虫抗原的酶联免疫印迹分析

用SDS-PAGE和酶联免疫印迹试验(ELIB)分析胰吸虫成虫(EP）及其与肝片形吸虫成虫(Fh)交叉／共同抗原的分子量和免疫活性。SDS-PAGE结果显示，胰吸虫和肝片形吸虫成虫抗原的多肽均达30余条，EP抗原分子量在123kd以下，主带4条；Fb抗原分子量在83kd以下，主带4条；两者具相同分子量的多肽6条。ELIB结果显示，抗原与同源抗血清呈现颜色较深、数量较多的区带，而与异源抗血清则呈现数量不等的交叉／共同反应区带，表明两虫之间存在交叉／共同抗原性多肽。     

羊脑多头蚴抗原的SDS—PAGE分析

采用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对采自自然感染绵羊脑多头蚴的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原用垂直平板电泳、连续凝胶系统进行了分析。电泳后以考马斯亮蓝Ｒ－２５０染色。结果：头节抗原共２６条多肽带，其分子量范围１７．５￣１４８ＫＤ，其中主带５条，分别为７２、６９、４６、３７和３３ＫＤ；囊壁抗原共２０条多肽带，分子量范围１８￣１２６ＫＤ，其中主带４条，分别为６９、４６、２９和１     

柔嫩艾美耳球虫的抗原分析

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳，免疫印渍技术，用抗柔嫩艾美耳球虫抗体分析了第二代型殖子、子孢子和未孢子化卵囊的蛋白质。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳银染表明第二代裂殖子主要蛋白质为：１７．６ＫＤ，２９．９ＫＤ，３８．９ＫＤ和５３．７ＫＤ，但用抗Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ抗体免疫印渍法检测出的主要抗原为：７８．０ＫＤ，８３．２ＫＤ和９５．５ＫＤ，这说明并不是含量高的蛋白质就是产生抗体的抗原；子孢子蛋白质含     

东毕吸虫抗原特异性的研究：土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原SDS—PA …

为了探明东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分，供今后在免疫诊断和防治东毕吸虫的应用，本试验应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ首次对绒山羊体内寄生的土耳其斯坦东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组进行了分析。结果表明该抗原有１７条多肽带，其分子量范围２５－９３ＫＤ。其中主带７条，分别为２９，３０，３８，４０，６７，７８，９１ＫＤ。     

片形吸虫分泌排泄抗原和虫体抗原的分析

用牛源肝片吸虫（南京）、牛源大片吸虫（广西）和羊源肝片吸虫（实验感染）制备可溶性虫体抗原（BA）和和分泌排泄抗原（ES），以SDS－PAGE电泳分析比较，结果显示，3株虫体可溶性虫体抗原至少有20条以上的主要蛋白条带，分子量集中于10－90KD之间，它们之间无显著差异，而3株分泌排泄抗原蛋白成分较简单，明显可分的条带不超过5条，分子量集中于10－30KD之间，且均拥有26－28KD的蛋白成分，提示该蛋白应为片形吸虫ES抗原的主要免疫成分。     

猪流产鹦鹉衣原体的抗原结构及抗原性和免疫原性分析

本试验用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术对分离自青海、湖北、广西省流产猪的鹦鹉衣原体抗原结构进行分析，发现这些菌株的抗原结构图谱相似，即共同含有主外膜蛋白ＭＯＭＰ和其他一些主多肽。并以Ｄ１３株免疫兔子制备的抗血清作为探针，用免疫印迹试验检查其与各株鹦鹉衣原体抗原分子的反应关系。证实Ｄ１３株的主要抗原３８ＫＤ（ＭＯＭＰ）、６０ＫＤ、８０ＫＤ和１１０ＫＤ具有抗原性，它们可刺激机体产生抗体免疫应答。该抗血清不仅可与     

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌抗原的电泳分析

本文报道了应用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌动虫排泄分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１～８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇ｓ蓝染脂、醋酸ａ－萘酯／坚固蓝染酪酶同工酶，结果肌幼虫ＥＳ抗原分别显示１６，２６、７及０条带；肌幼虫可溶性抗原分别显示２１、３８、４及１１条带。二维电泳后用考马斯亮蓝Ｇ－２５０染色多肤斑点，结果ＥＳ抗原显示多肽斑点６１个；肌幼虫可溶抗原显示１２２个多肽斑点。     

用亲和层析法提取大片吸虫谷胱甘肽转移酶的研究

为了探明大片吸虫谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）的多肽组分和酶活力,以供今后进行ＧＳＴ的免疫原性和各种蠕虫ＧＳＴ的交叉免疫原性的研究,本试验首次用亲和层析法对大片吸虫ＧＳＴ进行提取,用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析了大片吸虫ＧＳＴ的多肽组分,用１－氯－２,４－二硝基苯（ＣＤＮＢ）为底物测定了ＧＳＴ酶活力。电泳染色结果表明,大片吸虫ＧＳＴ至少有２条带,其分子量为２９．９～２４．５ＫＤ,其中主带２条,分别为２８．３、２６．２ＫＤ。酶活力测定结果表明,提取的ＧＳＴ可获得１０．４４μｍｏｌ／Ｌ／ｍｉｎ／ｍｇ以上的酶比活性。     

多头绦虫抗原特性的研究——绵羊免疫后及感染后的抗体消长规律

用多头绦虫原头节，囊壁，囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌（ＥＳ）抗原对绵羊免疫及攻击感染多头涤虫虫卵后的血清进行ＥＬＩＳＡ检测，观察了血清抗体的消长规律，结果表明，绵羊在感染虫卵后第１周即可检测出血清抗体，感染后３～５周抗体效价达峰值，一直持续到试验结束，免疫组绵羊在免疫３次后，血清抗体效价迅速升高，第３次免疫后１～２周达到峰值，且抗体水平明显高于虫卵感染组，在攻击虫卵后抗体效价开始下降，但直到试     

东毕吸虫抗原特异性的研究──土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原SDS-PAGE分析

为了探明东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分,供今后在免疫诊断和防治东毕吸虫的应用,本试验应用ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ首次对绒山羊体内寄生的土耳其斯坦东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分进行了分析。结果表明该抗原有１７ 条多肽带,其分子量范围２５～９３ＫＤ．其中主带７ 条,分别为２９、３０、３８、４０、６７、７８、９１ＫＤ。本试验初步阐明了土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原的多肽组分,为进一步对该病免疫诊断用抗原的分离、纯化,提高抗原的敏感性和特异性奠定了基础