水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原的SDS—PAGE分析

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原的蛋白质组分。采用垂直板型电泳，连续凝胶系统法，以考马斯亮兰Ｒ－２５０染色进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析的结果表明，水牛梭形住肉孢子虫包囊纯化抗原至少由１０种蛋白质组成，分子量范围为１７．５ＫＤ～１３５ＫＤ。其中主要蛋白质组分有５种，分子量分别为１２５ＫＤ、９８ＫＤ、９０ＫＤ、６９ＫＤ及３５ＫＤ。     

梭形住肉孢子虫和巨型住肉孢子虫抗原的免疫特性研究

运用 ＣＩＥ和 ＥＬＩＳＡ对两种住肉孢子虫全包裹抗原及包裹各部分抗原的免疫特性进行了分析研究;结果表明;两种住肉孢子虫与同种或异种住肉孢子虫阳性血清具有强烈的交叉反应,包囊各部分抗原以缓殖子抗原免疫反应最强．     

棱形住肉孢子虫和巨型住肉孢子虫抗原的免疫特性研究

动用ＣＩＥ和ＥＬＩＳＡ对两种住肉孢子虫全包裹抗原及包裹各部分抗原的免疫特性进行了分析研究。结果表明：两种住肉孢子虫与网种或异种住肉孢子虫阳性血清具有强烈的交叉反应，各囊各部分抗原以缓殖子抗原免疫反应最强。     

水牛梭形住肉孢子虫抗原的制备及反应原性研究

将制备的水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原及缓殖子抗原，应用血清学试验鉴定了其反应原性。结果表明，水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原，缓殖子抗原与自然感染病牛剖检的阳性吻合率分别为５６％和７１％；水牛梭形住肉孢子虫与黄牛枯氏住肉孢子虫之间有共同抗原成份。     

住肉孢子虫组织石蜡切片过氧化物酶染色检测水牛住肉孢子虫病抗体的研究

本文报告采取自然感染梭形住肉孢子虫包囊的水牛肌肉组织石蜡切片抗原,应用辣根过氧化物酶标记抗体,间接染色法,检测来自我省湘北、湘中地区的75头水牛及5头黄牛血清中的住肉孢子虫抗体,其检出率分别为94.66%和80%。结果表明IIP法对病牛血清中特异性抗体的检出有较高的敏感性和特异性。     

水牛梭形住肉孢子虫抗原的薄层等电聚焦行为分析

应用薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳（ＩＦＥ）对水牛梭形住肉孢子虫（Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）抗原进行了分析。结果表明，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化的包囊抗原在电泳图谱上显示３条相距较近的带，等电点分别为６．３０，６．４５，６．６５；缓殖子纯化抗原仅出现１条带，等电点为６．４０     

巨型住肉孢子虫烯醇酶基因克隆与表达

巨型住肉孢子虫(Sarcocystis gigantea)是羊体内一种常见寄生虫,多寄生于羊横纹肌内形成包囊,导致羊肉大量废弃,给畜牧业带来巨大经济损失。本研究尝试筛选能有效诊断住肉孢子虫感染的抗原。通过免疫印迹及质谱分析筛选到巨型住肉孢子虫候选诊断抗原烯醇酶,利用染色体步移技术扩增两侧翼未知序列并表达重组蛋白。应用生物信息学分析和免疫印迹对该蛋白诊断价值进行评价。结果筛选到的候选蛋白为巨型住肉孢子虫烯醇酶(SgENO),克隆得到1 181 bp的基因并获得重组蛋白rSgENO。对rSgENO应用进行初步评价,发现其与其他顶复亚门原虫的烯醇酶氨基酸相似性均较高(71%～92.1%),且能被弓形虫和新孢子虫阳性血清所识别,具有交叉反应性。本研究克隆并表达了巨型住肉孢子虫烯醇酶,后期评价发现该重组蛋白与新孢子虫和弓形虫有较强的交叉反应性,不能用于羊住肉孢子虫的血清学诊断,但有成为疫苗候选分子的潜力。     

牛肉孢子虫病研究：流行病学调查与病原种类研究

本文报告1986——1988年对贵州省五地区十个县(市)耕牛肉孢子虫病调查,共剖检水牛155头和黄牛195头。调查肉孢子虫感染情况;对几种住肉孢子虫进行形态观察、测量大小和动物感染试验。结果表明:贵州耕牛住肉孢子虫共有三种,总感染率为89.4%。寄生于水牛的住肉孢子虫有两种,Ⅰ、梭形住肉孢子虫 sarcocystisfusiformis,感染率100%,终宿主为猫,Ⅱ、小型住肉孢子虫 sarcocystis sp,感染率83.9%(与梭形住肉孢子虫混合感染);终宿主为狗。Ⅲ、黄牛一种;枯氏住肉孢子虫 sarcocystis cruzi,感染率81%,终宿主为狗。三种住肉孢子虫以梭形住肉孢子虫感染最严重。患牛全身布满包囊,病变明显而销毁和高温处理的占3.9%。各种感染程度分别为:轻度占62%,中度占24%,严重占14%。包囊在牛体内的分布以食道最多,为100%,颈肌次之,为73.5%,舌肌和背肌均为40%,心肌未见有此种包囊。三种住肉孢子虫以梭形住肉孢子虫的包囊最大,平均9×3.5毫米,孢子囊较小,平均13.4×7.8微米,慢殖子平均14.4×5.5微米。小型住肉孢子虫和枯氏住肉孢子虫两者相似,包囊细小,大小分别为1.6×0.17毫米和2×0.16毫米.慢殖子大小为13.8×6.7微米和13.87×4.93微米,孢子囊大小为15.81×10.33微米和15.75×10.22微米。猫感染梭形住肉孢子虫排囊前期6—7天,排囊持续2—22天,狗感染小型住肉孢子虫排囊前期为8天,持续1—20天;狗感染枯氏住肉孢子虫排囊前期为10天,持续1—10天。兔感染各种住肉孢子虫均未获得成功。对本病的防治方法文内提出讨论建议。     

绵羊3种胞内寄生原虫感染情况调查

为了解绵羊住肉孢子虫、新孢子虫和弓形虫流行情况,从河南省焦作市某绵羊饲养村,采集了114个心脏、61个食道肌和131份血清样品。应用镜检法对心脏和食道样本进行住肉孢子虫包囊检测,PCR扩增18S rRNA进行住肉孢子虫虫种鉴定;应用间接ELISA法检测新孢子虫和弓形虫血清抗体。结果显示,分离的住肉孢子虫均为柔嫩住肉孢子虫;住肉孢子虫阳性率为39.47%(45/114),新孢子虫血清阳性率为57.25%(76/131),弓形虫血清阳性率为21.37%(28/131),三者混合感染率为7.89%(9/114)。表明3种原虫感染在该绵羊群体中普遍流行,提示在绵羊饲养时要制定有效的防控措施。     

绵羊肉孢子虫可溶性蛋白抗原的特异性初探

应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分析绵羊肉孢子虫囊壁和不同种肉孢子虫滋养体蛋白带,结果表明:肌肉中消化分离出的羊犬肉孢子虫滋养体和从食道壁上挑出的巨肉孢子虫滋养体均出现三条电泳蛋白带;巨肉孢子虫全虫体可溶性蛋白出现五条蛋白带;巨肉孢子虫囊壁可溶性蛋白出现两条电泳蛋白带;微小住肉孢子虫滋养体可溶性蛋白出现一条电泳蛋白带。用不同种的滋养体可溶性蛋白抗原和巨肉孢子虫囊壁抗原做IHA试验表明:用羊犬肉孢子虫和巨肉孢子虫滋养体可溶性蛋     

青海省共和县藏羊心肌住肉孢子虫的种类鉴定

采用压片镜检法对采自青海省共和县藏羊心肌的住肉孢子虫进行形态观察,发现虫体包囊呈梭型、纺锤形或椭圆形,经HE染色呈蓝紫色,平均大小为50μm～84μm×110μm～180μm。采用PCR对其线粒体细胞色素C氧化酶第一亚基部分序列(pcox1)进行扩增、测序与分析,结果表明,所测样品pcox1的序列长度约为1000bp,与柔嫩住肉孢子虫(Sarcocystis tenella)基因序列的相似性为93.5%～100%,与羊犬住肉孢子虫(Sarcocystis capracanis)的相似性为93.6%～100%;系统发育树显示,试验样品与柔嫩住肉孢子虫和羊犬住肉孢子虫在同一分支。综上结果,表明本次采集自共和县藏羊心肌的住肉孢子虫存在2个种,分别鉴定为柔嫩住肉孢子虫(S.tenella)和羊犬住肉孢子虫(S.capracanis)。     

肝片吸虫分泌排泄抗原及主要多肽对动物模型的免疫保护

体外培养肝片中吸虫成虫，制备收集其分泌排泄抗原（ＥＳ抗原）。通过制备性ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离纯化分泌排泄抗原中免疫印迹信号最强的两种多肽－１８．６ＫＤ和１７．２ＫＤ多肽。用分泌排泄抗原和两种多肽分别对动物模型进行免疫保护性试验。大鼠和家兔经抗原免疫后，口服攻击新鲜活性肝片吸虫囊蚴，攻击感染的第６０天解剖动物，统计活虫数并计算减虫率。试验结果显示：肝片吸虫的ＥＳ抗原和１８．６ＫＤ及１７．２     

辽宁西部地区绵羊住肉孢子虫的分离鉴定与遗传进化分析

试验旨在确定辽宁西部地区绵羊住肉孢子虫的虫体种类和遗传进化关系,采集绵羊膈肌样品23份,采用压片镜检法检测分离虫体并进行初步鉴定,对分离虫体的线粒体细胞色素C氧化酶第一亚基（cox1）基因部分序列（pcox1）进行PCR扩增,将测序结果与GenBank登录的其他绵羊住肉孢子虫进行序列同源性分析并构建系统发育进化树。结果显示,从23份绵羊膈肌样品中分离到11株住肉孢子虫,11株住肉孢子虫的pcox1序列长度基本一致,约为397 bp;与GenBank登录的2株柔嫩住肉孢子虫（Sarcocystis tenella）的同源性最高,分别为96.2%～99.7%和94.4%～97.9%;系统进化树分析显示,全部样品与柔嫩住肉孢子虫属同一分支,种内差异（0～5.8%）远小于种间差异（11.3%～35.5%）。研究表明,从辽宁西部地区分离到的绵羊住肉孢子虫均为柔嫩住肉孢子虫。     

水牛梭形肉孢子虫病的调查

<正> 肉孢子虫是一种双宿主生活环的寄生原虫,据沈永林等(1986)试验,水牛梭形肉孢子虫其终宿主为猫。近年来鼠害严重,养猫数增加,有利于梭形肉孢子虫病的流行。Acha-thame(1983)以梭形肉孢子虫的孢子囊每     

肝片吸虫成虫抗原蛋白组分的研究

应用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）电泳转移和固相免疫酶测定相结合的酶联免疫印溃技术（ＥＴＩＢ）首次分析了牛肝片吸虫成虫抗原白组分，结果显示：牛肝片吸虫成虫抗原分离出４４条带，经ＥＴＩＢ分析，抗原与阳性血清反应显示１８条带，其中主带有４条，分子量分别为３５、８０、９２和９４ＫＤ。上述蛋白组分有较强的反应性，可用作肝片吸虫的诊断抗原。     

牦牛肝片吸虫分泌排泄抗原的生化特性和免疫印迹分析

肝片吸虫的分泌排泄抗原（ＥＳ抗原）在诊断及诱导机体产生抗体方面具有重要作用。本文对寄生于牦牛的肝片吸虫ＥＳ抗原的蛋白质组成及其生化特性进行了分析。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳显示ＥＳ抗原共有９条带，主要由１２－２６ＫＤ的小分子量蛋白质组成；糖蛋白及脂蛋白染色后发现ＥＳ抗原中糖蛋白极少，而含有较多的脂蛋白；等电聚焦电泳结果显示ＥＳ抗原有２２条带，几乎全部是酸性蛋白，ｐＩ主要集中在４．２５～５．２５范围内；双向电泳共检出３０个多肽，主要分布在ｐＩ４．５～７．０之间；免疫印迹分析结果表明：ＥＳ抗原中分子量为１６．２ＫＤ～１８．６ＫＤ的蛋白质是主要的抗原成分，其中１７．２ＫＤ多肽具有最强的免疫原性。     

猪流产鹦鹉衣原体的抗原结构及抗原性和免疫原性分析

本试验用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术对分离自青海、湖北、广西省流产猪的鹦鹉衣原体抗原结构进行分析，发现这些菌株的抗原结构图谱相似，即共同含有主外膜蛋白ＭＯＭＰ和其他一些主多肽。并以Ｄ１３株免疫兔子制备的抗血清作为探针，用免疫印迹试验检查其与各株鹦鹉衣原体抗原分子的反应关系。证实Ｄ１３株的主要抗原３８ＫＤ（ＭＯＭＰ）、６０ＫＤ、８０ＫＤ和１１０ＫＤ具有抗原性，它们可刺激机体产生抗体免疫应答。该抗血清不仅可与     

水牛试验性枯氏住肉孢子虫病血尿的临床检查与贫血机理的探讨

<正> 前言贫血是家畜住肉孢子虫病最典型的临床症状,通常呈现严重的急性正细胞,正色素性贫血,关于贫血的原因尚不十分清楚.Frelier 1984认为是免疫性血管外溶血和广泛性血管内消耗性凝血所致,但Fayer和Prasse 1981.Mahaffey等1986做Combs试验多数显阴性反应;Collery1987报道属非应答性贫血;许多人认为是广泛性出血所致.有的则持否定态度.住肉孢子虫病白细胞的变化报道不一,Frelier 1980,1984,Dessouky等1984分别报道黄牛枯氏住肉孢子虫病和水牛梭形住肉孢子虫病的白细胞变化,几乎呈现相反的结果.Fayer等1979报道牛枯氏住肉孢子虫病尿中离子等生化指标变化显著.作者近来发现枯氏住肉孢子虫在湖南水牛广泛寄生,为了弄清该虫对水牛的危害,澄清住肉孢子虫病血液学方面不清楚的问题,特进行本试验研究。     

猪生殖-呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋白分析

本研究主要对猪生殖呼吸道综合征（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ） 国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇（ Ｐ Ｅ Ｇ６０００） 沉淀和差速离心法粗提了经 Ｍａｒｃ１４５ 细胞系增殖的猪生殖呼吸道综合征病毒（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ） 。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ, 经免疫电镜观察纯化病毒, 发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为４２ ～７８ｎｍ 的病毒粒子周围。经 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测定纯化病毒的滴度可达１ １６００ 以上, 并利用 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 两种方法对国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 与欧洲型（ Ｌｅｌｙｓｔａｄ） 、美洲型（ Ｖ Ｒ２３３２） 等参考毒株的病毒结构蛋白组成和部分抗原特性进行了初步的研究。测得国内分离毒株主要结构蛋白的分子量为１４５ Ｋ Ｄ,１９２ Ｋ Ｄ 和２６３ Ｋ Ｄ, 并均能被 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 的高免血清识别, 这与国外的同类报道很相似。     

大肠杆菌和肺炎克雷伯氏杆菌表面抗原的研究

采用热抽提和ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理种方法提取大肠杆菌ＥＬ０－１株和肺炎克雷伯氏杆菌ＥＬ－２株表面抗原，经胃蛋白酶处理，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析表明，ＥＬ－１，ＥＬ－２株主要表面抗原耐热，对胃蛋白酶不敏感，分子量分别是２０ＫＤ，３３ＫＤ和３６ＫＤ，４３ＫＤ，其抗原成分是多糖或多糖－磷脂和蛋白质的复合物。